Антитела титры в системе ABO

Реакция Николаева основана на идентификации величины белковой корпускулы по способности выпадать в осадок при определенной концентрации сульфата аммония. Известно, что чем больше относительная молекулярная масса белковой молекулы, тем при меньшем насыщении соли она выпадает в осадок. Антитела и антигены любой специфичности и природы будут иметь корпускулы меньшей относительной молекулярной массы, чем образуемые при их взаимодействии иммунные комплексы, состоящие не менее чем из 2 молекул. Следовательно, выпадение белков в такой системе будет происходить при добавлении меньшего количества химического реагента, чем в случае, когда реакция антиген — антитело не произойдет. В связи с этим учет реакции основан на сравнении объемов раствора сульфата аммония, необходимого для появления заметной мути (т. е. начала выпадения глобулинов) в опытных и контрольных пробирках. Достигается это повторными добавлениями равных объемов соли (по 0,1 мл, а затем по каплям) и регистрацией мути (визуально или с помощью нефелометра). Если при достижении некоего объема раствора соли муть появится лишь в опытных пробирках, но будет отсутствовать в контрольных, реакцию считают положительной, а разведение сыворотки принимают за титр. В реакции используют сыворотки и их разведения в объеме 1 мл (реже 0,5 мл), а антиген в объеме 0,1 мл. Добавление сульфата аммония начинают через 2—3 мин после тщательного смешивания антигена с сывороткой. [c.247]

Титр антисыворотки сильно зависит от концентрации антигена, используемого дл я тестирования и от способа его определения. Например, одна и та же сыворотка может иметь титр 100 в тесте иммунопреципитации и 100 000 в тесте иммуноферментного анализа. Поэтому при тестировании сыворотки и определении титра лучше всего применять тот же метод, что и при анализе, а концентрацию антигена выбирать близкую к минимальной в том диапазоне, который выбран для анализа. Кроме того, следует учитывать, что в иммуноферментном анализе используют как гомогенные, так и гетерогенные методы определения концентрации антигена, которые могут сильно отличаться по структуре образующихся иммунных комплексов. В частности, в твердофазных методах вероятность образования циклических комплексов антиген — антитело значительно меньше, чем в гомогенных, а следовательно, и Наблюдаемая аффинность антител в обеих системах будет разная. [c.158]

Из материала, содержащего вирус, готовят серийные разведения и добавляют к ним специфическую сыворотку в разведении в соответствии с титром, указанным на этикетке ампулы. Смеси вирус-сыворотка инкубируют 30 — 60 мин при 37 °С для обеспечения связывания антигенов с антителами. После этого смесью заражают культуру ткани, куриные эмбрионы или лабораторных животных. Контролем служит чувствительная система, зараженная вирусом без сыворотки. [c.270]

Рис. 6.33. Титры антител системы АВО против Е. соИ 0S6 у лиц с различными группами крови [1756].

Определяют титр антител. Концентрированную IgG-фракцию можно добавить к сыворотке для увеличения отношения антитела общий белок. Альтернативный путь — приготовить цельную сыворотку как фракцию IgG необходимой концентрации. Преимущество такого подхода заключается в еще большем увеличении отношения антитела белок при уменьшении количества добавляемого белка в системе и уменьшении фона. Это также позволяет стандартизовать концентрацию антител в последовательно приготавливаемых сериях антител одной и той же специфичности. Целесообразно иметь в запасе некоторое количество антител в концентрации выше требуемой для улучшения сывороток. Антисыворотка, предназначенная для реакции преципитации, должна содержать не менее 1—2 мг специфических антител в 1 мл, а еще лучше— 5—10 мг/мл для уменьшения количества добавляемого белка. Необходимо проверить чистоту IgG-фракции полученных антител, и если она удовлетворительна, то определить общий белок по оптической плотности и установить отношение антитела общий IgG. [c.112]

Предварительное титрование первичной сыворотки или секрета. Довольно часто исследователь приблизительно представляет, каков может быть титр специфических антител в сыворотке. В противном случае мы прибегаем к тестированию серии логарифмических разведений сыворотки, как показано на рис. 14-5, Л. Для приготовления разведений в зависимости от конкретной системы можно использовать [c.222]

Одним из наиболее информативных показателей функциональной активности В-звена иммунной системы является титр антител в сыворотке крови [87-99,116]. В хроническом эксперименте изучали влияние термически обработанных вод на динамику общего пула иммуноглобулинов. [c.238]

Приобретенный affmuMUKpo6Hbiii иммунитет вырабатывается в процессе жизни в природных условиях или вызывается искусственным путем. Самой ранней формой естественного иммунитета является врожденный. Он обеспечивается прежде всего тканевой ареактивиостью, которая в свою очередь определяется недоразвитием центральной нервной системы и эндокринных желез. Ввиду того что антимикробная устойчивость ребенка обусловлена также пассивно переданными от матери через плаценту антителами, титр которых ежедневно пополняется с молоком при грудном вскармливании, врожденный иммунитет часто называют плацентарным и материнским. Его продолжительность определяется длительностью кормления ребенка грудью, но редко превышает 6 месяцев. Эпидемиологи считают, что устойчивость детей грудного возраста к инфекционным болезням в большой степени обеспечивается разобщешюстью их с источниками инфекций. [c.8]

Работа с антителами зачастую требует от исследователя самостоятельного получения реагентов, в связи с чем в первую очередь возникает задача получения иммуногена. В случае растворимых простых иммуногенов для достижения хороших результатов молекулы должны быть как можно лучше очищены. Поэтому первый рассматриваемый метод — это оценка чистоты антигенного препарата. После сбора антисыворотки необходимо оценить ее качество. В зависимости от характера тест-системы, используемой на заключительном этапе, сыворотку необходимо проверить на специфичность, титр и параметры связывания. Это требует знания процедур контроля качества, в некоторых случаях включающих в себя определение изотопического спектра антител. На заключительном этапе важен правильный выбор теста (табл. 1.2)—.например, выбор между иммунофлуоресцентным и иммунопероксидазным методами в случае тканевых и клеточных антигенов либо между агглютинацией, ELISA, РИА и реакциями преципитации в случае растворимых антигенов. При использовании некоторых тест-систем может потребоваться очистка антител для последующего мечения либо получение и мечение антиглобулинового реагента. К оценке преимуществ и недостатков тест-систем следует подходить осторожно. [c.30]

Важность сбалансированных эквивалентных концентраций — использование разных соотношений антиген антитело. На рис. 6.3 видно, ак различия в концентрации антигена (внешние лунки, IgG человека) влияют на расположение линий преципитации при взаимодействии с антителами (центральная лунка, антисыворотка к IgG человека) и а разрешающую способность теста. Это еще раз подтверждает, что при тестировании как антисы1вороток, так и антигенов следует использовать реагенты в различной концентрации. В множественных преципитирующих системах все антигены и антитела не удается выявить при каком-либо одном разведении реагентов. Целесообразно использовать несколько разведений при (Первичном определении преципитирующих свойств и титров сывороток, когда концентрация антигена неизменна. Хорошая аитисыворотка дает четкую полосу преципитации посередине между лунками с антигенами и антителами в разведении более чем 1 50. [c.204]

Титруют комплемент в литической индикаторной системе для определения разведения, дающего 50%-ный лизис-,(СН5о). Для титрования исследуемых антител затем используют разведение комплемента, дающее 4 СНбо-единицы (стандартный избыток). [c.246]

Определение титра компонентов системы a-ELISA. Удоб-йее всего титровать компоненты системы с помощью модифицированного варианта методики, использованной для получения данных табл. 14-3. В такого рода предварительных тестах вполне можно обойтись лишь ограниченным набором разведений Ig. В их число должны войти разведения, соответствующие минимальному и максимальному количествам специфических антител, которые предстоит определять в данной системе, например 0,05 и 100 нг на лунку. Целесообразно включить в тест также два промежуточных разведения. [c.219]

Холодовые аутоантитела часто присутствуют в более высоких титрах, чем тепловые. Они принадлежат главным образом к классу IgM и прочно связывают комплемент. В больщинстве случаев эти антитела специфичны по отношению к антигенам системы групп крови l . Эпитопы I и i присутствуют на молекулах — предшественниках полисахаридов, содержащих эпитопы системы ABO, и являются результатом неполного глико-лизирования основного полисахарида. [c.449]

Капсидный белок УР1 экспонирован на поверхности вириона, т. е. области, которая, как считают для других вирусов, детерминирует тканевое сродство [13, 28]. Вероятно, УР1 участвует в адсорбции вируса на клетке в культуре ткани, так как антитела к этому белку эффективно нейтрализуют инфекционность 1п у11го [24]. Адсорбция вакцинного вируса в тканях, не относящихся к нервной системе, по-видимому, не повреждена, так как в кишечнике вирус размножается до высоких титров и в течение длительного периода. Это наводит на мысль, что при изменении УР1 вакцинного штамма нарушается главным образом адсорбция на клетках органа-мишени, а именно ЦНС. [c.164]

Врожденная инфекция или возникшая сразу после рождения обычно характеризуется отсутствием или присутствием в низких концентрациях нейтрализующих антител, виремией и выделением вируса в течение всей жизни в лимфу и мочу [75, 198]. Как считают Роулс и сотр. [198], развитие персистентной инфекции связано с компетентностью и зрелостью иммунной системы. Взрослые животные, подвергающиеся заражению, обычно справляются с виремией и дают заметные титры нейтрализующих антител. При этом важную роль играют комплемент [261] и гуморальный и клеточный иммунные ответы. В модельных системах за летальный исход инфекции при заражении вирусом ответственны изменения, обусловленные взаимодействием между цитотоксическими Т-лимфоцитами и зараженными [c.402]

Изучение влияния московской воды, обработанной высокотемпературным способом, на показатели иммунореактивности у мышей позволило установить преимущественное нарушение функции В-звена иммунной системы, выражавшееся в снижении титра антител к бараньим эритроцитам и подавлении индуцированной В-клеточным митогеном бласттрансформации лимфоцитов. Кроме того, име>ю место угнетение спонтанного пролиферативного ответа, что возможно связано с более выраженной функциональной активностью супрессорных клеток. [c.248]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология