ПОДСЧЕТ ЖИЗНЕСПОСОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ

ИСО 6222-88. Качество воды. Подсчет жизнеспособных микроорганизмов. Определение количества колоний посевом в питательной агаровой культурной среде или не в ней. [c.30]

Также применять для концентрирования микроорганизмов или для подсчета жизнеспособных микроорганизмов при анализе загрязнений воды. Из изложенного выше видно, что изготовление мембран из альгината алюминия несложно, а их уникальные свойства могут сделать их привлекательными для некоторых исследовательских целей. [c.66]

Глава 9 Подсчет жизнеспособных микроорганизмов [c.237]

Метод подсчета жизнеспособных микроорганизмов с помощью мембранных фильтров характеризуется высокой чувствительностью и простотой. Это привело к тому, что мембранные фильтры стали широко применяться в исследованиях качества воды, и к тому, что они стали производиться промышленностью. В настоящей главе мы рассмотрим общие принципы и методы применения мембранных фильтров для подсчета жизнеспособных микроорганизмов. В следующей главе мы обсудим вопросы специфического применения мембранных фильтров для анализа воды. [c.237]

Применение мембранных фильтров для подсчета жизнеспособных микроорганизмов основано на том, что при пропускании подлежащего испытанию вещества (воздух, вода, фармацевтический препарат) через мембрану микроорганизмы задерживаются на ее поверхности. Если плотность микроорганизмов на мембране невелика, то прямую микроскопию (см. гл. 8) использовать нельзя. Однако, если мембрану поместить в культуральную среду, последняя проникнет в поры, доставит микроорганизмам питательные вещества и даст им возможность вырасти в колонии, видимые невооруженным глазом. Подсчитав колонии, выросшие на поверхности мембраны после соответствующего инкубационного периода, можно получить число жизнеспособных микроорганизмов, которые были задержаны мембраной. [c.237]

СПЕЦИАЛЬНЫЕ МЕМБРАНЫ ДЛЯ ПОДСЧЕТА ЖИЗНЕСПОСОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ [c.238]

Для подсчета жизнеспособности микроорганизмов наиболее общеприняты мембраны из эфира целлюлозы с размером пор [c.238]

Мембраны для подсчета жизнеспособных микроорганизмов 239 [c.239]

МЕТОД ПОДСЧЕТА ЖИЗНЕСПОСОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ [c.240]

Метод подсчета жизнеспособных микроорганизмов 241 [c.241]

Последовательность действий при подсчете жизнеспособных микроорганизмов. Основание фильтродержателя вставляют в открытом виде в вакуумную колбу. С помощью стерильного пинцета с плоскими концами (для стерилизации пинцет можно окунуть в спирт, который затем поджигают) из стерильного пакета достают мембрану и устанавливают ее в основании фильтродержателя, сверху осторожно располагают стерильную воронку и закрепляют ее зажимом (рис. 9.1). Водную пробу пропускают через мембрану под вакуумом, причем, прежде чем вылить пробу в воронку, ее следует хорошо перемешать. В конце фильтрации вакуум следует поддерживать еще в течение нескольких секунд, чтобы удалить оставшиеся капли жидкости. Объем фильтруемой жидкости зависит от содержания микробов, но он должен составлять по меньшей мере 20 мл, чтобы быть уверенным в равномерном распределении микроорганизмов на мембране и избежать значительной их потери на стенках воронки. Если из-за высокого содержания микроорганизмов нужно отфильтровать меньший объем пробы, то, прежде чем внести пробу в фильтровальную воронку, в воронку следует добавить около 20 мл соответствующего стерильного растворителя. В некоторых случаях после фильтрации пробы может потребоваться промывка мембраны небольшим количеством стерильной воды. По завершении фильтрации фильтровальную воронку отсоединяют, а мембрану немедленно удаляют [c.241]

Метод подсчета жизнеспособных микроорганизмов 243 [c.243]

Метод подсчета жизнеспособных микроорганизмов 245 [c.245]

Рассмотренные в разд. 9.3 основные методы подсчета жизнеспособных микроорганизмов в водных пробах предназначены главным образом для лабораторных исследований. Для полевых же работ, где время, пространство и оборудование лимитированы, были разработаны некоторые специальные удобные в работе устройства, позволяющие проводить подсчеты микроорганизмов в водных пробах. [c.256]

Подсчет жизнеспособных микроорганизмов используют, чтобы измерить активность антимикробных агентов, и мембранные фильтры идеально подходят для проверки бактерицидного действия таких агентов. С помощью мембранных фильтров можно оценить антимикробное действие антибиотиков, антисептических и дезинфицирующих средств. Чтобы количественно определить бактерицидное действие химического вещества, подсчет должен проводиться после того, как это вещество находилось в контакте с микробными клетками в течение определенного периода времени. Но, прежде чем проводить подсчет оставшихся микроорганизмов, их нужно отделить от химического соединения, поскольку в противном случае действие последнего может продолжаться во время инкубации. С помощью мембранной фильтрации нетрудно осуществить такое разделение химического вещества и микроорганизмов, и подсчет микроорганизмов можно выполнить, проводя инкубацию мембранного фильтра, содержащего клетки, на какой-либо питательной среде при полном отсутствии химического вещества. [c.266]

В этой главе мы рассмотрели ряд методов и операций, которые можно использовать для подсчета жизнеспособных микроорганизмов. В гл. 10 мы обсудим более подробно методы подсчета бактерий при анализе воды. В настоящей же главе мы рассмотрели общие принципы и некоторые ограничения соответствующих методов подсчета микроорганизмов, а также предупредили о тех мерах предосторожности, которые необходимо предпринимать при этом. Метод мембранной фильтрации следует применять для подсчета жизнеспособных микроорганизмов только в том случае, когда плотность их популяции мала и роль мембраны состоит в том, чтобы сконцентрировать микроорганизмы до необходимой для подсчета колоний плотности. Однако этим методом можно анализировать и пробы с более высокой концентрацией микроорганизмов, если необходимо перенести их колонии в дополнительную диагностическую среду или реагент. Возможность переноса целой коллекции колоний в нетронутом виде из одной среды в другую представляет значительную ценность во многих диагностических процедурах. [c.267]

В данной главе мы рассмотрели конкретные методы анализа воды на присутствие в ней индикаторных и некоторых патогенных микроорганизмов. Изложенный в ней материал является обобщением основных положений гл. 9, посвященной подсчету жизнеспособных микроорганизмов, но содержит более детальные сведения об отдельных микробных группах, обнаружение которых играет важную роль для контроля загрязнения воды. Выбор подходящего мембранного фильтра представляет собой существенный фактор для микробиологического анализа воды по трем причинам. [c.292]

В гл. 8—10 мы уже обсудили использование мембранных фильтров для некоторых биомедицинских целей и при охране окружающей среды. В этих главах речь щла о применении мембранных фильтров для подсчета жизнеспособных микроорганизмов, для их прямой микроскопии, а также в работах по анализу загрязнения воды. Существует также ряд других направлений, в которых мембранные фильтры используют в лаборатории, главным образом в биомедицинских исследованиях. Цель настоящей главы состоит в том, чтобы обсудить некоторые основные применения мембранных фильтров в биомедицинских исследованиях и анализе. [c.293]

Испытание на бактериологическую токсичность предусматривает использование фосфатно-буферной суспензии культуры бактерий Е. соИ, содержащей 30—80 жизнеспособных микроорганизмов в 0,1 мл. Подсчет жизнеспособных микроорганизмов проводят параллельно с использованием как мембраны, так и разливания на чашках. Для проведения исследований с помощью мембраны стерильный буферный раствор объемом 20 мл помещают в воронку над мебраной, а потом добавляют в нее 0,1 мл культуры и полученную суспензию фильтруют. Приготавливают 5 чашек без мембран и 5 чашек с мембранами в виде дисков последние считаются нетоксичными, если в чашках с мембранами сохраняется по крайней [c.113]

В результате многочисленных исследований, особенно микроорганизмов, подвергшихся воздействию стрессовых факторов (см. разд. 10.6), было показано, что для подсчета микроорганизмов идеальная структура пор мембран должна быть такой, чтобы отдельные клетки отчасти захватывались внутрь пор, а не располагались непосредственно на поверхности мембраны. Идеальная мембрана для подсчета микроорганизмов должна обладать определенной степенью анизотропии (см. разд. 2.3), причем размеры пор на верхней стороне мембраны должны быть больше среднего диаметра ее пор. При этом клетки задерживаются частично внутри матрицы мембраны, где они менее подвержены вредному влиянию неблагоприятных факторов, например высушиванию при контакте мембраны с воздухом или нехватке питательных веществ. Этот эффект получил название эффекта колыбели (англ. radling) [35], и подсчет жизнеспособных микроорганизмов на таких мембранах оказывается значительно более эффективным (см. также работу [124]). Поскольку мембраны Нуклепор задерживают микроорганизмы исключительно на своей верхней гладкой ло-верхности, они непригодны для целей подсчета жизнеспособных микроорганизмов. [c.238]

При подсчете жизнеспособных микроорганизмов паиважней-шую роль играет соблюдение стерильности и проведение операций в асептических условиях. Пробы следует собирать в стерильные сосуды и выполнять все операции в условиях, соответствующих естественной среде обитания данного микроорганизма. Как сама мембрана, так и детали мембранного аппарата, которые будут находиться в контакте с пробой, должны быть также стерильными. Фильтродержатель может быть сделан из стекла или из нержавеющей стали, и обе его части нужно стерилизовать отдельно, завернув в плотную бумагу. В лабораторных условиях стерилизацию лучше всего проводить в автоклаве, а в полевых — отдельные детали для стерилиза- [c.240]

Главное преимущество мембранных фильтров с гидрофобной сеткой заключается в том, что подсчет жизнеспособных микроорганизмов, содержащихся в неизвестных материала , может быть выполнен без проведения разбавлений с целью понизить число колоний до уровня, который допускает применение нормальных мембранных фильтров для подсчета. Макси мальное число пригодных для подсчета колоний на таких мембранных фильтрах достигает 30 000, что делает возможным анализ материалов как с высокой, так и с низкой плотностью без разбавления. Будет ли это иметь значительное преимущество в реальной ситуации, зависит от целого ряда факторов. Приведены достаточно сильные доводы, подтверждающие ценность таких сетчатых мембран в пищевой микробиологии [192], а в работе [189] рассмотрены их преимущества для автоматизации микробиологических операций. [c.254]

Затруднения при подсчете жизнеспособных микроорганизмов вызываются не одними лишь мембранами. За дополнительные расхождения в результатах могут нести ответственность также пористые подложки, содержащие питательную среду, и сама среда. Размер и число выросших колоний на мембранах, размещенных на бумажной пористой подложке, могут оказаться меньше, чем на среде с агаром. Это может происходить, если подложка содержит токсичные вещества, такие, как сульфиты или кислоты, сохранившиеся с момента изготовления бумаги, или если подложка адсорбирует некоторые из питательных компонентов, существенных для роста микроорганизмов. Гелдрейх [82] для удаления токсичных веществ, оставшихся в пористых подложках, рекомендует предварительно смоченные подложки помещать в дистиллированную воду и все это выдерживать в автоклаве при температуре 121 С в течение 15 мин, а затем промыть их и вновь упаковать для стерилизации при температуре 121 °С в течение 15 мин, после чего быстро их просушить с использованием вакуума. [c.265]

Тот факт, что микробы переносятся воздушным путем, известен со времен Луи Пастера. Во многих случаях необходимо знать, как велико содержание микроорганизмов в воздухе. Мембранные фильтры применялись для анализа содержания в воздухе пыльцы или микробных спор прямой фильтрацией на мембранах с диаметром пор 0,8 мкм. Споры грибов или пыльца могут быть идентифицированы и подсчитаны методом прямой микроскопии, но к спорам бактерий из-за небольших их размеров должен быть применен упоминавшийся ранее метод подсчета жизнеспособных микроорганизмов. Неспоровые бактериальные клетки на мембране быстро обезвоживаются, и поэтому их нельзя собрать для такого подсчета на поверхности сухой мембраны. Поэтому для анализа содержания неспоровых клеток в воздухе были использованы специальные приспособления для улавливания их жидкостью, которую затем пропускали через мебранный фильтр, чтоби сконцентрировать собранные микроорганизмы [182]. После этого мембрану можно поместить в питательную среду, как обычно (см. гл. 9), или исследовать под микроскопом (см. гл. гл. 8). [c.400]

Отбор проб воздуха для подсчета жизнеспособных микроорганизмов должен проводиться в соответствии с принципами, описанными ранее в этой главе (изокинетический отбор, предосторожности против загрязнений системой подачи воздуха и т. д.) и дополненными мерами по обеспечению стерильности пробоотборника и его держателя. Шуерманн [181] рассматривает некоторые детали взятия проб в фармацевтически чистых помещениях. После фильтрации мембрану с бактериями переносят в асептических условиях в стерильный стакан, снабженный магнитным стержнем для перемешивания, и добавляют 50 мл теплого (температура 30—35 °С) стерильного физиологического солевого раствора. Стакан накрывают стерильной крышкой от чашки Петри и помещают в водяную баню (температура 30—35 °С) по меньшей мере на 20 мин, периодически извлекая его, чтобы подсоединить к мотору, запускающему магнитную мешалку. Растворение мембраны можно ускорить с помощью нескольких стеклянных бусин. После того как мембрана растворится, полученную суспензию можно проанализировать на содержание в ней микроорганизмов любым желаемым методом, с разбавлением или без разбавления саму суспензию можно проанализировать и с помощью прямого микроскопического подсчета. [c.402]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология