Проточной цитометрии метод

Проточная цитометрия. Метод анализа клеточных популяций в суспензии, основанный на выявлении различий между клетками по маркерам поверхности. [c.562]

Как следует из самого названия этого метода, проточная цитометрия опирается на измерения некоторых свойств клеток в проточной системе . Проточная система состоит из специальным образом создаваемого потока жидкости, в который вво- [c.326]

Анализ клеток проточной цитометрией в жидкой среде требует совершенно иных методов окрашивания по сравнению с окраской клеток на стеклах. Суспензия должна состоять из одиночных клеток, флуоресцентные зонды или другие красители должны быть специфичны и не вымываться из клеток в среду, флуоресцирующие красители должны возбуждаться какой-либо из линий аргонового или криптонового лазера, и в том случае, когда предполагается сортировка жизнеспособных клеток, краситель не должен быть токсичным. [c.182]

Функционирование иммунной системы обеспечивается клетками многих типов. Совершенно очевидно, что понимание процессов иммунного ответа требует знания того, какие клетки принимают в них участие и взаимодействуют друг с другом. Один из подходов к изучению иммунной системы, которому отдавалось предпочтение в последние несколько лет, состоял в применении клонального анализа, например методов лимитирующих разведений с использованием клональных клеточных линий. Другой подход, который ни в коей мере не подменяет клональный анализ, а скорее дополняет его, заключается в определении гетерогенности популяций по экспрессируемым маркерам клеточной поверхности. В рамках этого второго подхода весьма популярными стали методы проточной цитометрии и сортировки клеток. [c.326]

В различных лабораториях образцы для проточной цитометрии готовят по-разному. К тому же из-за все возрастающего разнообразия областей применения цитометрии (например, для определения потенциала мембран или анизотропии эмиссии) способы окраски клеток также сильно различаются. В данной главе рассматриваются методы приготовления препаратов, предназначенные для окрашивания поверхности клеток традиционными реагентами, какими являются антитела. [c.334]

Флуоресцентный клеточный сортер. Прибор для анализа клеток методом проточной цитометрии, позволяющий разделять их по определенным признакам и выделять различные клеточные популяции. [c.563]

Проточная цитометрия (ПЦМ) — скоростной метод анализа отдельных клеток и клеточных структурных компонентов в потоке жидкости. Производительность анализа составляет 1000 клеток в 1 с и более, и это является главной технологической характеристикой метода. Другой уникальной особенностью ПЦМ является возможность сортировки клеток непосредственно сразу после измерения и, таким образом, получения для дальнейшего морфологического, биохимического или биотехнологического исследования фракций клеток, обладающих определенным значением измеряемого параметра. Техника ПЦМ — это главным образом техника флюоресцентных измерений с применением многочисленных зондов-красителей. Практически любой цитохимический прием, использующийся в флюоресцентной микроскопии для окраски клеток, может служить основой для проведения анализа методом ПЦМ. [c.136]

Измерение захвата бактерий, меченных флюоресцентным красителем, методом проточной цитометрии. [c.96]

Одним из современных методов является оценка поглощения стафилококка нейтрофилами периферической крови, внутриклеточной бактерицидности нейтрофилов с применением проточной цитометрии [9]. Живые стафилококки метят ФИТЦ с максимальным сохранением антигенных свойств микроорганизма. Такие частицы можно длительно хранить в замороженном состоянии и использовать как для реакции поглощения, так и для определения [c.96]

Разделы сборника, посвященные методам элютриации и проточной цитометрии, заинтересуют в первую очередь исследователей, работающих в области молекулярной биологии клетки. Эти два новых метода хотя и требуют дорогостоящего оборудования, но зато позволяют получать принципиально новые результаты. При чтении главы о проточной цитометрии особое внимание следует обратить на возможные сферы применения этого метода сравнительный анализ ответов индивидуальных клеток на те или иные воздействия и отбор индивидуальных клеточных популяций, идентичных по тому или иному параметру. В настоящее время, когда появляется все больше данных о гетерогенности клеток в тканях и даже в клеточных культурах, использование проточной цитометрии в сочетании с современными методами клонирования клеток сулит весьма увлекательные перспективы. [c.5]

Аналитическое и препаративное фракционирование клеток рассмотрено в двух главах, посвященных проточной цитометрии н элютриационному центрифугированию. Методы анализа на клеточном и субклеточном уровнях приведены в главе, посвященной гибридизации in situ. В главе, посвященной органной культуре, подчеркнуто значение клеточных взаимодействий и сохранения гистологической структуры ткани и приведены стандартные методы ведения органной культуры. Наконец, в главе, посвященной определению жизнеспособности клеток и оценке цитотоксичности, рассматриваются проблемы токсикологии и скрининга противоопухолевых препаратов, а также стандартные методы оценки выживаемости клеток в культуре. [c.7]

Чрезвычайно эффективной альтернативой седиментацион-ным методам разделения клеток является электронная сортировка клеток, меченных моноклональными антителами к поверхностным маркерам [гл. 6]. В качестве примера можно привести исследования Ватта с сотрудниками [И], описавших дифференциальное связывание двух моноклональных антител с кроветворными клетками. При последовательной обработке этими антителами удалось выделить с помощью проточной цитометрии популяцию клеток, на 60% обогащенную эритроид-ными предшественниками. Этот метод обеспечивает получение небольшого количества клетак за короткий промежуток времени по сравнению с методом элютриации. Аппаратура для сортировки клеток требует больших материальных затрат как при приобретении, так и при эксплуатации. [c.168]

Проточная цитометрия — это относительно новый метод, позволяющий оценивать несколько оптических параметров для каждой частицы в суспензии, например оптическую плотность, флуоресценцию и светорассеяние определять их можно как поодиночке, так и все сразу. Каждое измерение проводится за несколько микросекунд это обеспечивает сбор данных на большой популяции частиц. Возможность анализа оптических параметров частиц позволяет осуществлять их сортировку в сложных смесях по одному или более измеряемым параметрам. Методом сортировки можно характеризовать клеточную попу-.1ЯЦИЮ по светорассеянию — одному из параметров, дающему информацию об объеме или площади поверхности клеток. Два других обычно оцениваемых параметра — это оптическая плотность и флуоресценция. [c.182]

V. Для анализа методом проточной цитометрии ресуспендируйте жлетки в холодной среде МЕМ до (концентрации 1-10 клеток/мл выдерживайте их на холоду до анализа [73, 74]. [c.209]

Все эти недостатки метода изложены на основе нашего собственного опыта работы. Перспективы проточной цитометрии и сортинга клетак хорошо известны каждому ученому, н энтузиазм в связи с новыми возможностями, предоставляемыми этой техникой, приводит к недооценке сложностей и ограничений, присущих технологии в целом или типу используемого оборудования. [c.210]

На измерении параметров флюоресценции и светорассеяния I проточных цитометрах основан анализ самых различных характе-)истик клеток и их фрагментов содержания основных клеточных омпонентов и антигенов клеточной поверхности, активности неко- орых ферментов, размеров клеток и др. Наиболее широко ПЦМ спользуется в исследованиях ДНК (около 75—80 % всех исследова-1ИЙ методом ПЦМ). [c.139]

Теоретические и практические аспекты рассеяния света клетками и субклеточными частицами довольно полно рассмотрены в [66], а в работах [62, 63] дан обширный обзор рассеяния света бактериями и подобными им частицами. Принципы светорассеяния широко используют, например, при изучении морфологии ядер и клеток методом проточной цитометрии (измеряют рассеяние света вдоль и перпендикулярно потоку [91]), для обследования эпидермальных клеток гониометрическими методами [16],. лазерного контроля деформации эритроцитов [78]. Лазеры широко используют также для быстрого скрининга мочи на наличие в ней бактерий (бактериурия) нефелометрическим методом [6]. [c.542]

Следует подчеркнуть, что маркеры, экспрессируемые лимфоцитами, можно обнаружить и на клетках иных линий. Так, С044 часто выявляется на клетках эпителия. Молекулы клеточной поверхности можно выявить с помощью флуоресцирующих антител, используемых в качестве зондов (рис. 2.9). На этом подходе основан метод проточной иммунофлуоресцентной цитометрии, позволяющей сортировать и подсчитывать клетки в зависимости от их размеров и параметров флуоресценции (см. гл. 29). С помощью этого метода удается проводить детальную сортировку популяций лимфоидных клеток. [c.23]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология