Эукариотическая система

В случае использования эукариотических 80S рибосом для трансляции в бесклеточной системе все соответствующие белковые факторы должны быть также эукариотического происхождения. Это два фактора элонгации EF-1 и EF-2 (вместо EF-Тц, ЕР-Т и EF-G), многочисленный набор факторов инициации (eIF-1, eIF-2, eIF-3, eIF-4A, eIF-4B, eIF-4 , eIF-4D, eIF-4E, eIF-4F, eIF-5) и один высокомолекулярный фактор терминации (eRF). Для инициации в эукариотических системах требуется также АТФ. [c.58]

Предшествующее описание репликации в эукариотических системах также хорошо применимо к кольцевым ДНК бактерий с одним изменением. Различные результаты показывают, что репликация бактериальной и вирусной кольцевой двуспиральной ДНК начинается в некой точке хромосомы и протекает затем одновременно в обоих направлениях от этой точки. Таким образом начальный интермедиат в форме глаза (—О—) превращается в форму —I по достижении конца линейной молекулы. Однако в случае бактериальной хромосомы форма глаза превращается в два кольца. [c.200]

Недостаточно создать новый белок, важно оптимизировать экспрессию его гена. Для начала исследователи определяют возможность синтеза достаточных количеств аутентичного белка в прокариотической или эукариотической системах экспрессии. Прокариотическим системам отдается предпочтение, поскольку работа с ними обходится дешевле, а производительность выше. К сожалению, не все микроорганизмы синтезируют функциональные формы гетерологичных белков с одинаковой эффективностью, поэтому необходимо проводить сравнительные количественные оценки. [c.208]

В эукариотических системах провести точный подсчет энергетических затрат представляется более трудной задачей, но, вероятно, и здесь потребность в энергии столь же велика, как и в случае бактериальных рибосом. [c.85]

В эукариотических системах был обнаружен только один фактор освобождения-eRF. Для его связывания с рибосомой, по-видимому, требуется GTP (в случае бактерий этого не нужно). Возможно, гидролиз GTP происходит после завершения терминации это, вероятно, необходимо для диссоциации eRF от рибосомы. [c.85]

Отобранные методом фагового дисплея гены РаЬ-фрагментов с высокой аффинностью к целевому антигену могут быть затем использованы для реконструкции кодирующей последовательности молекулы полного иммуноглобулина человека. Экспрессируя такой ген в эукариотической системе, можно получать высокоэффективные моноклональные человеческие антитела. В отличие от классических моноклональных антител, получаемых в организме животных, они не будут вызывать в организме человека активный антиглобулиновый иммунный ответ, а значит, представляют большой интерес для терапевтического использования. [c.202]

Как видим, в настоящее время имеется широкий спектр методов введения молекул ДНК в культивируемые клетки млекопитающих. Это обеспечивает возможность проведения разнообразных генно-инженерных экспериментов в данной эукариотической системе. [c.338]

ЭУКАРИОТИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ ХОЗЯИН-ВЕКТОР ДРОЖЖИ [c.252]

ЭУКАРИОТИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ ХОЗЯИН-ВЕКТОР ЖИВОТНЫЕ [c.256]

ЭУКАРИОТИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ ХОЗЯИН-ВЕКТОР РАСТЕНИЯ [c.273]

Таким образом, в эукариотических системах связьшание малой рибосомной субчастицы с инициаторной тРНК, по-видимому, предшествует ассоциации с мРНК, являясь первым этапом инициации трансляции. [c.250]

Молекулярная биотехнология — это увлекательнейшая область научных исследований, с появлением которой произошел настоящий переворот во взаимоотношениях человека с живой природой. В ее основе лежит перенос единиц наследственности (генов) из одного организма в другой, осуш ествляемый методами генной инженерии (технология рекомбинантных ДНК). В большинстве случаев целью такого переноса является создание нового продукта или получение уже известного продукта в промышленных масштабах. В ч. I мы познакомим читателя с концепциями молекулярной биотехнологии и теми микроорганизмами, которые в ней используются, с основами молекулярной биологии и методологией рекомбинантных ДНК. Будут описаны такие методы, как химический синтез генов, полимеразная цепная реакция (ПЦР), определение нуклеотидной последовательности (секвенирование) ДНК. Помимо успешного клонирования нужного гена очень важно обеспечить его правильное функционирование в организме нового хозяина, поэтому мы остановимся также на способах оптимизации работы клонированных генов в про- и эукариотических системах. И наконец, мы рассмотрим, как можно улучшить свойства конечных продуктов, модифицируя клонированные гены путем введения в них специфических нуклеотидных замен (мутагенез in vitro). В целом материал, изложенный в первой части, служит фундаментом, который позволяет понять различные аспекты конкретных применений молекулярной биотехнологии. [c.13]

Для получения гетерологичных рекомбинантных белков с клонированной эукариотической комплементарной ДНК (кДНК) обычно используются прокариотические системы экспрессии. Однако в некоторых случаях эукариотические белки, синтезированные в бактериях, оказываются нестабильными или биологически неактивными. Кроме того, как бы тщательно ни проводилась очистка, конечный продукт может быть загрязнен токсичными веществами или веществами, вызывающими повышение температуры у человека и животных (пирогенами). Чтобы решить эти проблемы, для получения рекомбинантных белков, предназначенных для использования в медицине, были разработаны эукариотические системы экспрессии. Такие белки должны быть идентичны природным по своим биохимическим, физическим и функциональным свойствам. Неспособность прокариот синтезировать аутентичные варианты белков обусловлена в основном отсутствием у них адекватных механизмов внесения специфических посттрансля-ционных модификаций. [c.135]

Из всех этих модификаций прокариотические хозяйские клетки наименее всего способны осуществлять правильное гликозилирование и модификацию специфических аминокислот в гетерологичном белке. Однако ни одна эукариотическая система не может осуществить одновременно все постгрансляционные изменения в каждом потенциальном гетерологичном белке. Таким образом, для получения белка с полным набором специфических модификаций необходимо провести тестирование различных эукариотических систем экспрессии и найти такую, которая воспроизводила бы биологически аутентичный продукт. [c.135]

На первый взгляд разработка любой эукариотической системы экспрессии представляется относительно простой процедурой, состоящей в подборе соответствующих регуляторных последовательностей, встраивании их в вектор в определенном порядке и клонировании гена-мишени таким образом, чтобы обеспечивалась его эффективная экспрессия. На практике же создание первого поколения эукариотических экспрессирующих векторов оказалось весьма кропотливым делом, основанным на методе проб и ошибок. До появления работы Муллигана, Хоуарда и Берга [c.146]

Наиболее сильный априорный довод в пользу важной роли этого механизма в компеисации температурных эффектов основан на известных нам фактах относительно индукции ферментов у бактерий и эукариотических организмов. Во многих хорошо изученных прокариотических и эукариотических системах изменения в химическом составе среды, окружающей клетку (напри- [c.246]

Модель, объясняющая механизм встраивания в мембрану, была предложена на основе работ с эукариотическими системами микросом (содержащими рибосомы и эндоплазматический ретикулум). Эти системы способны упаковывать новосинтезированные белки в мембраны, но не функционируют в случае добавления уже выделенного п репротеина. В свое время была выдвинута гипотеза сигнальной последовательности, согласно которой наличие лидерной последовательности почти во всех секрети-руемых белках служит своего рода сигналом, присутствие [c.128]

При попытках выявить промоторы для эукариотических РНК-полимераз были использованы те же подходы, с помощью которых ранее исследовали бактериальные РНК-полимеразы. Эукариотическим системам свойственны два ограничения. Первое in vivo фактически не было получено мутаций, затрагивающих промотор. Поэтому мы не располагаем какой-либо предварительной информацией о локализации эукариотических промоторов. Второе пока не было возможности непосредственно охарактеризовать участки, связывающиеся с какой-либо из РНК-полимераз. Это объясняется сложностью выделения ферментного препарата и отсутствием информации о том, что именно образует активную структуру фермента, хотя, конечно, создание удобной системы, с помощью которой можно будет извлекать ДНК-связывающий сайт из состава инициирующегося комплекса,-дело времени. [c.149]

Некоторые из рассмотренных вариантов наиболее ярко проявляются при синтезе полипротеинов. Этот термин впервые был использован для обозначения полифункцио-нальных продуктов РНК-содержащих геномов ретрови русов. Несколько вирусных белков синтезируются в виде общего предшественника, расщепляемого в определенных участках с образованием индивидуальных функционально активных белков. Эта ситуация формально соответствует общему правилу, согласно которому эукариотические системы трансляции включают только моноцистронные мРНК, но при этом в результате одного акта трансляции может синтезироваться несколько белков. [c.341]

ДНК E. oli и ДНК человека химически идентичны, хотя, конечно, последовательности нуклеотидов в них отличаются и, кроме того, клетка человека содержит примерно в 1000 раз больше ДНК, чем бактериальная. Оказалось, что химический механизм репликации ДНК — один и тот же у прокариот, таких, как Е. соИ, и эукариот, включая человека, несмотря на то что ферменты, вовлеченные в эти процессы, в клетках прокариот и эукариот различаются. Есть все основания считать, что данные, полученные при изучении химии нуклеиновых кислот прокариотических организмов, приложимы и к эукариотическим системам. Действительно, результаты экспериментов с клетками млекопитаюших, аналогичных опытам Мезелсона и Сталя, оказались сопоставимыми с данными, полученными ранее на Е. соИ. [c.58]

Первой эукариотической системой, в которой наблюдались генные мутации, индуцированные радиацией, была Neurospora rassa [1544 1618]. 42% выявленных мутаций оказались транзициями, 37%-вставками или делециями отдельных пар оснований, а остальные имели различное происхождение, причем часть из них, вероятно, были трансверсиями. [c.228]

Системы на основе с-тус-последовательностей. Мышиные моноклональные антитела 9Е10 к белку с-тус широко использу-К)тся в качестве иммунохимического реагента в клеточной биологии и белковой инженерии [165]. Эпитоп, распознаваемый антителами, который представляет собой последовательность из 11 аминокислотных остатков, может быть экспрессирован в составе различных белков и остается распознаваемым антителами. Эта аффинная метка используется в Западном блоттинге, для иммунопреципитации белков, в проточной цитометрии, а также для мониторинга экспрессии генов на уровне трансляции в бактериальных и эукариотических системах, в том числе, и для быстрой очистки рекомбинантных белков, которые могут быть закристаллизованы 166, 167]. Система часто используется для обнаружения рекомбинантных белков, но редко - для их выделения в чистом виде. [c.129]

Запрограммированные перестройки генов, влияющие на их экспрессию, выявлены у прокариот, дрожжей, тетрахимены, трипаносом и млекопитающих. Такое разнообразие позволяет предположить, что гены, экспрессия которых изменяется в результате аналогичных перестроек, имеются у многих организмов. Здесь мы остановимся на некоторых сайт-специфических перестройках у прокариот, опосредующих регуляцию экспрессии генов при помощи инвертирования сегментов ДНК. Это позволит нам ввести некоторые общие понятия, необходимые для обсуждения соответствующих процессов в эукариотических системах. [c.272]

Дрожжи-сахаромицеты Sa haromy es erevisiae) входят в число излюбленных объектов экспериментальной биологии. Данный низший эукариотический организм удобен в работе, имеет относительно небольшой геном и прекрасно изучен генетически и биохимически. Дрожжи обладают многими свойствами, характерными для клеток высших эукариот, и поэтому рассматриваются как экономически наиболее выгодная эукариотическая система для продукции белков человека и животных. Кроме того, благодаря относительной простоте своей организации дрожжи являются замечательной лабораторной моделью, позволяющей изучать на молекулярном уровне такие фундаментальные биологические процессы, как митоз, мейоз, секреция и посттрансляционная модификация белков и др. [c.286]

Обнаружение внехромосомных плазмид ( и Ъ(л) и подробное исследование их струк-турно-функциональной организации дало мощный толчок работам по созданию молекулярных векторов и использованию S. erevisiae для клонирования генов. Данная эукариотическая система предоставляет экспериментаторам принципиально новые возможности по сравнению с бактериальными клетками. [c.292]

Поэтому при создании челночных векторов для эукариотической системы данный участок pBR322 целесообразно делетировать. [c.364]

Структура и свойства участников трансляции эукариотической мРНК пока изучены гораздо хуже, чем у прокариот. И хотя у эукариот вьщеляют те же три стадии процесса —инициацию, элонгацию и терминацию,-на каждой из них требуется больще не-рибосомных белковых факторов. Несмотря на эти различия, последовательности, кодирующие белки прокариот, нормально транслируются эукариотическими системами трансляции при условии соответствующей модификации их мРНК на 3 - и 5 -концах (рис. 3.8, А). И наоборот, кодирующие последовательности эукариот эффективно транслируются системами прокариот, если у них перед 5 -концом инициаторного кодона AUG имеется последовательность Шайна-Дальгарно. Это значит, что трансляционные аппараты обоих типов организмов [c.159]

Клонированные сегменты ДНК можно транскрибировать и транслировать в эукариотических системах либо in vitro с использованием клеточных экстрактов или очищенных ферментов, либо in vivo после введенггя клонированного сегмента в клетку. [c.353]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология