Вирус осаждение сульфатом аммония

Большая часть вирусов разрушается при обработке их 1%-ным раствором додецилсульфата натрия, однако обычно при этом необходимо применять либо слегка кислую или щелочную среду, либо нагревание. ВТМ расщепляется через несколько минут после нагревания до 55° (pH 8,8) [141]. При добавлении к 1 объему полученного раствора 0,5 объема насыщенного сульфата аммония выпадает осадок денатурированного белка, а РНК выделяют из надосадочной жидкости при охлаждении или же при добавлении дополнительного количества сульфата аммония (в последнем случае процесс осаждения РНК протекает быстрее). Выпавшую в осадок РНК вновь растворяют в небольшом объеме воды и повторно осаждают двумя объемами этилового спирта. Раствор РНК затем подвергается высокоскоростному центрифугированию для полного удаления, если это необходимо, остаточных следовых количеств неразрушенных вирусных частиц. Полученная таким способом РНК так же свободна от белка, [c.56]

К сульфату аммония приливают культуральную жидкость, содержащую 1% сыворотки для ускорения осаждения вируса, и тщательно перемещивают до растворения кристаллов. Раствор при этом подкисляется и слегка мутнеет. [c.58]

Суспензию центрифугируют при 3000 g 10 мин для удаления нерастворившегося материала. Данный метод обеспечивает 100%-ный выход вируса, позволяет избежать колебаний pH и достигнуть более высокой степени концентрирования, чем метод с использованием сульфата аммония. Однако осаждение полиэтиленгликолем требует больше времени. [c.58]

На первой стадии очистки вирус необходимо отделить от клеток и клеточного дебриса, содержащегося в культуральной жидкости. Как правило, для этого используют низкоскоростное центрифугирование при 600 g. На второй стадии вирус, находящийся в осветленном супернатанте, концентрируют и освобождают от большинства низкомолекулярных и высокомолекулярных примесей с помощью любого из известных методов концентрирования вирусов при низкой температуре (4—10°С), pH 6,8—8,0 и средних значениях ионной силы. Ниже рассматриваются два метода осаждение вируса высокоскоростным центрифугированием и преципитация ацетатом цинка, сульфатом аммония или полиэтиленгликолем. Преципитация удобна для получения вирусов как в малых, так и в больших количествах и обладает тем преимуществом, что обеспечивает отделение вируса от большей части посторонних белков. [c.124]

При выделении вирусов из таких тканевых экстрактов наилучшие результаты дают следующие методы а) дифференциальное центрифугирование б) осаждение сульфатом аммония в) центрифугирование в градиенте концентрации сахарозы г) центрифугирование в градиенте плотности СвС д) экстракция растворителями и нротиво-точное распределение между частицами растворенного полимера и е) обработка ферментами [469, 470]. [c.35]

Очистку вирусов этой группы обычно проводят осаждением сульфатом аммония или метанолом, обработкой нуклеазами, органическими растворителями и центрифугированием в градиенте плотности хлористого цезия. Из зараженной клетки вирус можно извлекать рецепторраз-рушающим энзимом и дезоксихолатом натрия, [c.10]

Дифференциальное центрифугирование как метод очистки и концентрирования весьма эффективен нри очистке вирусов растений. Этим методом в комбинации с каким-либо методом осаждения (сульфат аммония и др.) можно получить высокоочищенные суспензии вирусов растений. Однако использовать для очистки вирусов животных и человека только один метод дифференциального центрифугирования недостаточно, чтобы получить высО коочищенную вирусную суспензию. Поэтому этот метод ис-пользуют либо в конце после ряда других стадий очистки, (ионообменная хроматография, гельфильтрация), либо перед очисткой вируса для уменьшения объема вируссодержащего материала [c.58]

При нейтральном или близких к нему значениях pH большинство вирусов диссоциирует лишь при добавлении сильных денатурирующих агентов. Добавлением мочевины или формамида до концентрации 8—10 М при pH 7—8 можно вызвать диссоциацию многих вирусов, а для отделения высвободившегося белка от вирусной РНК часто прибегают к методу осаждения белка сульфатом аммония. Белок ВТМ, выделенный таким способом при 20%-ном насыщении сульфата аммония, нерастворим даже в присутствии дитиотреитола, предотвращающего самоокисление. Денатурированный белок ВТМ успешно ренатурирует при растворении в 8 М растворе мочевины и последующем диализе против 0,02 М фосфата при pH 6 [7]. Под действием мочевины ренатурация белка может произойти даже после его обработки галоидоводородными солями гуанидина (4 М), которые относятся к более сильным денатурирующим агентам. У таких детергентов, как додецилсульфат натрия, наблюдается тенденция слишком прочно связываться с белками, что и является основным недостатком при их использовании для выделения белков. [c.50]

Метод осаждения на градиентную интерфазу использовали Ватанабэ и Грэхэм [833] при очистке реовируса. Дьюс-берг [295] и Дьюсберг и Робинсон [296] очищали вирус гринна следующим образом. Концентрированный сульфатом аммония вирус после обработки РНК-азой наслаивали на поверхность двухступенчатого сахарозного градиента — нижний слой состоял из 0 3 мл 65%-ной сахарозы в Д2О в качестве утяжелителя с плотностью 1,32 г/мл, а верхний слой — из [c.69]

Степень и эффективность очистки вирусов на целлюлозных обменниках зависит как от природы самого вируса, так и от среды, в которой он выращивается. Например, для фагов Т2 и Сд очистку производят на волокнистых ДЭАЭ-целлюлозах непосредственно из лизатов [110, ИЗ], при этом степень очистки превышает 90%. В то же время для вируса Сендай очистка непосредственно из аллантоисной жидкости дает сравнительно плохие результаты, так как элюат вируса загрязняется пигментами аллантоиса [48, 49]. В таком случае исходный вируссодержащий материал предварительно концентрируют и очищают, применяя какой-либо метод, например осавдение вируса на ультрацентрифуге, осаждение спиртом или сульфатом аммония, адсорбция-элюция на каком-либо специфическом адсорбенте (неорганические соли, формализированные эритроциты) и др. [c.118]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология