Диссоциация субъединиц

Вначале суспензии агарозы с иммобилизованным ферментом промывают 0,1 М Na-фосфатным буфером, pH 7,4, затем небольшим объемом 8 М мочевины, после чего добавляют двойной объем раствора мочевины и оставляют на 1 ч при комнатной температуре (или на ночь при 4°С), используя для перемешивания магнитную мешалку. Удаляют раствор мочевины и вновь промывают сначала небольшим объемом 8 М мочевины, а затем указанным выше буфером. Отсутствие мочевины в пробах контролируют с помощью реактива Несслера. Белок в суспензии определяют описанным выше способом. Снижение концентрации белка в суспензии вызвано диссоциацией субъединиц фермента, не образовавших ковалентных связей с группами носителя. [c.388]

Ассоциация-диссоциация субъединиц для ферментов с четвертичной структурой также является элементом регуляции. [c.35]

Во многих случаях конформационные изменения белков связаны с ассоциацией или диссоциацией субъединиц. Маловероятно, что такие процессы могут протекать достаточно быстро, чтобы они были существенны при каждом превращении молекулы субстрата, так что их роль, по-видимому, сводится к контролю ферментативной активности. На вопрос, связаны ли все эти процессы с изменением конформации отдельных субъединиц, до настоящего времени не было найдено определенного ответа, однако весьма вероятно, что в большинстве случаев такие изменения имеют место, и было бы весьма удивительно, если бы столь большие структурные перестройки происходили бы без соответствующего конформационного изменения субъединиц. В случае щелочной фосфатазы из Е. соИ было показано, что зависящее от времени конформационное изменение кислотно диссоциирующих субъединиц должно иметь место до того, как частицы ассоциируются в нативный фермент [57]. [c.243]

Д. Способствует диссоциации субъединиц. [c.341]

Здесь следует сказать несколько слов о разбавленных растворах ферментов. Хорошо известно, что очень разбавленные ферментные растворы быстро теряют активность, но эту потерю можно предотвратить, если добавить в раствор относительно большое количество другого белка, чаще всего бычьего сывороточного альбумина (БСА). При процедурах по очистке обычно не добавляют сопутствующего белка, поэтому очень разбавленные растворы следует концентрировать как можно скорее (см. разд. 1.4). Но для измерения ферментативной активности желательно, чтобы конечная концентрация фермента в ходе анализа была очень низкой — до 1 мкг-мл . Это может вызвать быструю инактивацию фермента даже разведение образца непосредственно перед анализом иногда приводит к потерям. В этих случаях добавление БСА как стабилизатора оправданно и должно всегда использоваться. Характер действия БСА не ясен и, вероятно, включает различные эффекты. Крайняя степень разведения белка может привести к диссоциации субъединиц, которые либо не обладают активностью, либо, даже если они полностью сохраняют активность, становятся нестабильными и быстро денатурируют. Возможно, что БСА взаимодействует непосредственно с разбавленным белком, снижая вероятность его диссоциации или стабилизируя субъединицы. Кроме того, небольшое количество белка, присутствующего в растворе, может адсорбироваться на стенках контейнера, особенно если он стеклянный. 1 мкг белка может быть полностью связан на 5 см стенки контейнера, но в присутствии 1 мг БСА 1 мкг адсорбированного белка практически полностью будет представлен БСА, и поэтому лишь небольшое количество фермента будет потеряно из раствора. Для разбавления белковых растворов перед анализом следует использовать подходящий буфер, содержащий БСА в концентрации до 10 мг-мл , а в самой анализируемой смеси концентрация БСА должна составлять по крайней мере 0,1 мг мл . [c.255]

A. Связанные микротрубочки стабильны за счет того, что оба их конца защищены от разборки один-в результате прикрепления к центросоме, другой-к кинетохору. По-видимому, кинетохоры закрывают плюс-концы микротрубочек, изменяя таким образом равновесие реакции диссоциации субъединиц. [c.486]

Поскольку потери составляют только 5%, а фермент X составляет 30% от общего количества, нельзя допустить предположения, что фермент X не элюируется. Поэтому можно заключить, что X теряет свою активность. Объяснений этого может быть множество. В частности, потеря активности может происходить за счет диссоциации субъединиц или денатурирования за счет связывания с заряженными группами ДЭАЭ-целлюлозы. [c.551]

Могут образоваться также димеры аа и рр. Димеры и протомеры называют субъединицами белка протомеры — это наименьшие субъединицы. Если из раствора удалить агент, вызвавший диссоциацию, субъединицы вновь объединяются в тетрамерную молекулу, т. е. происходит самосборка молекул гемоглобина. [c.38]

О пространственной структуре молекул ферментов известно пока мало. Считают, что количество спиральных участков в них невелико это было доказано методом рентгеноструктурного анализа для ряда белков, в частности яичного альбумина наиболее подробно — для лизоцима, а также для рибонуклеазы, а-химотрипсина. Сходные данные найдены и методом спектрополяри-метрии, например по Моффиту-Янгу (10—20—30%). Несомненно, что каждый ферментный белок обладает уникальной третичной структурой, где между спирализованными участками располагаются неспирализованные, количество которых велико и которые составляют значительную часть молекулы. Частицы многих ферментов состоят из нескольких (2—4) одинаковых субъединиц, связанных между собой различными способами (четвертичная структура). Часто они удерживаются вместе с помощью атомов металлов, коферментов. Разбавление во многих случаях приводит к диссоциации субъединиц, иногда же силы, связывающие их, более прочны и для этого требуется действие концентрированных растворов мочевины. Химотрипсин, например, находится в растворах чаще в виде димера, при разбавлении образуется мономер (Л1—23 000), а в концентрированных растворах содержится тример. Алкогольдегидрогеназа дрожжей при удалении из нее атомов цинка диссоциирует на четыре неактивные субъединицы (М = 36 000). [c.73]

Молекула цАМФ-зависимой протеинкиназы состоит из регуляторной Я и каталитической С суб,ъединиц. Диссоциация субъединиц под влиянием цАМФ (/ С+цАМФч / — цАМФ+С) активирует протеинкиназу. Кроме того, активность цАМФ-зависимой протеинкиназы находится под контролем специфического ингибитора. Во-первых, ингибитор связывается с активной субъединицей, во-вторых, ингибитор препятствует рекомбинации С с / -цАМФ и освобождению циклического нуклеотида от регуляторной субъединицы протеинкиназы. Вполне возможно, что этот ингибитор белковой природы является модифицированной субъединицей Я. Количество и активность ингибитора изменяются в зависимости от физиологического состояния организма, под влиянием некоторых веществ, в процессе онтогенеза. Протеинкиназы фосфорилируют не только нативные белки, но даже денатурированные, а также полипептиды, полученные в результате гидролиза белков, что свидетельствует о недостаточной их специфичности. [c.71]

Специальную роль в механизме взаимодействия ДБК-кофермента с апоферментом играют одновалентные катионы. Давно установлено, что в отсутствие ионов К" и NH4+ В12-зависимые ферменты не проявляют активности и, наоборот, ионы Na+ и Li+ являются ингибиторами. Причины такого действия катионов пока не вполне ясны. Что касается глицеролдегидратазы, то установлено, что активирующие катионы способствуют ассоциации двух субъединиц апофермента, необходимой для взаимодействия, с коферментом. Инактивирующие катионы, наоборот, вызывают диссоциацию субъединиц [61]. [c.358]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология