Градиентное элюирование форма градиента

Градиентное элюирование в жидкостной хроматографии играет такую же роль, что и программирование температуры в газовой хроматографии. Основное назначение обоих способов — получение хорошего разделения за возможно более короткое время, при этом форма (и ширина) пиков практически одинакова на всем протяжении разделения при правильном выборе градиента. Состав растворителя и форму градиента подбирают в соответствии с поставленной задачей и составом разделяемого образца. [c.40]

В этой книге не дается метода расчета градиентов. Состав элюента при линейном градиентном элюировании легко рассчитать по параллелограммам, которыми форма градиента представлена на выходной ленте самописца (хроматограмме). Под- [c.60]

Прежде чем перейти к вопросу о выборе аппаратуры для градиентного элюирования, мы рассмотрим ряд вопросов. Может ли быть достаточно универсальным оборудование для градиентного элюирования, чтобы создавать градиенты любой формы, включая ступенчатый градиент Если требуется только простая форма градиента, аппаратура может быть сильно упрощена. Будет ли градиентное оборудование совместимо с используемой системой детектирования Многие детекторы, особенно те, в которых измеряется общее свойство подвижной фазы, трудно использовать с градиентным устройством. Зависит ли тип градиента от того, какой насос используется Будет ли требоваться дополнительный насос При выборе насоса для жидкостной хроматографии необходимо-учитывать, будет ли прибор использоваться для опытов с градиентным элюированием. [c.65]

Развитием метода ступенчатого элюирования является градиентное элюирование. Этот способ отличается от метода ступенчатого элюирования лишь тем, что состав элюента изменяется в течение опыта не скачками, а постепенно. Использование специальных смесителей позволяет варьировать состав элюента в ходе элюции разнообразными способами, создавая в колонке градиенты концентрации и pH любой заранее заданной формы. Время элюции нри таком способе хроматографического разделения значительно сокращается, зоны веществ, двигающихся последними, размываются не сильнее, чем зоны быстро двигающихся веществ. Разделение веществ методом градиентного элюирования может быть полностью автоматизировано [ ], так же как и разделение методом ступенчатого элюирования [ ]. Автоматические жидкостные хроматографы, служащие для этой цели, в настоящее время выпускаются промышленностью. Подробное описание аппаратуры и методик, используемых при ступенчатой и [c.330]

В хроматографе предусмотрено использование колонок двух типов стеклянных с внутренним диаметром 1—1,5 мм, рассчитанных на работу при давлении до 1,5 МПа и создание полностью инертной хроматографической системы, и из нержавеющей стали длиной 60 и 120 мм с внутренним диаметром 2 мм. Все соединительные линии в хроматографе выполнены из толстостенных фторопластовых капилляров, на конце имеющих развальцовку, по которой и производится уплотнение при низком давлении используются капилляры из полиэтилена. Шприцевой насос Милихром имеет привод от шагового двигателя, что позволяет не только обеспечить высокую воспроизводимость времени удерживания и количества вводимой пробы, но и формировать при необходимости в камере насоса градиент растворителя заданной формы и осуществлять градиентное элюирование сложных по составу смесей веществ. Предусмотрена также работа Милихрома с микроколлектоРОМ фракций, обеспечивающим сбор микрофракций для последующей идентификации другими физико-химическими методами. [c.64]

Успешное масштабирование градиентных систем требует просто разумного подхода с учетом некоторых рекомендаций, предложенных в этой главе для изократического и ступенчатого градиентного препаративного ЖХ-разделения. Следует позаботиться о воспроизводимости наклона или формы градиента, учитывая любые различия в геометрии колонки (длина, объем), химическую природу насадки (разд. 1.5.1), способ создания градиента, характеристики предколоночного смесителя и объем задержки градиента. Во всех случаях разделения основываются на коэффициенте распределения компонента между неподвижной и подвижной фазами (к или йщ). Непрерывный градиент изменяет значение к известным образом по зависимости, аппроксимируемой серией небольших изократических ступеней. Увеличивающаяся сила растворителя в течение элюирования сжимает полосу образца. Результатом этого являются узкие пики и уменьшение хвоста пика даже прн условии больших [c.69]

При разделении оснований, нуклеозидов и нуклеотидов используют различия в константах диссоциации рКа, табл. 37.5), коэффициентах распределения, в форме и размерах молекул. В качестве сорбента обычно используют синтетические иониты [32, 33] в сочетании с градиентным элюированием [34, 35]. При анализе последовательности нуклеотидов в нуклеиновых кислотах олигонуклеотиды—-продукты ферментативного гидролиза нуклеиновых кислот — разделяют на ионитах на основе целлюлозы или геля декстрана [36, 37] в градиенте pH и ионной силы в присутствии мочевины [38]. [c.40]

Устойчивость комплексов, образуемых борат-ионами с сахарами и полиолами, зависит от различных структурных факторов, которые обусловлены числом соседних ис-гидроксиль-ных групп, а также от экспериментальных условий, в частности от pH и ионной силы среды и концентрации в ней борат-ионов. Первые сообщения о разработке метода разделения смесей сахаров на сильноосновной анионообменной смоле дауэкс 1 в боратной форме в ступенчатом градиенте pH (от 8 до 9) и концентрации боратного буфера появились около 30 лет назад [70, 71]. В дальнейшем этот метод нашел применение для фракционирования полиолов [72]. Однако предложенные первоначальные условия не обеспечивали удовлетворительного разделения, а время анализа составляло примерно 60 ч. Данный метод обычно не находил применения в качестве аналитической методики до тех пор, пока интенсивные исследования влияния различных факторов, в частности температуры, ионной силы буфера и размера частиц смолы, на эффективность и скорость хроматографии не привели к значительному улучшению характеристик разделения. Использование смолы со средним размером частиц 20 мкм и подогрева колонки до температуры 50°С при градиентном элюировании буферами с увеличивающейся концентрацией бората (0,1—>-0,2 М) и хлорида (О—>-0,2 М), [c.21]

Элюирование вируса. Вирус начинают элюировать после полного насыщения обменника вирусом и последующего удаления примесей и неадсорбировавшегося вируса пропусканием через колонку 0,05 М фосфатного буфера, при pH 7,0 (примерно 50 мл буфера на 1 г обменника). Для этого колонку присоединяют к градиентному аппарату. Такой прибор можно легко собрать из лабораторной посуды. На рисунке 12 показана схема некоторых градиентных устройств и форма получаемых градиентов. Наиболее часто используется линейный и экспоненциальный градиент. В сосуд помещают 0,05 М фосфатный буфер, содержащий 1 М Na l при pH 7,0, а в смеситель — равный объем 0,05 М фосфатного буфера при pH 7,0. Жидкость в смесителе перемешивается с помощью магнитной мешалки и из него поступает в колонку, [c.114]