Хроматография олигонуклеотидов и нуклеиновых кислот

ХРОМАТОГРАФИЯ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ И НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ [c.321]

В последние 15 лет были разработаны различные хроматографические методы, позволяющие фракционировать высокомолекулярные нуклеиновые кислоты для этой же цели применяют электрофорез. Хроматографией на бумаге и другими распределительными методами, а также ионообменной хроматографией удалось выделить продукты гидролиза нуклеиновых кислот. Определяя концентрации выделенных оснований, нуклеозидов, моно- и олигонуклеотидов, в настоящее время проводят количественный анализ с очень небольшим количеством гидролизата. [c.437]

Хроматография полинуклеотидов не привела к таким блестящим результатам, как при разделении моно- и олигонуклеотидов. Однако в сочетании с другими методами (противоточное распределение, специфические химические методы) хроматографический метод благодаря простоте и надежности широко используется для выделения, разделения и характеристики нуклеиновых кислот. [c.338]

В этой главе будет показано, как инструментальная жидкостная хроматография применяется для аналитического разделения нуклеотидов, нуклеозидов и Ы-оснований. Аналитическое разделение проводится с пикограммовыми и миллиграммовыми количествами вещества препаративное разделение —с миллиграммовыми и граммовыми количествами вещества. Разделение нуклеиновых кислот высокого молекулярного веса и олигонуклеотидов методом жидкостной хроматографии проводится обычно в препаративных целях, и поэтому там применяется другая методика. [c.298]

Системы растворителей для вытеснительной хроматографии в тонком слое содержат нуклеиновые кислоты или олигонуклеотиды в растворе 7 М мочевины. Используют следующие три системы. [c.276]

В литературе описаны попытки использования сефадексов и биогелей, представляющих собой соответственно сшитый декстран и гранулированный полиакриламидный гель, для разделения компонентов нуклеиновых кислот за счет различного сродства их молекул к сорбенту [32, 33]. Однако в основном гель-хроматографию применяют для фракционирования нуклеиновых кислот и их компонентов в соответствии с размерами молекул этих соединений. Например, на колонке с сефадексом 0-10 нуклеозиды и нуклеотиды отделяются от неорганических солей (выходят со свободным объемом колонки) [34]. Аналогичным образом олигонуклеотиды, содержащие больше 10—15 нуклеотидных остатков, не задерживаются на сефадексе 0-25 или 0-50, а мононуклеотиды проникают в поры геля и поэтому элюируются значительно медленнее [3]. Именно этот метод широко используют для удаления избытка нуклеозидтрифосфатов из смеси биосинтетических олиго- и полинуклеотидов [35]. [c.167]

Колоночная хроматография весьма тщательно разработана и позволяет добиться прекрасного разделения однако низкомолекулярные осколки нуклеиновых кислот можно столь же успепшо разделить и методом ХТС на ионообменниках при меньшей затрате труда и времени. Хотя до настоящего времени метод ХТС применяли только для разделения пуриновых и пиримидиновых оснований, нуклеозидов и мононуклеотидов, можно полагать, что на слоях эктеола и ДЭАЭ можно разделить также олигонуклеотиды, анури-новые кислоты и высокомолекулярные рибо- и дезоксирибонуклеиновые кислоты. Этот метод может оказаться пригодным также для анализа углеводных компонентов нуклеиновых кислот (841 (см. стр. 456) — в виде их обратных комплексов (см, [211),—- а также о-фосфорной кислоты и полифос-форных кислот [77] (см. стр. 473). В связи с этим следует отметить анализ методом ХТС птеридинов [63], фармацевтически важных пуриновых и пиримидиновых производных (см. стр. 310) и водорастворимых витаминов (см.стр. 236). Особенно важной является работа Нюрнберга по анализу методом ХТС витаминов группы Ве и амида никотиновой кислоты [64]. [c.451]

Анионообменная хроматография оснований на смоле дауэкс 1 является исторически первым примером разделения компонентов нуклеиновых кислот на ионитах. К достоинствам этого метода относится высокое разрешение при элюировании буферным раствором постоянного состава (рис. 37.5). Основания разделяют также на DEAE-целлюлозе [64], однако в основном этот анионит применяют для разделения более крупных фрагментов нуклеиновых кислот (моно- и олигонуклеотидов) или для группового разделения оснований при предварительной очистке. [c.44]

Для разделения сложных смесей, содержащих вещества разных классов (основания, нуклеозиды, нуклеотиды и их поли-фосфаты, олигонуклеотиды, включая олигонуклеотиды, различающиеся порядком основании, и т. п.), с которыми имеют дело, например, при выделении кислоторастворнмой части клеток или тканей или при анализе ферментативных гидролизатов нуклеиновых кислот, применяют исключительно ионообменную хроматографию. В случае необходимости дальнейшее фракционирование проводят по многостадийной схеме, с использованием указанных выше методик. При этом наблюдаются те же закономерности, что и при анализе нуклеотидов (см. предыдущий раздел), поэтому в дальнейшем будет приведено лишь несколько примеров. [c.58]

Целлюлозными ионитами называют такие производные целлюлозы, которые содержат кислые или основные функциональные группы, нерастворимы и ограниченно набухают в водных растворах кислот и щелочей. В 1956 г. они были предложены Петерсоном и Собером [1] как сорбенты для разделения белков хроматографическим методом. С тех пор целлюлозные иониты нашли широкое применение для хроматографии не только белков, по и высших полипептидов, нуклеиновых кислот, олигонуклеотидов, пуклео-протеинов и других природных высокомолекулярных соединений. [c.206]

Ряд задач, возникаюш,их при изучении нуклеиновых кислот и пуклеотидкоферментов, решается с помош,ью различных видов хроматографии. Эти задачи могут быть классифицированы с точки зрения методов или объектов. Более важным кажется второй подход, в связи с чем дальнейшее изложение построено по этому принципу. Объекты подразделены на следующие группы 1) основания и нуклеозиды, 2) нуклеотиды и нуклеотидангидриды, 3) олигонуклеотиды, 4) нуклеиновые кислоты. [c.320]

Читателю, специализирующемуся в области биохимии белков и нуклеиновых кислот, можно рекомендовать статью Гинодмана Хроматография белков иа ионообмен-ииках и фракционирование смесей, содержащих белки, на колонках с сефадексом в сб. Современные методы в биохимии , под ред. Ореховича В. Н., I, изд-во Медицина , М., 1964. В этой статье весьма подробно и полно рассмотрены практические приемы работы с колонками, заполненными различными гелями, а также некоторые теоретические положения гель-проникающей хроматографии. Данные, полученные при фракционировании дезоксирибонуклеиновых кислот на колонках с гелями, приводит в гл. Выделение и фракционирование нуклеиновых кислот Кирби в сб. Нуклеиновые кислоты , под ред. Збарского И. Б., изд-во Мир , М., 1966. В этом же сборнике Штэелин в гп. Хроматография олигонуклеотидов и полинуклеотидов на колонках обсуждает результаты фракционирования указанных соединений на колонках с ДЭЛЭ-целлюлозой и другими замещенными целлюлозными аниопообменииками, сефадексом и метилированным альбумином.— Прим. перев. [c.110]

Патаки [I], а также К. Рандерат и Э. Рандерат [1а] опубликовали обзоры по тех нуклеозидов, нуклеотидов и оснований нуклеиновых кислот, а Шейту [2] принадлежит обзор по ТСХ олигонуклеотидов. Саукконен [3] обобщил данные работ по методам хроматографии свободных нуклеотидов. [c.116]

Важным этапом в развитии структурного анализа нуклеиновых кислот явилось использование при хроматографии на DEAE-целлюлозе 7 М мочевины для разделения олигонуклеотидов по длине цепи (Tomlinson, Tener, 1963). Найдено, что концентрация соли, необходимая для элюирования олигонуклеотида, пропорциональна логарифму его заряда. [c.286]

Олигонуклеотиды можно разделять с помощью тонкослойной хроматографии или электрофореза в тонком слое или же используя оба этих метода (в разных направлениях). Оптимальные условия для разделения сложных смесей олигонуклеотидов в тонких слоях еще не разработаны. Нами установлено, что продукты частичного гидролиза синтетических полинуклеотидов и нуклеиновых кислот хорошо разделяются на тонких слоях анионообменников [32, 33]. По-видимому, весьма перспективен в этом отношении также электрофорез на тонких слоях ионообменников [34]. Недавно описан метод разделения (картирования) продуктов гидролиза РНК панкреатической рибонуклеазой (ЕС 2.7.7.16) и рибонуклеазой Т (ЕС 2.7.7.26) иа слоях немодифицированной це.плюлозы [35]. [c.46]

Полимеры нуклеозидмонофосфатов, в молекулах которых 3 - и 5 -гидроксильные группы двух соседних углеводных остатков связаны фосфодиэфирным мостиком, представляют собой ковалентный каркас нуклеиновых кислот. Соединения, содержащие менее 50 нуклеотидных остатков, обычно относят к олигонуклеотидам. Олигонуклеотиды, построенные из остатков одного и того же нуклеотида, называют гомополимерами. Их получают либо синтетическим путем, либо в результате расщепления более длинных полимеров. Этот раздел посвящен хроматографии олигонуклеотидов на колонках фракционирование этих соединений с помощью электрофореза на бумаге и в геле рассмотрено в разд. 10.7. [c.168]

Быстрое распространение хроматографических и электрофоретических методов в области исследования нуклеиновых кислот, которому в значительной степени способствовало становление технологии рекомбинантных ДНК, продолжается и по сей день, особенно в таких направлениях, как разделение мРНК, фрагментов ДНК и нуклеопротеидов. Уже установлена первичная структура обширных участков генома многих животных, и непрерывное совершенствование метода гель-электрофореза, обладающего высоким разрешением, в сочетании с использованием компьютерной техники для определения полных нуклеотидных последовательностей позволит добиться еще более значительных успехов. На ранних этапах развития этой области исследований одна из задач экспериментатора заключалась в том, чтобы приспособить используемые в других областях науки хроматографические и электрофоретические методы для разделения моно- и олигонуклеотидов. Теперь же, по прошествии тридцати лет, биохимия нуклеиновых кислот сама стала тем источником новых представлений о разделении макромолекул, который стимулирует развитие хроматографии и электрофореза. [c.196]

Очистка вещества. Проникающая хроматография используется в основном для очистки высокомолекулярных биологических соединений. С помощью соответствующих гелей или стеклянных гранул проводят разделение и очистку вирусов, белков, ферментов, гормонов, антител, нуклеиновых кислот и полисахарвдов. Методом проникающей хроматографии можно разделять смеси низкомолекулярных соединений, отделять аминокислоты от пептидов, фракционировать пептиды, образующиеся в результате частичного гидролиза белков, а также олигонуклеотиды из гидролизатов нуклеиновых кислот. Используя данный метод, можно выделять низкомолекулярные декстраны из смесей, например из кукурузного масла. [c.99]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология