ТЕМЕД

ТЕМЕД — реактив стабклен при хранении в холодильнике в неразбавленном виде. К полимеризуемой смеси его добавляют непосредственно перед разливкой. [c.94]

Приготовление геля. Для полимеризации 30 мл разделяющего геля (12,5%) смешивают 12,5 мл раствора акриламида, 7,5 мл буфера разделяющего геля и 10 мл воды. После деаэрирования (5—10 мин на водоструйном насосе) к смеси добавляют 16 мг персульфата аммония и 18 мкл ТЕМЕД. Полученный раствор заливают либо в гелевую ячейку для вертикального электрофореза в пластине (с. 97), либо в трубки (с. 95). На поверхность раствора наслаивают воду. После полимеризации удаляют воду шприцом или фитилем из фильтровальной бумаги. Готовят смесь для концентрирующего геля. Смешивают 4 мл раствора № 1 с 5 мл буфера концентрирующего геля и добавляют [c.122]

Приготовление геля. Фракционирование РНК проводят в 2,2%-ном полиакриламидном геле (поскольку полиакриламидный гель данной концентрации имеет полужидкую консистенцию, рекомендуется сначала сделать пробку из геля более высокой концентрации или 1%-ной агарозы трубки можно закрыть снизу целлофановой пленкой). К смеси 2,2 г акриламида и 0,12 г метиленбисакриламида добавляют 33 мл трис-ацетатного буфера pH 7,8, 50 мл прокипяченной Н2О, 0,075 мл ТЕМЕД, 16 мл 0,5%-ного раствора персульфата аммония. Смесь осторожно перемешивают и заливают для полимеризации в кассету или трубочки электрофоретической камеры (с. 94). Сверху наслаивают трис-ацетатный буфер, разведенный в 3 раза (электродный буфер). [c.173]

Применяемый для электрофореза гель полиакриламида получают полимеризацией двух мономеров акриламида и метилен-бис-акриламида (МБА).в присутствии катализаторов, представляющих собой смесь раствора персульфата аммония с N,N,N N -тeтpaмeтилэтилeндиaмидoм (ТЕМЕД). При этом линейные цепи полиакриламида сшиваются метиленовыми мостиками. Гель обладает ярко выраженной гидрофильностью благодаря наличию в структуре правильно чередующихся амидных групп. [c.154]

Реактивы акриламид Трио (триоксиметиленаминометан-жлоргидрат) N. Ы -метилен-бис-акриламид (МБА) N. N. Ы, Ы -тетраметилэтнлендиамин (ТЕМЕД) 1 моль/л раствор соляной кислоты пероксодисульфат аммония, 140 мг/дл раствор сахароза судаи черный В, насыщенный раствор в этиловом спирте (100 мг препарата на 5 мл спирта) электродный Трис- глициновый буфер (pH 8,8). [c.154]

СН2=СН—СО) и сшивающего агента N, N-метил енбисакр ил амида (СН2=СН—СО—NH—СНг—NH—СО—СН2=СН2). Реакция индуцируется химическим или фотохимическим путем в первом случае в качестве катализаторов применяют персульфат аммония — тетраметилэтилендиамин (ТЕМЕД), либо персульфат аммония — 3-диметиламинопропионитрил. При фотополимеризации катализаторами служат ТЕМЕД и рибофлавин при освещении видимым светом. Величина пор геля определяется концентрацией мономеров. Используют ПААГ, как правило, в форме гранул диаметром 1—5 мм. [c.224]

Разработка методов иммобилизации клеток этой бактерии в полиакриламидный гель (ПААГ), в мембраны из поливинилового спирта и адсорбция ее на целлюлозе позволила повысить эффективность метода трансформации стероидов. Для иммобилизации в ПААГ культуру выращивали описанным выше способом, отделяли центрифугированием, отмывали фосфатным буфером. Система для полимеризации состояла из 10 %-ного полиакриламидного геля с 0,5 %-ным относительным содержанием сшивающего агента метиленбисакриламида и катализаторов тетраметил-этилендиамина (ТЕМЕД) и персульфата аммония. Акриламид перекристаллизовывали перед употреблением из хлороформа. В сосуд для полимеризации помещали 6 мл клеточной суспензии, содержащей 0,1—0,6 г биомассы, смесь 1,90 г акриламида с 0,10 г метиленбисакриламида в 11 мл воды, 3 капли ТЕМЕД а и 15 мг персульфата в 3 мл воды. Общий объем 20 мл. Полимеризацию мономера проводили при температуре 10—12 °С в атмосфере азота в течение 2—15 мин. Полученный блок геля механически фрагментировали, продавливая через сито 20—30 меш, промывали физиологическим раствором до исчезновения невключившихся клеток (4—5 л). Полученные гранулы помещали в термостатируемую колонку (1X28 см). Реакционная смесь, пропускаемая через колонку, содержала 0,1 г/л гидрокортизона в фосфатном буфере (pH 7,0), скорость потока через колонку 1,3 мл/ч на 1 мл геля (ЗУ), акцептор водорода — феназинметасульфатдобавляли в концентрации 0,1 г/л с момента трансформации, температура 20—22 °С. Выделение стероидов и определение активности проводили по методике, описанной выше. При таких условиях [c.545]

Для получения мелкопористого (5,5 %) геля, в котором осуществляется разделение веществ в соответствии с их зарядом и молекулярной массой, необходимо смешать 1 объем раствора (48 мл 1 н НС1, 36,6 г трис и 0,23 мл ТЕМЕД на 100 мл бидистиллированной воды), 2 объема (28 г акриламида и 0,735 г БИС в 100 мл дистиллированной воды), 4 объема раствора 2 (0,14 %-ный раствор персульфата аммония) и добавить 1 объем дистиллированной воды. Осторожно перемешав стеклянной палочкой полученную смесь, внести по 2 мл ее в каждую трубку (один конец трубки заклеить и загерметизировать расплавленным парафином). Для предотвращения ингибирования молекулярным кислородом процесса полимеризации геля и формирования ровной поверхности последнего сверху раствора наслоить бидистиллированную воду на высоту 5—7 мм. Процесс полимеризации заканчивается через 30—40 мин, о чем свидетельствует появление четкой границы раздела между гелем и водой и легкое нагревание трубок. [c.271]

На слой разделяющего геля нанести 0,2 мл концентрирующего крупнопористого геля (7 %), который готовят смешиванием 1 объема Б (24 мл 1 н НС1, 2,99 г трис и 0,23 мл ТЕМЕД на [c.271]

М,Ы,Ы, Ы -тетраметилендиамин (ТЕМЕД) перегоняют в вакууме и хранят в темном сосуде при 4°С. Реактивы высокого качества поставляются фирмой Вюгас и другими фирмами. Рекомендуется использовать ДСН ( ос. ч. ) фирмы ВОН, поскольку на разрешение зон и общий конечный результат могут оказывать влияние примеси в ДСН, например натрийтетрадецил-сульфат [21, 50, 118]. Остальные реактивы должны иметь квалификацию ч, д. а, . Для дополнительной очистки ДСН можно [c.28]

Полиакриламидные гели. Свойства геля зависят от общей концентрации мономеров (акриламид+ N,N -би aкpилaмид) и доли сшивающего агента (N,N -мeтилeнби aкpиламида) [34]. Гели готовят путем радикальной полимеризации мономеров, в водном растворе в присутствии катализатора — персульфат аммония + ТЕМЕД. [c.29]

После внесения персульфата раствор перемешивают до растворения кристаллов и быстро переносят в систему для проведения электрофореза. Следует принять меры против образования в геле пызырьков воздуха. Для этого на иглу шприца надевают отрезок тонкого шланга (силиконового, полиэтиленового), по которому осторожно по стенке наслаивают рабочий раствор мономеров. Гребенку для формирования лунок осторожно погружают в раствор, удаляют с зубцов пузырьки воздуха и выдерживают раствор до завершения полимеризации. Скорость полимеризации может варьировать в зависимости ог концентрации персульфата аммония и ТЕМЕД. В среднем полимеризация должна завершиться спустя 10—25 мин после добавления персульфата. Ускоренная или замедленная полимеризация плохо воспроизводится и может привести к образованию геля с неравномерными порами. [c.29]

Раствор деаэрируют дважды — перед добавлением ДСН и (вюрпчио) перед прибавлением персульфата и ТЕМЕД. После внесения в систему иа поверх1юсть раствора осторожно наслаивают воду или насыщенный водой изобутанол. По завершении полимеризации всрхннй слой отсасывают, промывают поверхность геля буфером формирующего геля и наслаивают раствор для приготовления формирующего геля. Для приготовления 10 мл этого раствора (концентрация 4,5%) смешивают 1,5 мл запасного буфера, 2,5 мл буфера формирующего геля, 6,0 мя воды, 10 мг персульфата аммония, 10 мкл ТЕМЕД. [c.31]

Возьмите 40 мл раствора геля, добавьте 40 мкл ТЕМЕДа, [c.44]

Катализаторы полимеризации. ТЕМЕД (Ы,Ы,Ы, М -тетраме-тилэтилендиамин). Для приготовления 50 мл 10%-ного исходного раствора персульфата аммония возьмите 5 г персульфата аммония и добавьте воды до 50 мл. Храните при -f4° . [c.156]

Добавьте 5 мкл ТЕМЕДа и 80 мкл 10%-ного раствора персульфата аммония к 8 мл 80%-ного денатурирующего исходного раствора, тщательно перемешайте и поместите на лед. [c.158]

ТЕМЕД (Sigma) хранят в темноте при 4°С. Используют только недавно вскрытые флаконы. [c.349]

Смещивают в колбе Бюхнера объемом 250 мл реактивы в следуюш,ем порядке, добавляя ТЕМЕД и персульфат после дегазирования. Этой смеси достаточно для заливки 10%-ного разделяющего геля объемом около 37 мл ). Акриламид/бисакриламид (30 0,8%) 13,4 мл [c.350]

Дегазируют в течение 1 мин ТЕМЕД 20,0 мкл [c.350]

Тетраметилэтилендиамин (ТЕМЕД)—(СНз) 2N—СНг—СНа— —К(СН ) — представляет собой бесцветную жидкость с плотностью 0,78 г/см . Концентрация неразбавленного ТЕМЕД — около 6,7 М. [c.9]

ТЕМЕД не является, собственно говоря, инициатором полимеризации акриламида, но служит катализатором этого процесса, заметно ускоряя его протекание. Он эффективен только в своей неионизированной форме, поэтому при полимеризации ак-р,иламида в кислой среде содержание ТЕМЕД следует значительно увеличить. В нейтральной или щелочной средах ТЕМЕД можно вносить в количестве, эквимолярном по отношению к персульфату. [c.9]

В качестве катализатора в последнее время нередко используют диметиламинопропионитрил — (СН9)гМ—СНг—СНа—СЫ (Мр102). Он более эффективен, чем ТЕМЕД, поэтому его вносят в три-четыре раза меньше, чем персульфата аммония. [c.9]

При подготовке определенной серии опытов удобно заранее приготовить концентрированный (30—40%) водный раствор акриламида и метиленбисакриламида с определенным соотношением обоих мономеров. Такой раствор можно хранить в холодильнике в течение нескольких недель. Так же хранят и маточный раствор буфера, например 10-кратной концентрации. ТЕМЕД хранится хорошо, а персульфат аммония растворяют в воде непосредственно перед началом опыта. [c.10]

Для приготовления геля маточные растворы мономеров и буфера смешивают в такой пропорции, чтобы получить нужную конечную концентрацию акриламида и буфера, дополняют до расчетного объема водой и вносят ТЕМЕД. После этого раствор деаэрируют в колбе Бунзена, присоединенной к водоструйному насосу, добавляют расчетный объем раствора персульфата и заливают в трубку или между стеклами для формирования пластин. При правильном выборе концентраций персульфата и ТЕМЕД полимеризация занимает 30—40 мин. Ее следует вести вдали от яркого источника света. [c.10]

Количество ТЕМЕД в объемных процентах можно брать примерно вдвое меньшим, чем персульфата. С учетом различия молекулярных масс и плотности ТЕМЕД это обеспечит их приблизительную эквимолярность. Напомним, что при использовании кислых буферов количество ТЕМЕД следует увеличивать вплоть до 10-кратного по сравнению с персульфатом. Впрочем, нередко вносят избыток ТЕМЕД и в нейтральные буферы. Существенной роли это не играет, если только гель не обнаруживает склонности к растрескиванию при высушивании (для ав торадйографии). В этом случае содержание ТЕМЕД надо снизить. [c.11]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология