Очистка вирусов растений

Большинство методов очистки вирусов растений не подходит для рабдовирусов, поскольку предусматривают осветление грубых растительных экстрактов прогреванием при 55—60°С или обработкой органическими растворителями [4]. Неприемлемость этих процедур для очистки рабдовирусов обусловлена, [c.126]

Для характеристики вирусов в первую очередь важны их биохимические и биофизические свойства. Чтобы исследовать эти свойства, вирусы необходимо очистить. Разные вирусы требуют специфических методов очистки, и привести их все в данной главе не представляется возможным. Описание методов очистки вирусов животных читатель найдет в других главах книги. Здесь же я рассматриваю принципы, на которых основана разработка методов очистки вирусов растений, и привожу отдельные примеры. После очистки методология исследования биофизических и биохимических свойств одинакова для большинства, если не для всех, вирусов животных, растений и бактерий. В этой главе рассмотрены методы изучения только простейших вирусов, состоящих из белковой оболочки и геномной нуклеиновой кислоты. [c.12]

Очистка вирусов растений [c.12]

Таблица 1.1. Удаление основных контаминантов при очистке вирусов растений

Бракк (Вгакке) использовал центрифугирование в градиенте плотности сахарозы для очистки вирусов растений [c.211]

При иммунохимическом исследовании вирусов растений успешно использовались иммунизированные цыплята и яичный желток как источник антител, а не иммунная сыворотка. Этот метод позволяет в короткое время получать значительное количе--ство антител он облегчает очистку иммуноглобулинов IgG позволяет избежать кровопускание у животных [108]. [c.97]

ОЧИСТКА, БИОФИЗИЧЕСКАЯ И БИОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТ ВИРУСОВ (ПРЕИМУЩЕСТВЕННО ВИРУСОВ РАСТЕНИЙ) [c.12]

Методики очистки многих вирусов приведены в Описаниях вирусов растений , выпускаемых СМ1/ААВ [1], и в книге [2]. Хотя универсального метода и не существует, изложение основных принципов и фактов может оказаться полезным при разработке способов очистки вирусов. [c.12]

В идеале для наращивания вируса следует использовать растение, в котором вирус дает системную инфекцию (системный хозяин), а для определения инфекционности на разных стадиях очистки — растение, на котором образуются локальные поражения. При выборе системного хозяина необходимо принимать во внимание выход вируса, легкость его экстракции (в частности, является ли растение мягким в агротехническом понимании, не содержит ли оно веществ, затрудняющих выделение вируса, например больших количеств полифенолоксидазы), легкость культивирования растения и возможность контаминации другими вирусами. Растение, на котором образуются локальные [c.12]

Осветленный и концентрированный вирус еще недостаточно чист для большинства биохимических и биофизических исследований. Дополнительной очистки достигают зональным (скоростным) или равновесным (изопикническим) центрифугированием. Теоретические и практические аспекты центрифугирования детально изложены в другом руководстве [7]. Для вирусов растений можно использовать следующие методы дополнительной очистки. [c.16]

Ниже приведены четыре методики очистки вирусов, в которых используют рассмотренные выше приемы. Прежде чем начать работу с любым из вирусов, следует ознакомиться с действующими правилами защиты растений. [c.20]

С вирусом бешенства, обязательно должен быть вакцинирован и иметь в крови защитный титр противовирусных антител, заданный нормами Всемирной организации здравоохранения [7]. Кроме того, в настоящей главе особое внимание уделено очистке рабдовирусов растений, поскольку эта процедура встречается с значительными трудностями. [c.113]

В последнее время колонки с агарозой стали использовать для очистки и фракционирования вирусов растений и животных [250, 763, 764]. Так, Пеппер [633] использовал хроматографию на колонке с фосфатом кальция с последующей гельфильтрацией на 4%-ной агарозе для очистки вируса гриппа А2. При подобной двухэтапной процедуре достигалась 860-кратная очистка вируса по белку. При этом вирус гриппа отделялся от рибосом [140]. [c.146]

Высокий уровень экспрессии встроенного гена, быстрая аккумуляция значительных количеств чужеродного белка и вследствие этого простота его очистки делают вирусы растений привлекательными векторами для переноса генов. Вирусы растений имеют более широкий круг хозяев, чем агробактерии, что позволяет экспрессировать ген в разных видах растений с помощью одной и той же векторной конструкции. Кроме того, если антиген многократно экспонирован на поверхности вирусных частиц, его иммуногенность с)Ш] ественно повышается. В качестве носителей для антигенных пептидов используют белки оболочки вирусов табачной мозаики, мозаики коровьего гороха, мозаики вигны китайской, мозаики люцерны и некоторых других вирусов. [c.475]

Общие свойства вирусов насекомых. В конце XIX в. Ивановскому впервые удалось доказать возможность передачи некоторых болезней растений путем впрыскивания здоровым растениям сока больных растений, пропущенного через бактериологические фильтры для очистки от всех микроорганизмов и частиц, видимых под микроскопом. Следовательно, возбудителями болезней в этих случаях являются фильтрующиеся организмы. Названия вирус , вирулентность до этого имели только значения сила, фактор, возбудитель, скрытая причина , без точного определения подлинного содержания этих терминов. С открытием фильтрующихся <хил это общее понятие получило конкретное содержание. [c.64]

Необходимо контролировать pH суспензии и при необходимости доводить его до 7,2 при более низких значениях pH могут возникнуть затруднения при отделении вируса от компонентов тканей растения в процессе очистки. Если почему-либо используют большее количество ткани листьев (например, 300 г), гомогенизацию можно проводить в равном объеме (300 мл) холодного глицинового буфера в течение 1 мин при максимальной скорости вращения ножей гомогенизатора [28]. [c.127]

Ныне энергично изыскиваются эффективные способы борьбы с синезелеными водорослями. В Институте гидробиологии АН УССР разработан способ продувки кислорода сквозь толщу воды, зараженной ими. Применяют против них и специальные ядохимикаты, например альгицид монурон, убивающий водную флору. Под действием минеральных коагулянтов, которые заодно применяются для осветления и очистки воды, идущей в водопроводную сеть, водоросли необратимо слипаются в комки. Уже найдены вирусы, для которых синезеленые являются желанным блюдом. Обнадеживает и применение специальных всасывающих устройств, которые извлекают водоросли из воды, после чего их можно использовать как удобрения для полей или как промышленное сырье, содержащее до 50% белка, большое количество витамина В12 и другие ценные компоненты. А недавно в Институте ботаники АН Туркменской ССР разработали такой метод борьбы с синезелеными, в котором используют их естественных врагов — высшие водные растения. Оказалось, что тростник, рогоз, разные виды камыша выделяют фитонциды, токсичные для этих водорослей. Особенно сильно угнетает их развитие роголистник погруженный. Но все же об окончательном решении проблемы говорить еще рано. [c.105]

Дифференциальное центрифугирование как метод очистки и концентрирования весьма эффективен нри очистке вирусов растений. Этим методом в комбинации с каким-либо методом осаждения (сульфат аммония и др.) можно получить высокоочищенные суспензии вирусов растений. Однако использовать для очистки вирусов животных и человека только один метод дифференциального центрифугирования недостаточно, чтобы получить высО коочищенную вирусную суспензию. Поэтому этот метод ис-пользуют либо в конце после ряда других стадий очистки, (ионообменная хроматография, гельфильтрация), либо перед очисткой вируса для уменьшения объема вируссодержащего материала [c.58]

Начиная с классических исследований Стэнли, Боудэна, Пири и других в 1930-х годах, много усилий было направлено на разработку методов выделепия и очистки вирусов растений. Чтобы изучить основные свойства вируса, необходимо уметь получать препараты, более или менее свободные от компонентов клетки-хозяина, но сохраняюп1 ие, одиако, при этом инфекционность. Не удивительно поэтому, что первыми выделенными и эффективно изученными вирусами бы,пи те, которые достаточно стабильны и содержатся в растении-хозяине в относительно высокой концентрации (ВТМ, Х-вирус картофеля и вирус кустистой карликовости томатов). В настояш ее время круг такого рода вопросов расширился и возник интерес к ряду вирусов, сильно различающихся по своей концентрации в растении-хозяине, а также по устойчивости к различным физическим и химическим воздействиям. В этом случае нет общепринятых правил методы, эффективные в отношении одного вируса, могут быть совершенно неприменимы к другому, по всей вероятности, сходному вирусу. Даже разные штаммы одного и того же вируса могут требовать для успешного выделения применения различных методов. [c.36]

Когда с помощью соответствующих методов удалось выделить РНК ВТМ, ее нанэзли на листья чувствительных к ВТМ растений. Вскоре на этих листьях появились поражения, которые нельзя было отличить от типичных вирусных поражений. Более того, из пораженных участков можно было снова выделить инфекционный вирус. Таким образом было показано, что инфекционность РНК-содер-жащего вируса обусловлена его РНК. Когда для этих исследований был использован очищенный препарат вирусной нуклеиновой кислоты, содержащий при оптимальных условиях очистки менее 1 субъединицы белка на 20 молекул РНК (см. ниже), впервые удалось неопроверн<имо доказать, что инфекционность вируса присуща исключительно его нуклеиновой кислоте. Затем при помощи тех же методов инфекционная РНК была выделена из большей части вирусов растений. Однако степень чистоты этих препаратов РНК обычно устанавливали не так тщательно, как в случае РНК ВТМ. [c.172]

В промышленных сточных водах обитает бесчисленное множество микроорганизмов, среди которых преобладают бактерии. А если учесть, что очень часто для более эффективной биологической очистки промышленные стоки смешивают с бытовыми, богатыми природными органическими веществами (водорастворимыми белками и углеводами), то станет ясно, что в таких сточных водах могут развиваться почти все ныне известные гетеротрофные бактерии, а также некоторые (возможно и все) бактерии, способные к хемоавтотрофному метаболизму. Помимо истинных бактерий — эубактерий — в промышленных сточных водах находятся миксобактерии, актиномицеты, синезеленые водоросли, микоплазмы и другие микроорганизмы вирусы, грибы, зеленые водоросли и представители животного мира — простейшие. Бактериальная клетка отличается наиболее универсальным набором ферментных систем, способных охватить множество разнообразных химических реакций, часто очень полезных для народного хозяйства и необходимых для охраны окружающей среды от угрозы гибели или частичного отравления ее химическими веществами, которые накапливаются в результате промышленной деятельности. Микроорганизмы — лучшие санитары Земли Многие микроорганизмы используются в промышленности и сельском хозяйстве как продуценты спиртов, кислот, биологически активных веществ и антибиотиков. В сельском хозяйстве используются азотфиксаторы и энтомопатогенные микробы. Однако наряду с этим множество микробов не только бесполезны, но и весьма вредны, образуя токсины либо паразитируя в организме человека, животных и растений это патогенные (болезнетворные) или фитопатогенные микроорганизмы, вызывающие болезни человека, домашних животных, сельскохозяйственных растений и лесов. Большой ущерб народному хозяйству наносят и обычные сапрофитные микробы, поселяясь на пищевых продуктах, кормах, промышленных товарах, по-врелсдая их и понижая товарные качества. В роли недругов человека могут выступать представители всех перечисленных [c.8]

Использование гомогенизаторов неудобно, если ткани растения-хозяина очень богаты волокнами (эту особенность следует учитывать и при выборе системного хозяина) или частицы выделяемого вируса длинные и гибкие в последнем случае при гомогенизации они (например, частицы клостеровирусов) могут разрушаться 3]. Этих трудностей легко избежать, используя соковыжималку или ступку с пестиком. При очистке вирусов, размножающихся только в сосудистых тканях, например лютео-вирусов, обнаруживаемых во флоэме, ткань листьев необходимо сначала разрушить целлюлазами и пектиназами [4]. [c.13]

В 1935 г. Стенли [759], применяя это вещество, впервые получил препарат вируса табатаой мозаики в кристаллическом состоянии. Впоследствии этим методом успешно подучали высокоочищенные препараты многих вирусов растений [528, 643, 784], Но для концентрирования и очистки вирусов животных он может быть применен только в качестве предварительной обработки. Дальнейшая очистка препарата, концентрированного сульфатом аммония, достигается более сложными методами. Этот метод успешно применяли для предварительного концентрирования вируса ящура, энтерита норок, Коксаки А9 и А10, полиомиелита, реовирусов, гриппа, болезни Ньюкасла, саркомы Рауса, лейкемии Раушера, везикулярного стоматита и лимфоцитарного хорио менингита [79, 230, 254, 295, 373, 452, 544, 571, 582, 629, 689, 833]. [c.46]

Работ ио очистке вирусов с применением этого метода очень много. Этот метод был основным для многочисленных исследователей при очистке фагов 159, 110, 113, 376] вирусов растений [501, 261] и вирусов животных и человека полиомиелита [38, 286, 423, 424, 502], энтеровирусов [423, 458, 577], ящура [227], реовирусов [371, 722], арбовирусов [602], герпеса [284, 480], миксовирусов [597, 598, 603, 671, 753, 853], аденовирусов [33, 358, 397, 637, 638, 476], Для очистки вирусов животных и человека наиболее часто [c.121]

Вирусы растений имеют такие размеры, которые делают очень удобным их анализ с помощью аналитического ультрацентрифугирования. Этот метод особенно полезен для контроля этапов очистки вируса, а также для изучения влияния различных обработок на физическое состояние вирусных частиц и определения количества вируса в неочищенном экстракте ткани. При использовании шлирен-оптики обычно можно обнаружить вирус в концентрации около 100 мкг на 1 мл. Иногда удается работать с вирусом даже при концентрации 50 мкг на 1 мл. Верхний предел концентрации отчасти зависит от вируса, а также от скорости центрифугирования. При концентрации вируса, составляющей 3—4 мг/мл, возможно зашкаливание, так что появляется черная линия, пересекающая пик. Оптимальными являются условия, при которых концентрация каждого компонента находится в пределах 0,5—2 мг/мл. [c.24]

Природные воды перед употреблением в промышленности и в быту, как правило, требуют тш ательной очистки. Вода многих рек средней полосы и Севера нашей страны имеет желтый, светло-коричневый, а иногда и почти черный цвет. То же наблюдается и во многих озерах и водохранилищах. Наиболее интенсивная окраска свойственна рекам и озерам болотного питания. Цветность воды объясняется присутствием в ней гумусовых веществ, которые образуются при разложении органических соединений растительного происхождения. Кроме того, в результате жизнедеятельности и отмирания растений, грибков, бактерий и водорослей образуется ряд веществ, придающих воде неприятные привкусы и запахи. Периодически запахи и привкусы появляются в тех водоемах, где вследствие высокой концентрации биогенных элементов возникает цветение воды. Наконец, природная вода весьма часто бывает заражена бактериями, вирусами, а иногда и яйцами гельминтов. [c.72]

Борьба с переносчиками вируса — тлями, а также сорными растениями — резерваторами вируса. Раздельный сбор хлопка-сырца с больных и здоровых растений и последующая раздельная их очистка. Выделение на семена участков, не содержащих вирусных растений. Ранние посевы хлончапшка, предотвращение изрежнвания посевов, внесение фосфорных удобрений. [c.177]

Френкель-Конрат решил попробовать, как будет вести себя в растениях один чистый грифель, то есть РНК. В ранее сделанных Гирером и Шраммом, а также Френкель-Конратом опытах, во-первых, не удавалось добиться достаточно полной очистки РНК от белка, во-вторых, вирус размножался в ничтожных количествах, не поддававшихся точному определению. В экспериментах, доложенных на конгрессе, обоих этих недостатков удалось избежать. Френкель-Конрат так сумел очистить РНК, что она почти не содержала белка, и показал, что эта РНК, введенная в листья, активно размножается, превращаясь в обычный ВТМ. [c.95]

Для более детальной характеристики фермента были проведены выделение, частичная очистка и сравнительное изучение физико-химических свойств пероксидазы из листьев табака сортов Ксанти и Самсун, зараженных разными вирусами (ВТМ, Хт, Ху). Заражение растений, взятие проб и выделение фермента проводили, как описано ранее [Андреева и др., 1979]. Растения сорта Ксанти на заражение Хт и Ху-штаммами вируса картофеля отвечают системным поражением. При этом суровый Хт-штамм в процессе развития инфекции вызывает образование светлых колец, а слабопатогенный Ху-штамм не дает симптомов заболевания совсем. Однако и в том и другом случае активность пероксидазы после заражения возрастала и составляла 180% для растений, пораженных слабопатогенным штаммом, и 240% для пораженных сильнопатогенным штаммом по отношению к контролю (табл. 13). [c.74]

Большое разнообразие макромолекул, изучаемых с помощью антител, включает не только естественные продукты животных н растений, но, и продукты микробного происхождения, и синтетические вещества. Приготовление поликлональной антисыворотки к определенным молекулам может включать предварительную очистку, если нельзя получить очищенный коммерческий препарат. Для компонентов клеточной поверхности современный подход — это получение моноклональных антител требуемой специфичности при этом решается проблема очистки иммуногена (см. гл. 3). С другой стороны, с помощью уже существующих антител можно очистить компоненты клеточной поверхности, а также проводить обогащение клеток, экспрессирующих антиген-мишень. Эти подходы обсуждены в гл. 5. Метод экстракции имеет большое значение в тех случаях, когда необходимо получить полиспецифическую антисыворотку к смеси иммуногенов, например экстрагированных клеточных мембран, гомогенатов тканей, разрушенных ультразвуком бактерий, вирусов и паразитов. Невозможно в этой главе привести детальное руководство по экстракции и очистке огромного разнообразия иммуногенов. Существует специальная литература, посвященная методам получения углеводных, бактериальных, вирусных, грибковых и паразитарных антигенов [21]. Очистка с помощью аффинной хроматографии описана в гл. 5, а приготовление иммуноглобулинов [c.50]

На протяжении почти всего периода меяеду 1900 и 1935 гг. внимание исследователей было сосредоточено на описании как макроскопических симптомов болезней, так и цитологических нарушений, обнаруживаемых с помощью светового микроскопа. Проводилось таюте изучение спектра растений-хозяев и способов передачи болезнетворных агентов. Были предприняты довольно безуспешные попытки улучшить методы фильтрации, чтобы иметь возмояшость более точно определить размеры вирусных частиц. Это были почти единственные аспекты проблемы вирусных инфекций, которые молено было изучать с помощью существовавших в то время методов. Проводилось также исследование влияния различных физических и химических факторов на инфекционность вирусов, но методы тестирования инфекционного материала были примитивными. Холмс [814] показал, что местные поражения, возникающие у некоторых растений-хозяев в результате механической инокуляции, могут быть использованы для быстрого количественного определения инфекционности вируса. Этот способ значительно облегчил изучение свойств вирусов и явился основой методов их выделения и очистки, появивпшхся несколько лет спустя. [c.10]

Хлоротические поражепия 18 Хлорофилл, влияние вирусиой инфекции 248, 249 Хлорофиллаза 242 Хлороформ, выделение вирусов 42 Хлорпикрин как фумигант 462 Холестерин в растениях табака 251 Храпение вирусов 46—47, 300 Хроматография как метод очистки 46 [c.589]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология