ДНК делеции, вставки и перестройки

Делеции, вставки и перестройки ДНК [c.48]

В. Попробуйте с помощью этих результатов определить, с каким типом перестройки ДНК связано переключение с делецией, вставкой или инверсией ДНК [c.173]

Определение нуклеотидных последовательностей в составе гомологичных генов (например, генов глобинов), кодирующих полипептиды со сходным строением и функцией у одного или разных организмов, показало, что наибольшим изменениям в эволюции подвергались интроны, а не экзоны. В интронах обнаружены вставки, делеции и другие перестройки, в то время как последовательности экзонов оказываются значительно более консервативными. Изменения в нуклеотидных последовательностях экзонов часто обусловлены лишь отдельными нуклеотидными заменами. Эти наблюдения также можно истолковать в пользу представлений о том, что [c.194]

В. С помощью гибридизации можно определить тип перестройки в ДНК, например сайт-специфическую делецию, встраивание или инверсию ДНК. Если происходит делеция или вставка ДНК в определенный сайт, то после гибридизации в области перестройки будет наблюдаться одна одноцепочечная петля, а не два одноцепочечных участка, образующие глазок, показанный на рис. 10-9. Предположим, например, что в одну молекулу ДНК встроен фрагмент. При гибридизации такой молекулы, несущей дополнительный фрагмент, с молекулой, не подвергшейся перестройке, вся ДНК в двух исходных молекулах окажется спаренной, за исключением вставленного фрагмента, который даст одноцепочечную петлю. Делеция в сайте перестройки должна привести к образованию такой же одноцепочечной структуры, как и в случае вставки. (Два типа перестроек можно различить, сравнивая суммарную длину двухцепочечных фрагментов.) [c.416]

Одной ИЗ ВОЗМОЖНЫХ причин делеций в ретровирусных геномах служит аномальный сплайсинг вирусной РНК. Хотя в MLV-векторах сигнал для упаковки расположен ниже вирусного донорного сайта сплайсинга (относительно направления транскрипции), так что молекулы, претерпевшие сплайсинг с участием именно этого сайта, неспособны упаковываться в вирусные частицы, криптические сайты сплайсинга, присутствуюш,ие во вставке, способны вызывать нежелательные последствия. Делеции и перестройки могут происходить также в результате рекомбинационных событий с участием эндогенных мышиных ретровирусных последовательностей, рекомбинации в процессе трансфекции или же ошибок при обратной- транскрипции и интеграции [14]. Кроме всего прочего в некоторых случаях делеции могут неумышленно отбираться при селекции на экспрессию определенного маркерного гена. Примером этого может служить эксперимент (табл. 9.7), демонстрирующий особенности сплайсинг-вектора для спаренных генов рМХ 1122/иг/с. пео в присутствии последовательности с-тус ингибируется сплайсинг вирусной РНК (разд. 9.7.1). Несмотря на низкую эффективность трансфекции, обнаруживаемую, этим вектором при селекции на устойчивость к G418, трансфицированные клетки активно продуцировали пео-трансдуцирующий вирус (табл. 9.7). Однако последующий анализ показал, что эти вирусные частицы несут делецию с-тус (М. Скотт, Г. Вармус, неопубликованные данные). Следовательно, селекция на эффективную экспрессию гена neo привела к утрате последовательностей с-тус, ответственных за ингибирование образования субгеномной лео-мРНК- Высокая частота делеций, обусловливающая повышенный уровень экспрессии селективного маркера, также свойственна и векторам с внутренним промотором, однако пока такие данные получены только для векторов на основе ретровирусов птиц [41]. [c.305]

В основе этого подхода лежит тот факт, что разные аллели одного локуса различаются по нуклеотидной последовательности. Это могут быть одиночные нуклеотидные замены, делеции, вставки или другие перестройки, в результате которых изменяется сайт узнавания для той или иной рестри-ктируюшей эндонуклеазы или расстояние между этими сайтами. Как следствие может изменяться размер фрагмента(ов) ДНК гомологичных хромосом, которые гибридизуются с данным зондом, и наблюдается неодинаковый профиль гибридизации у разных особей одного вида [в качестве примера можно привести аллели овальбуминового гена [c.353]

Различают крупные хромосомные перестройки (выпадение, перемещение на новое место или инверсия иа 180° значительных фрагментов хромосом) и точечные мутации. Именно последние представляют наибольший интерес для фотобиологии. При точечных мутациях происходит замена одного нз оснований в ДНК на другое, выпадение (делеция) или вставка одного нз нуклеотидных остатков. Замена пуринового основания на пуриновое и пиримидинового — на пиримидиновое называется транзицией, а пуринового на пиримидиновое или наоборот — трансверзией. Следствием и транзиций и трансверзий может быть 1) образование бессмысленных кодонов, ие кодирующих аминокислоты УАГ (амбер-мутация), УАА (охра-мутация) и У ГА. Эти три типа мутаций называются нонсенс-мутациями и приводят к прерыванию синтеза либо и-РНК, либо белка 2) изменение смысла кодона, приводящего к включению в белок неверной аминокислоты (м иссенс-мутации). [c.305]

Обычно по характеру изменений генотипа мутации делят на две большие группы [2, 3] крупные перестройки и точечные мутации. Крупные перестройки включают потерю генетического материала (хромосомные разрывы, деле-ции) или его обмен (транслокации, инверсии, удвоения, вставки). Точечные мутации могут быть определены как мутации, при которых изменяется, выпадает (делеция) или добавляется (вставка) лишь одна пара пурин-пиримидино-вых оснований ДНК аденин — тимин (А — Т) или гуанин — цитозин (Г — Ц). [c.5]

При многих перестройках, индуцированных 1п10, происходит утрата детерминант устойчивости к лекарственным препаратам. Поэтому если взять штамм, содержаш,ий вставку ТпЮ в интересующей нас области, и проводить отбор клеток, утративших лекарственную устойчивость, то можно получить популяцию, сильно обогащенную делециями (или инверсиями) вблизи исходного сайта локализации ТпЮ. [c.29]

К наиболее полезным для анализа модификациям в структуре гена относятся замена одного нуклеотида или группы нуклеотидов, делеции или вставки нескольких нуклеотидов или протяженных участков ДНК и перестройки внутри гена. Ниже мы обсудим, каким образом эти модификации используются для идентификации регуляторных последовательностей, которые обеспечивают правильную экспрессию гена и отвечают за его тканеспецифичную и зависящую от времени регуляцию. Кроме того, изучение новых генов, образующихся при слиянии частей различных генов, очень облегчает идентификацию последовательностей, ответственных за правильную экспрессию. Например, слияние промотора SV40 и различных его производных с последовательностями, кодирующими легко идентифицируемые бактериальные или эукариотические клеточные белки, позволяет выяснить, какие последовательности промотора обеспечивают правильную инициацию, эффективность и регуляцию транскрипции гена SV40. Аналогичные химерные гены, содержащие, например, промоторы генов инсулина или эластазы, слитые с областью, кодирующей Т-антиген SV40, позволяют идентифицировать элементы, ограничивающие экспрессию генов инсулина или эластазы исключительно Р-клетками островков Лангерганса или ацинарными клетками соответственно. Для применения методов обратной генетики необходимо, чтобы существовал один или лучше несколько способов определения фенотипического проявления измененного гена. Соответствующие бесклеточные системы, с помощью которых можно определять эффективность транскрипции нормальных и модифицированных генов, а также изучать процессинг или трансляцию РНК, дают прекрасную возможность для анализа функции генов и последствий отдельных изменений в них. Трансфицируя нормальные и модифицированные гены с помощью [c.20]

Самые маленькие подвижные генетические элементы - это последовательности-вставки (IS-элементы), которые имеют длину около 1 кЬ. В отличие от транспозонов IS-элементы не несут никаких генов. Однако они оказывают существенное влияние на выражение соседних генов. IS-элементы обычно блокируют транскрипцию дистальных генов транскрипционной единицы. Кроме того, они могут выступать в качестве новых промоторов. К тому же IS-элементы способствуют таким хромосомным перестройкам, как делеции и инверсии. В хромосоме Е. oli было обнаружено несколько копий четырех различных IS-элементов (IS1, IS2, IS3 и IS4). К тому же концевые последовательности некоторых транспозонов идентичны одному из этих IS-элементов. По всей вероятности, транспозон образуется в том случае, когда какой-либо ген оказывается окруженным парой IS-элементов. [c.206]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология