Элюирование в градиенте

Градиентное элюирование можно осуществлять тремя способами 1) увеличивать молярность элюента при постоянном pH, 2) менять pH элюента при постоянной молярности, 3) вести элюирование в градиенте как pH, так и молярности элюента. [c.212]

Элюирование в градиенте является удобным методом поиска оптимальных условий разделения сложной смеси. В этих условиях белки либо сорбированы на ионите, либо вообще не удерживаются матрицей, т. е. Rf может принимать значения либо О, либо 1 [19]. Поиску оптимальных условий элюирования может способствовать тот факт, что белки, сорбированные на карбоксилсодержащих ионообменниках, элюируются при ионной силе примерно 0,1 буферным раствором, значение pH которого отличается от изоэлектрической точки белка на 0,4—0,6 [20]. [c.436]

Элюирование в градиенте этанола (О—50%) [c.118]

Описаны многочисленные колоночные и хроматографические методы фракционирования (элюирование в градиенте температуры и растворителя, прямая экстракция, селективное осаждение с последующим элюированием, адсорбционная и гелевая хроматография и т. д.), позволяющие осуществить разделение не только по молекулярным весам, но также по степени разветвленности макромолекулы, химическому составу и структуре. При применении таких методов, которые могут быть частично автоматизированы, можно проводить [c.418]

При элюировании в градиенте концентрации буфера и при изменении концентрации детергента в элюенте на объем капли влияет изменение плотности и поверхностного натяжения элюата. При необходимости в этом случае следует вводить определенную поправку. Некоторые модели коллекторов снабжены микропереключателем, подающим электрический импульс при достижении заданного числа фракций. Этот сигнал используют для смены элюента или изменения температуры в колонке. В случае необходимости такое устройство можно изготовить в лаборатории. Переключатель устанавливают на корпусе коллектора под фотоячейкой для отсчета капель. Он включается при помощи штырька, закрепленного на соответствующей пробирке. [c.312]

Индолы с кислотными свойствами разделяли также в виде метиловых эфиров элюированием в градиенте [117]. Этот вид хроматографии в сочетании с ТСХ ( -гексан— -бутанол, 3 1) служит удобным методом получения очень чистых образцов индолов, которые можно непосредственно анализировать методом газожидкостной хроматографии. Хорошие результаты по разделению кислотных и нейтральных производных индоламина получены на сефадексе LH-20 в системе 1,2-дихлорэтан—метанол [118]. Для изучения метаболизма соединений этого ряда in vitro и in vivo и для выделения продуктов обмена применяют следующий метод. [c.139]

A. Проводились исчерпывающий диализ 0,5 мл экстракта фермента, силсржащеги 40,5 Е фосфофруктокиназы и 10 Е или 9,9 мг/мл алкогольдегидрогеназы, против 10 мМ фосфата (pH 6,5). содержащего 0,2 моль/л КС (этот буфер был также использован для уравновешивания), и адсорбция на колонке с АМР — сефарозой. Затем матрица последовательно промывалась а) уравновешивающим буфером (24 мл) б) 5 мМ NADH в том же буфере (5 мл) в) буфером (5 мл) г) 5 мМ. МР-ЬБ м.М.. Mg2-I- в буфере (5 мл). Скорость потока 0,4 мл/мин, . Элюирование в градиенте концентрации K I в условиях, описанных выше (А). После адсорбции колонка промывалась 20 мл 10 мМ фосфатом (pH 6,8), содержащим 0,2 моль/л КС . Линейный градиент концентрации (0,2—0,8 моль/л) КС создавали в том же буфере объем [c.112]

Фракционирование элёктрофокусированием основывается, по-видимому, исключительно на различии в изоэлектрических точках, Большинство других методов используют различие в одном или нескольких иных свойствах, например растворимости, размерах, форме или заряде молекул. (Исключение составляют элюирование в градиенте pH на ионообменниках [119] и электродекантация [120].) Поскольку при разделении белков электрофокусированием используются различные свойства этих соединений, можно надеяться, что набор разделяемых компонентов в этом случае будет иным, чем при разделении другими методами. Иногда так и получается [30, 88, 94], но не в случае сходных белков, например изоферментов [25, 26, 32]. [c.337]

Сравнение этого метода фракционирования с другими затруднено, так как некоторые из них не совсем надежны. Сопоставление результатов различных методов фракционирования для полиэтилена высокой плотности было проведено Гийе с сотр. [39], а также Девисом и Тобиасом [44], фракционировавшими полипропилен тремя способами (фракционирование на колонке, фракционное осаждение и фракционное растворение). Как показал Холл [7], аналогичные результаты получаются и при фракционировании полистирола низкого молекулярного веса методами осаждения, экстракции из пленок по Фуксу и элюирования в градиенте температуры. [c.370]

Центрифугирование 30 мин, 16 000 g, осадок растворить в 0,001 М ацетатном буфере, pH 4,6. Ионообменное хроматографирование на ДЭАЭ-сефадексе А-50 ацетатный буфер + Na l (0,2—0,6 М). Хроматографирование на СМ-сефадексе С-50 (3X50 см), 0,05 М ацетатный буфер. pH 4,8. Элюирование в градиенте pH 4,6—5,0 того же буфера. [c.83]

Удаляют примесь IgG из элюированной в градиенте фракции на колонке с протеин А-сефарозой L-4B (Pharma ia). При этом связываются все молекулы IgG, за исключением подкласса IgGs. Маловероятно, что антитела данного под- класса существенно загрязняют получаемый иммуноглобулин, поскольку п редставляют собой лишь незначительную часть молекул IgG в нормальной сыворотке. В сыворотке больного, содержащей миеломные IgA, IgD или IgE, его содержа- [c.108]

Принципиальной основой ионообменной хроматографии является то, что сродство вещества к ионообменнику зависит от электрических свойств его самого и относительного сродства других заряженных веществ, находящихся в растворителе. Следовательно, связанное вещество можно элюировать с помощью изменения pH до значения, изменяющего заряд вещества, или добавлением конкурирующего вещества, одним из примеров которого могут служить соли. Поскольку различные вещества обладают разными электрическими свойствами, условия элюирования будут меняться для каждого вида связанных молекул. В общем, для получения хорошего разделения следует выбрать либо непрерывное элюирование в градиенте ионной силы, либо ступенчатое элюирование, (Градиент только pH не используют по причине трудности создания его без одновременного увеличения ионной силы.) При хроматографии на анионитах постоянно повышают либо pH и ионную силу, либо только ионную силу элюента. Хроматографию же на катионитах проводят как в градиенте pH, так и в градиенте ионной силы элюирующего буфера. На практике выбор условий элюирования проводится методом проб и ошибок с учетом условий стабильности анализируемого вещества. Напри- [c.211]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология