Хроматография скорость элюирования

В работах по гелевой хроматографии скорости элюирования составляют 1 мл/мин. Обычно указывают [17], что скорость элюирования влияет на степень разделения, изменяя число теоретических тарелок в колонке, но [c.108]

Преимуществом колоночной хроматографии является возможность количественного фракционирования больших количеств веществ без превращения их в какие-либо производные. Однако хорошее разделение часто возможно лишь при малых скоростях элюирования, поэтому были разработаны новые виды колоночной хроматографии. Методы аффинной и адсорбционной хроматографии основаны на избирательной адсорбции молекул на нерастворимом адсорбенте, который содержит группы (молекулы), специфически взаимодействующие с молекулами подлежащих очистке соединений, например ингибиторы (для очистки ферментов) или антитела (для очистки антигенов) в настоящее время эти методы нашли широкое применение и для разделения углеводов. Невзаимодействующие с адсорбентом примеси удаляются, а связанный с адсорбентом сахар затем десорбируют способом, не приводящим к его разрушению. Десорбцию можно осуществить, изменяя pH, ионную силу среды или применяя соответствующий ингибитор взаимодействия, удерживающего вещество на адсорбенте. Для разделения ряда полисахаридов были использованы иммобилизованные формы (см. разд. 26.3.7.6) конканавалина А [40], являющегося фитогемагглютинином (лектином), который специфически взаимодействует с разветвленными полисахаридами определенного строения в настоящее время применяют и другие иммобилизованные фитогемагглютинины. Колоночная хроматография на носителях, покрытых полиароматическими соединениями [41], также находит применение для разделения полисахаридов. Благодаря достижениям в производстве носителей для жидкостной хроматографии под высоким давлением можно осуществить хроматографическое разделение быстро и избирательно описаны методы фракционирования небольших олигосахаридов, продолжающегося менее 1 ч [42]. [c.224]

Разделение разнообразных смесей неорганических ионов трудностей не вызывает и осуществимо в самых разных системах ионообменной хроматографии. Методы эти известны давно, однако до последнего времени они имели довольно ограниченное аналитическое применение. Это объясняется относительно невысокой скоростью элюирования, значительным размыванием хроматографических зон на ионообменных сорбентах. Трудности вызывает также детектирование ряда ионов. В последние годы значительное развитие получила ионная хроматография. Хотя этот термин стал общепринятым, мы считаем, что он не вполне удачен, так как характеризует объект анализа и поэтому не согласуется с принятой классификацией хроматографических методов. С точки зрения этой классификации все разделения, которые происходят в ионном хроматографе есть ионообменная хроматография в несколько новых условиях реализации процесса. Рассмотрим некоторые типичные варианты анализа ионов [86, 87]. [c.326]

Обычно растворы полимеров, используемые в гель-проникающей хроматографии, сильно разбавлены (с = 0,1%). Поэтому в типовых ГПХ-анализах не наблюдается зависимости получаемых результатов от концентрации раствора. Однако при исследовании концентрированных растворов такую зависимость удается наблюдать [73—76]. Оказывается, что при достаточно больших концентрациях раствора (с = 1%) с ростом концентрации уменьшается скорость элюирования макромолекул (т. е. им соответствуют большие удерживаемые объемы). Эта зависимость может быть объяснена следующим образом. [c.118]

Хроматографией. Поскольку показано, что скорость элюирования полимеров пропорциональна их молекулярному весу, можно решить обратную задачу — на основании объема выхода оценить молекулярный вес. Этот аналитический вариант гель-хроматографии нашел столь широкое применение, что его следует рассматривать отдельно под названием определение молекулярного веса. Наконец, существует еще один вариант метода, в котором различия в молекулярном весе имеют гораздо меньшее значение, чем взаимодействие разделяемых веществ с гелем он рассматривается в специальном разделе под названием разделение веществ с одинаковым молекулярным весом. [c.135]

Следует указать также, что приведенное на рис. Х1И.29 время анализа не типично для флюидной хроматографии. Обычно достигаются скорости элюирования, сравнимые со скоростями для газовой и жидкофазной хроматографии (рис. ХП1.30). [c.410]

Надо отметить, что механизм гелевой хроматографии представляет собой ряд сложных явлений, часть которых недостаточно исследована и находится в процессе изучения. Недавно выяснилось, что вопреки первоначальным наблюдениям удерживаемые объемы макромолекул зависят не только от их размеров и пористости геля, но и от скорости элюирования, температуры колонок и величины образца Результаты этих исследований пока не учитываются ни в одной из теоретических работ по гелевой хроматографии, которые используют распределение пор в геле или различия в коэффициентах диффузии макромолекул. Очевидно, только сочетание этих подходов с учетом зависимости скорости диффузии макромолекул от пористости геля позволит выяснить физическую картину, лежащую в основе процесса гелевой хроматографии, а это в свою очередь дает возможность превратить гелевую хроматографию в абсолютный метод, не требующий калибровки. Тем не менее необходимо отметить полезность работ феноменологического характера, которые позволяют производить коррекцию гелевых хроматограмм с учетом диффузионных факторов размывания и использовать для этих целей вычислительную технику. [c.111]

Расщепление рацематов а-аминокислот и миндальной кислоты лигандной хроматографией на колонках (диаметр 9 мм, длина 420 мм с сорбентами на основе -пролина (I) и -оксипролина (П), скорость элюирования 10 мл час 163] [c.31]

Скорости элюирования в ионообменной хроматографии [c.279]

Механизм и природа явлений, происходящих в процессе жидкостной ситовой хроматографии, еще не вполне установлены. Особенность ситовой хроматографии заключается в малой зависимости удерживаемого объема от скорости элюирования и от температуры. Существующие теории ситовой жидкостной хроматографии принимают во внимание эту особенность, найденную на основании ряда исследований. [c.426]

Смолы, применяемые в распределительной хроматографии, представляют собой сильноосновные аниониты или сильнокислые катиониты, основу которых составляет сополимер стирола и дивинилбензола (например, дауэкс Х-8). В аналитических колонках, диаметр которых равен 2—6 мм, а скорости элюирования высокие (8—20 мл-см - мин ), рекомендуется использовать мелкозернистые смолы с размером частиц 8—13 или 10—15 мкм. Для препаративного разделения сахаров на широких колонках (диаметр 12—25 мм) и при меньшей скорости элюирования (1—5 мл-см -мин- ) можно применять более грубые смолы. [c.60]

Благодаря высокой чувствительности детекторов, применяемых в современных жидкостных хроматографах, для анализа достаточно нескольких микролитров вещества. Разделение осуществляется в короткие промежутки времени за счет использования колонок малых размеров и высоких скоростей элюирования (давления на входе в колонку до нескольких сотен атмосфер). При применении некоторых типов детекторов (спектрофотометрических, транспортных и др.) можно управлять ходом разделения путем регулируемого изменения температуры, давления или состава элюента в ходе анализа. Программируемое изменение состава элюента (градиентное элюирование) плодотворно реализовано, например, в уже отмечавшейся методике ЛЭАХ [123, 124] (см. рис. 1.1). На применении транспортного детектора и смеси трех растворителей в качестве подвижной фазы основан способ [c.33]

Одним И.З лидеров гю производству хроматографических колонок для иопоэксклюзионной хроматографии является компания Phenomenex (США). Колс)Нки марки Rezex ROA (300 х 7.8 мм, степень сшивки - 8%) широко используются на территории РФ для анализа пищевой продукции. Характерными особенностями колонок данного типа являкугся использование низких линейных скоростей элюирования (U.5 - 0.8 мл/мин) и необходимость избегать использования сильных кислот и оснований, а также органических [c.88]

При хроматографировании на ионитах скорость элюирования обычно значительно меньше, чем при адсорбционной хроматографии. При препаративном разделении на синтетических ионитах объем буферного раствора, протекающего через колонку за 1 час, приблизительно равен 20—50 (> объема колонки. При хроматографии высокомолекулярных веществ на модифицированной целлюлозе скорость протекания элюата составляет приблизительно 5 мл1час на каждый сечения колонки. Более мед- [c.556]

Изотермическая ГХ и ГХ с программируемой температурой Коэффициент распределения, описываемый в газо-жидкостной хроматографии ч ез объемы (ур. 5.2-4), зависит от температуры, как и любая константа равновесия. Объемы уд живания также зависят от давления пара соединений (ур. 5.2-8). Повышение температуры вьоывает увеличение давления пара и, следовательно, ведет к более высокой скорости элюирования. Эта корреляция определяется зависимостью Кл узиуса—Клайперона. В интегральной форме она представляется следующим образом [c.260]

Хроматограф Du Pont, колонка 4,6 250 мм, Zorbax ODS, 5 мкм, подвижная фаза - градиент от 20 до 40 % МеОН в 1,5 % АсОН за 60 мип, температура колонки 45 С, скорость элюирования 1 мл/мип. УФ-детектор 275 им (А) и 375 им (Б). [c.141]

Хроматография. Фракционируемый материал растворяют с таким расчетом, чтобы 15 мг содержалось примерно в 30—40 мл растворителя, pH раствора подводят до 5—6 и раствор медленно наносят на колонку. После нанесения образца через колонку пропускают равный объем дистиллированной воды, а затем начинают элюирование 0,1 н. НС1. Скорость элюирования должна быть примерно вдвое меньше скорости нанесения фракционируемого материала. Вытекающий с колонки элюат собирают фракциями в пробирки по 1 мл. За ходом элюирования можно следить с помощью нингидриновой реакции, которую ставят с аликвотами фракций на фильтровальной бумаге начиная с 11-ой пробирки 1 каплю каждой фракции [c.195]

Определения скорости элюирования зоны и коэффициента емкости колонки в газоадсорбционной хроматографии такие же, как в газожидкостной хроматографии. Что касается коэффициента емкости колонки, это объясняется тем, что ири обычных для ГХ низких давлениях газ-носитель практически не адсорбируется адсорбентом, используемым в качестве неподвижной фазы. Поэтому в первом ириблин<ении поверхность адсорбента свободна и нет конкуренции молекул газа-носителя с компонентами пробы за адсорбент ситуация очень отличается от того, что мы имеем в жидкостной хроматографии. Соответственно в ГАХ не существует реальной тр Дности в определении времени задержки газа (т. е. времени удерживания инертного, неудерживаемого, вещества) и в нахождении подходящего вещества-метки для измерения to. Однако следует заметить, что [c.97]

Удачным усовершенствованием аппаратуры жидкостной колоночной ( каскадной ) хроматографии является предложенная в работе [472] и-образная колонка, одна ветвь которой состоит из ряда (до 10) последовательно соединенных стеклянных секций размером 50 к 18 мм, а другая — из стеклянной трубки, соединенной с капельной воронкой. Для более точного регулирования скорости элюирования высоту верхней, не заполненной адсорбентом секции подбирают так, чтобы она находилась на уровне жидкости в капельной воронке. Подача разделяемых веществ и смеси хлороформ—этанол (в соотношении от 100 1 до 100 3) по длине слоя окиси алюминия I степени активности снизу вверх позволила эффективно разделить сложную смесь, состоящую из оксиэтилированных алкилфенолов, аминов, амидов жирных кислот и полиэтиленгликолей. [c.239]

После окончания элюирования колонки разъединяют. На вторую колонку подают 150 мл бензола (та нее скорость элюирования) для вымывания углеводородной части при комнатной температуре и элюат собирают в колбу со шлифом. Адсорбированные анионитом жирные кислоты и (или) оксикислоты вымывают 1 н. раствором уксусной кислоты в этаноле и отбирают во вторую колбу со шлифом. Первую колонку с дгатионообмбнником промывают 150 мл 10 . соляной кислоты для извлечения связанных катионов. От элюатов отгоняют растворители (бензол, этанол) на водяной бане, остатки выдерживают в вакуум-сушильном шкафу до постоянной массы и взвешивают. Водный раствор хлоридов упаривают до сухого остатка. Полученные фракции углеводородов, жирных кислот и (или) оксикислот и хлориды щелочных металлов анализируют другими методами. В частности, жирные кислоты в виде метиловых эфиров разделяют методом газо-жидкостной хроматографии (см. разд. 1.6.4). В случае присутствия оксикислот проводят дополнительную этерификацию гидроксильных групп, например уксусным ангидридом (см. разд. 1.3.1.2.3). [c.336]

Колонки и детекторы контроль потока подвижной фазы. Для гель-фильтрационной хроматографии с использованием декстрановых гелей обычно применяют простые стеклянные колонки диаметром 2,5 см и длиной 50 см. В таких колонках Уо равен от 50 до 100 мл, а (Уо Уг) —от 200 до 250 мл. Раствор пробы массой несколько миллиграммов вводят в колонку через ее верхнюю часть. Обнаружение зон растворенных веществ по мере их появления из колонки можно проводить посредством спектрофотометрического контроля элюата, измерением его показателя преломления или собирая аликвотные части для дальнейшего анализа. Подвижной фазе позволяют протекать через гeль-ф,ильтpaциoн yю колонну иод действием силы тяжести со скоростью около 3,5 мл/ч на каждый квадратный сантиметр сечения колонки. Так, для колонки диаметром 2,5 см скорость потока равна приблизительно 16 мл/ч, а время, необходимое для элюирования самых малых молекул, составляет около 16 ч. Большая скорость элюирования недопустима, так как мягкий гель деформируется потоком подвижной фазы и колонка выходит из строя (гель выдавливается или же спрессовывается и закупоривает колонку). [c.598]

Товарно-технические качества битума и выбор рациональных способов переработки определяются составляющими его компонентами. Малая изученность тяжелых нефтяных остатков не позволяет предсказывать поведение битумов в условиях практического их использования. Из вакуумных остатков 490—540 и >540°С сборной занадно-сибирской нефти выделены насыщенные углеводороды методом жидкостной адсорбционной хроматографии на силикагеле марки АСК. Элюирование проводили пет-ролейным эфиром (70—100 °С) с отбором проб по 10 мл через каждые 15 мин. Пробы объединялись но показателю преломления (ид до 1,49). Выделенный концентрат насыщенных углеводородов разделяли следующим образом. Нормальные алканы отделены клатратообразованием с карбамидом но ГОСТ 15095— 69. Изопарафино-пафтеновый концентрат разделяли методом гельфильтрационной хроматографии на Sephadex аН-20 [1]. Гель, набухший в течение суток в тетрагидрофуране, переносили в стеклянную колонну диаметром 10 мм и высотой 600 мм. Навеску пробы (0,3—0,5 г) растворяли в 2 мл тетрагидрофурана и вносили в колонну. Устанавливали скорость элюирования [c.135]

В экстракционной хроматографии обычно кинетика экстракции оказывает не очень большое влияние на результаты, а удерживаемые объемы мало зависят от скорости элюирования. Напротив, в системе Д2ЭГФК—НМОз —растворы актиноидов кинетика влияет на значения ВЭТТ [36]. С необычной низкой скоростью достижения равновесия пришлось столкнуться при экстракции [c.123]

НОВ в соответствующие ртутные аддукты. Хроматография аддуктов оказалась возможной или на кремневой кислоте [38], или на дезактивированном флорисиле [39]. Последний метод был особенно пригоден для определения тринасыщенных ацилглицери-нов. В работе [40] описано разделение насыщенных триацилглицеринов на колонке 48,8x9,5 мм, заполненной стирагелем, сшитым полистиролом. В качестве подвижной фазы использовали тетрагидрофуран со скоростью элюирования 0,4 мл/мин. Несмотря на чрезвычайную эффективность колонки, ширина пика была того же порядка, что и разница между временами удерживания триацилглицеринов, отличающихся шестью атомами углерода. На этом примере можно видеть, насколько трудно разделять триацилглицерины природных эфиров. Гель-хроматография, по-видимому, является перспективным методом для анализов смешанных триацилглицеринов [41]. [c.203]

Наиболее быстрым методом разделения ДНФ-аминокислот является хроматография на смеси кремневой кислоты с цели-гом. По данным авторов этой работы, полный анализ может занять не более 2 ч [9]. Большинство коммерческих препаратов кремневой кислоты пригодны для работы без специальной обработки. Для получения удовлетворительной скорости элюирования сорбент смешивают с целитом в весовом соотношении 2 1, а затем отбирают фракцию менее 60 меш. Рекомендуется колонка размером 1—1,4x17 см. [c.365]

Работа выполнялась на жидкостном хроматографе Цвет-304 с УФ-детектором при длине волны 365 нм, колонка 250X4 jmm заполнена силасорб is с размером частиц 7,5 мкм. В качестве элюента применяли 11% (об.) раствор ацетонитрила в водном ацетатном буфере, содержащем около 0,03 М СНз СООМа и 0,015 м СН3СООП (рП 4). Скорость элюирования 1,6 см мин. Содержание витаминов в образцах рассчитывалось по высотам пиков. [c.69]

Сочетание хроматографического разделения соединений и их спектральной идентификации в он-лайновом режиме особенно удобно в связи с переносом очень малых количеств разделенных образцов из хроматографа в измерительную систему спектрометра, тем более, если учесть, что промежуточные манипуляции без потери компонентов, количества которых измеряются несколькими микрограммами, всегда вызывают трудности. Для успешной реализации обоих методов в он-лайновом режиме требуется оптимальное соответствие между концентрацией элюируемого образца и скоростью элюирования хроматографических пиков, с одной стороны, и чувствительностью и скоростью регистрации сигналов спектрометром— с другой. На практике для обеспечения надежной и быстрой [c.246]

Процесс хроматографии пептидов, для регистрации которых использован описанный выше двойной автоматический анализатор, также усовершенствован. Разделение пептидов производят на колонке 100x0,6, наполненной сульфополистиролом с 4% поперечных связей и размером частиц 20—22 мк (Te hni on romobead D) при температуре 38° и скорости элюирования 0,42 мл мин. [c.176]

Дальнейшую очистку проводили на силикагелевой колонке по методике Пауэлла [12]. Для хроматографии использовали стеклянную колонку диаметром 2,4 см и длиной 30 см. Небольшая пробка из стеклянной ваты на дне колонки препятствовала вытеканию силикагеля из колонки. Для набивки колонки брали 20г силикагеля для разделения гидратированного 1 мл 0,5 М. муравьиной кислоты. Силикагель суспендировали небольшим количеством гексана и переносили в колонку. Уплотнение силикагеля проводили ручной грушей до длины силикагелевого слоя в 13 сл. Анализируемый образец после целитовой колонки смешивали с 1 г силикагеля, гидратированного 0,05 мл 0,5 М. муравьиной кислоты (негидрати-рованный силикагель адсорбирует ИУК), и переносили на колонку. Элюирование вели 130 мл 5%-ного раствора бутанола в гексане, также гидратированного 0,5 М. муравьиной кислотой. Скорость элюирования 2—3 мл в минуту. Фракции по 10 мл собирали в колбы и растворитель удаляли. [c.27]

Перед началом исследования образцов полимеров колонки хроматографа градуируют по нескольким эталонным образцам полистирола и полиоксиэтилена с неразветвленной цепью и узким молекулярно-весовым распределением с целью получения зависимости длинч цепи полимера Л (А) от VI (мл). Затем производят ориентировочные быстрые опыты, используя одну колонку 10 А. Эти опыты позволяют выбрать оптимальные условия гелевой хроматографии с использованием одной или нескольких колонок с пористостью, соответствующей молекулярно-весовому распределению полимера. На рис. 9 и 10 сравниваются хроматограммы ориентировочного характера и высокого разрешения для характеристики МВР смеси латексов и полиуретана. В последнем случае отчетливо виден эффект выбора оптимальной хроматографической колонки. Небольшой перегиб у 10 А на колонке 10 А превращается на колонке 10 А в хорошо заметный хроматографический пик у 2> 10 А. Если поддерживать скорость элюирования 1 мл мин, то для получения гелевой хроматограммы на одной колонке требуется 55 мин Поскольку объем подвижной фазы колонки составляет 25 мл, первая фракция полимера появится через 25 мин после начала хроматографии. Соответственно для завершения гелевой хроматографии на четырех последовательно соединенных колонках необходимо 4 час, и первая фракция полимера появится спустя [c.102]

Скорость элюирования полимера из фракционирующей колонки — важный фактор, обусловливающий высокое разрешение при фракционировании. Однако и в этом случае, как и для многих других аспектов фракционирования полимеров, можно сформулировать лишь общие положения, а не абсолютные правила. Концентрация полимера в выходящем из колонки растворе долн на быть далека от точки насыщения. Сделанное Флори [1] предположение о том, что максимальная концентрация должна быть пропорциональна степени полимеризации в степени — /2, нашло качественное подтверждение [3]. Гиллет с сотр. [38], используя метод хроматографии, нашел оптимальную скорость потока, причем, оказалось, что те же предположения Флори справедливы и для градиентного элюирования. При слишком высокой скорости потока фракционирование проходит недостаточно полно, вероятно, в результате низкой скорости диффузии. При слишком низкой скорости потока процесс фракционировапия может осложняться обратной диффузией. Оптимальную скорость потока следует определять для каждой системы полимер — растворитель, и в процессе фракционирования мончет оказаться, что для улучшения разделения следует изменять скорость потока через колонку. В колонках с обратным направлением потока легче осуществлять контроль за скоростью потока, чем в колонках, где поток жидкости обусловлен силой тяжести [4]. Гернерт с сотр. [39] описали регулятор скорости потока, который может изменять скорость в широком диапазоне и способен компенсировать через каждые 3 мин случайные изменения скорости потока, достигающие 10%. В принципе при аналитическом фракционировании (1—2 г) полимеров удовлетворительные результаты можно получить при скоростях элюирования 2—6 мл/мин [4, 37, 38, 41, 42]. Такие скорости элюирования можно, вероятно, принять в качестве исходных при работе с новой системой полимер — растворитель. При препаративном фракционировании скорости элюирования, очевидно, следует соответственно изменить. [c.79]

В старом варианте ЖХ стеклянную колонку размером, как правило, 1x30 см заполняли гранулированным твердым материалом и пропускали через нее элюент — жидкость-носитель, содержащий пробу. Основное неудобство такого метода разделения — его малая скорость. Если для достижения хорошего разделения колонку заполняли насадкой с зернами малого размера, то под действием только силы тяжести скорость элюирования (прохождения элюата через колонку) могла снизиться до нескольких капель в минуту. Очевидный способ увеличения пропускной способности колонки состоит в использовании нагнетательного насоса или давления газа. Жидкостные хроматографы старой конструкции не способны выдерживать необходимое высокое давление, поэтому для принципиального совершенствования метода необходима была полная реконструкция системы. [c.427]