Кроличьи антитела иммуноглобулину

Клетки отмывают от антител PBS и инкубируют 3 ч при комнатной температуре со вторыми, обычно конъюгированными с пероксидазой хрена антителами против первых антител (например, против кроличьих или мышиных иммуноглобулинов). [c.290]

Различия во включении тимидина, обусловленные культуральной средой, особенно те, которые выявляются при стимуляции культур ЛПС и кроличьими антителами против иммуноглобулинов кур, наблюдаются также при культивировании лимфоцитов периферической крови. Как было показано в ряде опытов, полная среда со всеми добавками обеспечивает диффе- [c.416]

Приготовление эритроцитов быка (ЭБ), нагруженных кроличьими антителами к иммуноглобулинам мыши. Бычью кровь хранят в растворе Олсвера и используют в период от 1 до 4 недель после взятия. Для получения эритроцитов ее цент- [c.202]

Овцы, как н кролики, дают хорошие титры антител к Ig человека всех классов. От овец получены преципитирующие антисыворотки, специфичные к подклассам IgG человека, что, по-видимому, свидетельствует о способности этих животных распознавать тонкие структурные различия иммуноглобулинов других млекопитающих. Обычно от овцы и кролика получают одинаково хорошую антисыворотку к изотипам иммуноглобулинов крыс и мышей, а кроме того, как от филогенетически отдаленных видов, и к иммуноглобулинам друг друга. Например, в методах с использованием первых антител кроличьего происхождения вторыми антителами могут быть иммуноглобулины овцы к иммуноглобулину кролика, и наоборот. Очищенные с помощью аффинной хроматографии кроличьи и овечьи антитела стабильны при хранении. В дополнение ко всему вышесказанному Fab- и Р( аЬ)2-фрагменты могут быть получены из овечьих и кроличьих антител по хорошо описанной и легко воспроизводимой методике [И], [c.42]

Желательно предварительно истощить антитело второго порядка экстрактом ли-зированных клеток Е. соН табл. 6.2). Антитела второго порядка должны быть специфичными по отношению к животному, служившему хозяином при получении антител, ис-иользовавшихся при скрининге, например кроличий антимышиный иммуноглобулин, связанный с пероксидазой хрена (DAKO) или антикроличьи иммуноглобулины козы, и т. д. [c.188]

Инкубируют 30 мин с кроличьими антителами против иммуноглобулинов морской свинки в разведении 1 200, [c.416]

Первый щаг к пониманию строения иммуноглобулинов был сделан английским исследователем Р.Портером в 1959 г. Он продемонстрировал, что обработка кроличьих антител IgG-класса ферментом папаином расщепляет молекулу на два основных фрагмента с мол. массами 45 кД и 50 кД. Один из этих фрагментом сохранял способность связывать антиген и в силу этого получил название Fab-фрагмента (от англ. antigen binding ). Второй фрагмент не взаимодействовал с антигеном. Его удалось легко кристаллизовать, что и послужило основанием для его обозначения как F -фрагмента (от англ. с1у81аШ2аЫе ), В количественном отно- [c.53]

ФХ—фитохром no — пероксидаза КАФ — кроличья антисыворотка к фитохрому БАС — баранья антисыворотка к иммуноглобулину кролика КАП — кроличьи антитела к пероксидазе. [c.308]

Антиглобулины (кроличьи антитела к мышиным иммуноглобулинам), конъюгированные с пероксидазой хрена (DAKO), разбавленной 1 1000 PBS, содержащим 10% СЭК. [c.186]

Лизис нагруженных белком А эритроцитов можно использовать при анализе у Xenopus клеток, образующих иммуноглобулины, по описанным в литературе методикам. Для такого анализа, так же как и для обратного локального гемолиза, необходимо определение оптимальных разведений (титрованием) кроличьих антител против иммуноглобулинов Xenopus. Например, нашу антисыворотку для использования в тесте с нагруженными белком А эритроцитами нужно разводить 1 80, а для обратного гемолиза 1 256. Вероятно, антисыворотка обеспечивает более прочное связывание антител низкой аффинности с клетками-мишенями. Ни одни из известных моноклональных антител против IgY не дают присущего кроличьим антисывороткам усиливающего эффекта. [c.503]

Ингвал и др. [324] применилн принцип радиоиммуноанализа, описанный для определения кроличьего иммуноглобулина G однако вместо меченных радиоактивным изотопом антигенов они конъюгировали последние с ферментом — щелочной фосфатазой. Основой конкурентного иммуноаналнза является разделение свободных и связанных с антителами антигенов, так чтобы антигены можно было определить количественно. Это разделение можно облегчить фиксацией антител на твердой фазе путем физической сорбции на стенках полистирольных пробирок. [c.382]

Клеткн селезенки (Н.В21) культивировали в 200 мкл среды в луиках панелей для микротитроваиия ( ostar 3596) при начальной плотности 1-10 жизнеспособных лимфоцитов на лунку прн 40 °С во влажной атмосфере, содержащей 5% Oi. Н-Тимидин (I ыкКн/мл) добавляли на 8 ч через 40 ч после начала культивирования. Проводили четыре параллельных измерения в независимых лунках. Отклонение от среднего значения не превышало 10%. Кр-анти-KIg — кроличьи антитела против иммуноглобулина кур ИСК — нормальная сыворотка кровн кролика. [c.417]

В чашку Петри 100X20 мм (Fal on, номер по каталогу 1005) пипеткой наливают 6 мл раствора антител, содержащего кроличьи антитела против иммуноглобулинов овцы (10 мкг белка/мл) и кроличьи IgG (70 мкг белка/мл), и инкубируют чашку Петри при 4°С в течение ночи. (Антитела против иммуноглобулинов овцы можно использовать повторно.) Включение в смесь неспецифических кроличьих IgG уменьшает связывание имеющих поверхностные иммуноглобулины В-клеток с поверхностью чашки Петри, что способствует их легкому освобождению при промывке струей раствора из пипетки на этапе 7 описываемой процедуры. [c.460]

Выделение кроличьих антител к иммуноглобулинам мыши на иммуносорбенте. Кроличью антисыворотку к IgG мыши прогревают 30 мин при 56 С и наносят на колонку мышиного IgG, иммобилизованного на сефарозе. Специфические антитела, связавшиеся с мышиным иммуноглобулином, элюируют 0,05 М НС1-ГЛИЦИИ0ВЫМ буфером с pH 2,5. Элюат нейтрализуют 0,2 М триС буфером с pH 8 и сразу же наносят на колонку сефадекса G-50, уравновешенного ФР. Концентрацию антител в элюате доводят до 800 мкг/мл и хранят полученный реагент мелкими порциями в замороженном состоянии. [c.203]

Метод аффинной хроматографии можно также использовать для выделения специфических кроличьих антиаллотипических антител. Иммуноглобулины или гомогенные антитела с известной аллотипической специфичностью присоединяют к сефарозе 4В, а элюцию проводят 4M гуанидином на 0,05М глициновом буфере с pH 3,5 (Aasted et al., 1967) или 0,2 М уксусной кислотой (Jaton et al, 1976). [c.71]

ГО комплекса [первичные антитела — вторые антитела]. Пример подбора оптимальной концентрации антител для покрытия фильтров и последующего определения ферритина показан на рис. 20-4. Растворы с тремя различными концентрациями первичных кроличьих антител к ферритину смешивали с различными разведениями препарата козьей антисыворотки, специфичной к иммуноглобулинам кролика, в указанных соотношениях. Образование иммунокомплекса протекало в течение 24 ч. После отделения нерастворимых компонентов смеси фильтрованием через мембранный фильтрат, содержащий растворимый комплекс, наносили на фильтры и высушивали. Готовые фильтры хранили в сухом виде при 2—S . В этих условиях они были устойчивы по крайей мере в течение года. Аналогичный процесс оптимизации осуществляли с антителами к дигоксину и тироксину. [c.304]

Антитела, распознающие минимальные структурные различия между родственными молекулами одного вида животных, часто трудно получить при ксеноиммунизации, поскольку иммунный ответ преимущественно направлен против сильных антигенных различий донора и реципиента. Иногда удается индуцировать специфическую толерантность ио отношению к им-мунодоминантным эпитопам и, таким образом, изменить специфичность гуморального ответа. Данный метод может использоваться для получения как поликлональных, так и моноклональных антител. Мы успешно получали овечью антисыворотку ко всем аллотипическим антигенам локусов а я Ь кроличьих иммуноглобулинов,. вводя -в/в новорожденным ягнятам 500 мг пула очищенного ультрацеитрифугированием кроличьего IgG, лишенного какой-либо одной аллотипической детерминанты в возрасте трех месяцев эту аллель вводили с ПАФ внутримышечно. [c.54]

При одинаковой специфичности и степени флуорохромирования реагенты, приготовленные из кроличьих и козьих антисывороток, могут сильно различаться по окрашивающим свойствам. Дело в том, что иммуноглобулины кролика теряют свою активность при молярном соотношении больше 2 или 3, в то время как бараньи или козьи антитела сохраняют способность к окрашиванию даже после интенсивного флуорохромирования (до 5—7 молекул флуоресцеина иа молекулу IgG). [c.172]

При иммунизации гетерологичным иммуноглобулином преимущественно образуются антитела к изотипическим и ал-лоти пическим детерминантам чужеродного антитела. Это требует проведения абсорбции. В данном случае успешной абсорбции достигают при повторном пропускании кроличьей ан- [c.87]

Планшет инкубируют 30 мин при 37°С во влажной атмосфере, а затем из каждой лунки осторожно отсасывают антитела. Каждую лунку трижды промывают PBS (250 мкл на 1 лунку) и добавляют в них по 10 мкл разбавленных, конъюгированных с флуоресцеином антител против мышиных иммуноглобулинов (кроличьих либо других в зависимости от используемых первых антител). Флуоресцирующая сыворотка должна быть предварительно адсорбирована клетками HeLa. Для этого отмытую суспензию клеток HeLa инкубируют 18 ч на холоду с флуоресцирующими антителами в присутствии ингибиторов протеаз. Готовые для работы антитела, не дающие фоновой флуоресценции, получают центрифугированием (500 g, 5 мин) инкубационной смеси и фильтрацией супернатанта через нитроцеллюлозный фильтр с диаметром пор 300 мкм. [c.268]

Вторые антитела (антиглобулины), например конъюгированные с пероксидазой хрена антитела барана, к мышиным иммуноглобулинам, антитела барана к кроличьим IgG, антитела ролика к IgG барана. [c.231]

П. Моноклональные мышиные антитела к антигенам клеточной поверхности добавляют к экстракту мембраи, солюбилизированных с помощью Ф-40 (примерно 25 мкл асцитной жидкости иа мембраны, выделенные из 10 клеток), и инкубируют 30 мин при комнатной температуре. Затем добавляют оптимальное (по данным предварительного титрования) количество кроличьих илн бараньих антител к иммуноглобулинам мыши и смесь инкубируют 16 ч при 4 С для осаждения иммунных комплексов. Иммунные преципитаты отмывают дважды 0,5%-ным раствором ЫР-40 в ЗФР н один раз 0,5%-ным раствором ЫР-40 [c.63]

При ферментолизе иммуноглобулинов разных видов животных выход пепсиновых F(ab )2-фрагментов может быть различным. При указанных выше значениях pH кроличий иммуноглобулин полностью расщепляется до Р(аЬ )г, тогда как иммуноглобулин барана более устойчив к пепсину даже при снижении pH до 3,9. У мышей в отличие от других животных разные подклассы иммуноглобулинов сильно различаются по чувствительности к пепсину, по крайней мере в случае очищенных миеломных белков (L. Forni, неопубликованные наблюдения). По этой причине может быть очень низким не только общий выход F(ab )2-фрагментов, но и выход фрагментов какого-то определенного подкласса. А это весьма нежелательно, если, как часто бывает, специфическая активность антител неравномерно распределена между подклассами IgG. [c.168]

Весьма часто приходится сталкиваться с таким типом замыкания , при котором первичные антитела узнают носитель в составе комплекса [гаптен — носитель] (тип А). Нам удается преодолеть эту проблему благодаря использованию альбумина, выделенного из организма — донора первичных антител, в качестве носителя для гаптена. При этом ни в одном из препаратов мы ни разу не обнаружили присутствия антител к гомологичному альбумину. Для решения проблем, связанных с замыканием типа [антиген — изотип-специфический антиглобулин] (тип Б) или [антиген — мостиковые антитела] (тип В), необходимо проводить адсорбционную очистку антиглобулинов. Часто приходится сталкиваться с побочным узнаванием человеческого IgG мостиковыми козьими антителами против кроличьих иммуноглобулинов. Для предотвращения взаимодействий такого типа необходимо провести аффинную очистку мостиковых антител на колонке с иммобилизованным человеческим IgG. [c.216]

Рис. 20.2. А. Вирусные антигены в клетках СУ-1 через 48 ч после заражения реови усом типа 3. Клетки окрашивали кроличьей сывороткой против реовя-руса, а затем козьими антителами к иммуноглобулинам кролика, конъюгированными с флуоресцеином. Цитоплазматические включения имеют вид мшго-численных округлых белых пятен. Размер включений тем больше, чем ближе они расположены к ядру. Масшта б — 20 мкм. Б. Электронная микрофотография области клетки СУ-1, зараженной реовирусом типа 3, которая содержит вирусные включения. Увеличение 5250. (Из работы [257] с разрешения авторов.)

Смотреть страницы где упоминается термин Кроличьи антитела иммуноглобулину: [c.383] [c.208] [c.88] [c.273] [c.417] [c.464] [c.322] [c.217] [c.121] [c.292] [c.314] [c.87] [c.79] [c.84] [c.234] [c.141] [c.492] [c.46] [c.46] [c.178] [c.203] [c.217] [c.212] [c.379] [c.380] [c.114]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология