Обработка протеазами

ОБРАБОТКА ПРОТЕАЗОЙ, ПОВТОРНОЕ ВЫДЕЛЕНИЕ ХЛОРОПЛАСТОВ [c.109]

Плазмида Локализация в клетке Обработка эндо-Н Обработка протеазой [c.121]

Б. Как вы считаете, почему в результате обработки протеазой, перйодатом или щелочной фосфатазой корректирующие факторы инактивируются [c.123]

I флюоресцентных красителей. Наиболее широко используется G-окраска (Гим-за). При этом хромосомы предварительно обрабатывают (либо инкубация в солевом растворе, либо обработка протеазой). Предварительная обработка частично нарушает структуру хромосом, которая в некоторых участках восста- [c.253]

Мембранные фильтры с гидрофобной сеткой, рассмотренные в разд. 9.7, позволяют значительно расширить диапазон концентраций, в котором ведется подсчет микроорганизмов, и тем самым разрешают третью проблему, упомянутую в предыдущем абзаце. Забивание мембран можно существенно уменьшить, если из пищевых проб удалить (физическими методами или обработкой анализируемых проб ферментами) те компоненты пищи, которые приводят к этому забиванию. Основная физическая обработка состоит в механическом встряхивании кусочков пищи в сосуде с физиологическим или буферным растворами при этом микробы выделяются из проб и переходят в раствор. Обработка протеазами и такими смачивающими агентами, как Твин-80, также значительно увеличивает фильтрационную способность многих пищевых продуктов. Более де- [c.262]

Где локализуются рассматриваемые белки в мембране эритроцита Белки, соответствующие полосам 1, 2, 4.1,4.2, 5 и 6, экстрагируются из мембран при повышении ионной силы раствора или изменений pH следовательно, они расположены на периферии мембраны. Кроме того, на них не оказывает влияния инкубация интактных клеток или запаянных теней с различными протеолитическими ферментами. В то же время эти белки полностью расщепляются при обработке протеазами разорванных теней. Отсюда можно заключить, что эти периферические белки находятся на цитоплазматической стороне мембраны эритроцитов. Полоса 6-это фермент гликолиза глицеральдегид-З-фосфат — дегидрогеназа (разд. 12.5), полоса 5-актин, необходимый [c.211]

Другая возможность применения этого метода — связывание свободными сульфгидрильными группами на подобной матрице и таким образом, что при обработке протеазой отщепляются незакрепленные пептидные участки, которые затем удаляются элю-энтом. Затем содержащие SH-группы пептиды могут быть раздельно элюированы. Чтобы избежать образования дисульфидных мостиков между молекулами в растворе, можно также активировать SH-группы у белков воздействием 2-2 -дипиридилдисульфи-да до проведения переваривания протеазой, а после этого — очистку путем связывания пептидов активированными SH-группами на сорбенте, например тиолсефарозе 4Б с пониженной активностью. [c.84]

Не все ферменты могут быть выделены из клеток простым экстрагированием водой или солевыми растворами. Многие ферменты связаны с различными структурными элементами, находящимися в клетке, как, например, с митохондриями или с зернами другого типа, от которых они не могут быть отделены простым плазмолизом. Иногда фермент можно освободить от связанного с ним носителя обработкой протеазой это доказывает, что подобный носитель представляет собой белок, гидролизующийся при помощи соответствующей протеазы. Так, инвертаза пекарных дрожжей тесно связана с нерастворимыми веществами, от которых она может быть отделена и переведена в раствор лишь после обработки папаиназой. В других случаях фермент не может быть переведен в раствор никаким образом, поэтому для изучения соответствующей ферментативной реакции необходимо орган, содержащий фермент, измельчить механическими способами так, чтобы внешняя мембрана клеток была разрушена и чтобы стало возможным соприкосновение реагента с ферментом, фиксированным на нерастворимом носителе (см., например, жидкую [c.792]

Такое объяснение открывает возможности для стимулирования деления в суспензии. В самом деле, если задача состоит в том, чтобы вызвать конформационный переход, то можно использовать физические методы (очень неоднородное электрическое поле), биохимические (обработка протеазами, добавление поверхностноактивных веществ конковалина-А и т. п.). Эффект действия факторов роста, по-видимому, также можно отнести за счет влияния их на механические свойства клеточной мембраны. [c.154]

Особого внимания заслуживают работы, посвященные изучению протеазы У8 [21—23, 107]. Согласно литературным данным, при обработке протеазой У8 иногда наблюдается неспецифический гидролиз ряда связей, главным образом связи -5ег-Х-. Однако в большинстве случаев протеаза У8 селективно гидролизует пептидные связи остатков аспарагиновой и глутаминовой кислот [116]. Иногда наблюдается только частичный гидролиз чувствительных к действию фермента связей, особенно если в коротком фрагменте содержится несколько остатков глутаминовой кислоты. [c.151]

Ротавирусы, поражающие различных животных, до недавнего времени не были адаптированы к размножению в культуре клеток. Все попытки адаптации клинических изолятов ротавирусов человека в течение нескольких лет оканчивались неудачей. Впервые ротавирус человека был адаптирован к размножению в культуре клеток Уайеттом и др. [8] после многократного пассирования на поросятах. Однако данный метод слишком сложен для рутинной работы. Одновременно несколькими группами японских исследователей [9—11], которые воспользовались описанным ранее явлением повышения инфекционности ротавирусов после обработки протеазами [12, 13], была разработана методика адаптации ротавирусов к размножению в культуре клеток, применимая ко всем вирусам этой группы. Методика состоит из двух основных этапов обработки вируса, используемого для заражения культуры, трипсином и проведения нескольких слепых пассажей без видимого ЦПД. Ниже приведен протокол, обеспечивающий высокую эффективность адаптации (50—80%). [c.209]

Корреляция полипептидных размеров НА1 и НА2, изо-ированных обработкой протеазой или солюбилизацией вирионов [етергентом, с фактом агрегации, наблюдаемым после удаления (етергента из солюбилизированного НА, несмотря па то что освобожденные протеазой шипы были растворимы, привела к предпо-южению, что НА2 размещен в оболочке вируса [35, 58, 145]. Это (одтвердилось при изучении аминокислотной последовательности I белке было выявлено, что НА1 представляет собой N-терми-[альную часть НА, а НА2 — С-терминальную часть (260]. Таким )бразом, гидрофобная область молекулы, вставленная в мембрану I удаляемая протеолизом, принадлежит С-терминальному участку 1А2. [c.44]

Отсутствие метахромазии или других окрасок не означает, что ГАГ не содержится в неокрашенных структурах, так как биохимическими методами они, как правило, выявляются в соединительной ткани. Причиной несоответствия может служить слишком низкая для гистохимических методов концентрация этих веществ или (чаще) блокада их реакционноспособных групп белками, с которыми они связываются в протеин-поли-сахаридных комплексах. В специально проведенном нами исследовании обработка протеазами — трипсином, химотрипсином, папаином — в небольшой концентрации приводила к появлению или усилению метахромазии и окраски альциановым синим основного вещества в пленочных препаратах соединительной ткани [Шехтер А. Б., 1964, 1966]. Подобный эффект, вероятно, объясняется частичным протеолизом белков и диссоциацией белково-полисахаридных комплексов с деблокированием реакционных групп ГАГ. [c.81]

Примечания Символ +/— в колонке <Юбработка эндо-Н означает, что только 30% О-белка было чувствительно к ферменту эндо-Н другие модифицированные О-белки были либо полностью устойчивы, либо полностью чувствительны. В колонке Обработка протеазой термин Чувствителен означает, что короткий С-концевой домен удаляется при обработке ферментом. Термин Устойчив указывает, что мол. масса С-белка не изменялась при обработке. [c.121]

А. Если трансляция происходит в присутствии микросом, в них активно переносятся белки, транслируемые с каждой из мРНК. Это заключение основано на результатах обработки протеазой и эндо-Н. Новосинтезированные белки защищены от действия протеазы, что схематически изображено на рис. 8-12, где белки представлены на всех дорожках с номером 2. При этом все новосинтезированные белки ковалентно связаны с углеводами, что подтверждается увеличением их электрофоретической подвижности после обработки ферментом эндо-Н (рис. 8-12, ср. дорожки [c.373]

Б. Обработка протеазой приводит к разрушению лизосомных ферментов. При обработке перйодатом или щелочной фосфатазой удаляется маркер узнавания, маннозо-6-фосфат, необходимый для связывания с рецептором, в результате чего ферменты не могут поглощаться клетками (активность их при этом сохраняется). [c.380]

Сегмент М2 кодирует белок )х1/[г1С, расположенный на поверхности вирионов. По данным генетических исследований именно он играет ключевую роль в определении способности реовируса размножаться в тканях кишечника после перорального введения и в устойчивости вируса к обработке протеазами. Хотя до сих пор нет прямых данных о том, что разная устойчивость реовирусов к кишечным протеазам in vivo коррелирует со способностью разных серотипов к размножению, эта возможность кажется весьма привлекательной. [c.295]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология