Внесение препарата в колонку

Способы набивки колонки, ее уравновешивания прокачкой исходного элюента, внесения препарата, а также варианты и методы осуществления элюции подробно описаны в хл. . Однако следует отметить некоторые особенности, присущие использованию ионообменников. Главная из них связана с возможностью изменения объема обменника (высоты его столба в колонке) при изменении pH и концентрации соли в ходе элюции, особенно для ионообменных сефадексов типов А-50 и С-50. В связи с этим использование адаптора может оказаться неуместным, так что препарат приходится вносить в открытую колонку. Поверхность ионообменника в таком случае иногда защищают от взмучивания слоем сефадекса G-25 толщиной около 5 мм или кружком фильтровальной бумаги (следует убедиться, что препарат пе сорбируется на нем). В ответственных случаях фракционирования препарат имеет смыс. г подслаивать под буфер, как было описано в гл. 3. Следует помнить, что ионообменные сефадексы типов А-50 и С-50 гораздо мягче, чем сам сефадекс G-50. Их следует набивать в колонку с теми же предосторожностями, что были описаны в гл. 4 для сефадекса G-100. [c.281]

ВНЕСЕНИЕ ПРЕПАРАТА В КОЛОНКУ [c.77]

Заметим, что элюцию следует начинать сразу после внесения препарата па колонку илп всегда с одной и той же задержкой, так как продолжительность первоначального контакта исходного препарата с обменником влияет на характер разделения его компонентов. [c.293]

Денситометры, флюориметры и коллекторы фракций были описаны в гл. 3. Так как в случае ионообменной хроматографии объем препарата, особенно при градиентной элюции, может быть значительным, принято сбор и нумерацию фракций начинать с момента внесения препарата на колонку. [c.295]

Кроме очевидного удобства внесения препарата (в любой точке градиента pH), обнаружения и элюции белков, что обусловлено горизонтальным расположением и открытой поверхностью геля, подчеркнем относительную нечувствительность рассматриваемого метода к возможности выпадения в осадок некоторых белков вблизи их изоэлектрической точки. В описанной системе эти осадки будут уходить на дно слоя геля, освобождая его сечение для свободного протекания тока и миграции других белков. При извлечении сефадекса из секции осадок можно собрать вместе с гелем, перенести в колонку и в ходе элюции снова растворить, использовав для этого подходящий буфер или солевой раствор. Возможность примириться с выпадением осадков особенно ценна на ранних стадиях очистки, когда очищаемый белок может составлять лишь малую долю всей белковой смеси. Допуская выпадение в осадок балластных белков, можно значительно увеличить загрузку геля н повысить выход нужного белка. Практика показывает, что для узких диапазонов pH загрузку гранулированного геля при ИЭФ можно довести в случае одного основного белка до 2—4 мг на 1 мл объема геля, а для смеси белков — до 5—10 мг/мл. Прн объеме геля в 80 мл это составляет внушительную величину общей загрузки — до 800 мг белковой смеси. [c.66]

Способность пестицидов к передвижению в почве определяют методом почвенных колонок, с помощью лизиметров или по содержанию пестицидов на разном расстоянии от места внесения. Пестицид наносят на поверхность почвенной колонки, промывают ее установленным количеством воды, а затем послойно в почве колонки определяют содержание пестицида и дают схематическое изображение перераспределения препарата по профилю почвы. [c.212]

Есть три возможности внесения раствора белкового препарата в колонку. [c.68]

При использовании методов 2 и 3 белок быстрее достигает своего изоэлектрического положения, чем при внесении в весь объем колонки. Особенно это относится к методу 3, который следует предпочесть при фокусировании нестойких белков. Как и при других методах ИЭФ, содержание соли в белковом препарате желательно свести к минимуму. Для колонки объемом ПО мл максимально допустимое количество соли в препарате составляет 0,5 ммоль, для колонки объемом 440 мл— 1,5 ммоль. В случае необходимости для сохранения растворимости белка соль в растворе препарата можно путем диализа заменить на 17о-ный раствор глицина. [c.69]

Описанию современной хрэматографической техники (колонок, насосов, детекторов, коллекторов фракций и др.) также посвящена отдельная глава. Наряду с рассмотрением принципов работы этих устройств сюда включены и сопоставляются данные каталогов по последним (на конец 1983 г.) моделям соответствующей аппаратуры, особенно многочисленным для высокоэффективной хроматографии при высоком давлении. В этой же главе приведены подробные рекомендации по общим для всех вариантов хроматографии методическим приемам подготовке колонок, внесению препаратов, осуществлению элюции, детектированию фракций и др. [c.4]

С другой стороны, следует проявлять осторожность прп внесении па колонку препарата в виде кон] ор[трпрованного раствора. [c.40]

В открытую колонку (без адаптора) препарат вносят вручную из пипетки. Начинают с того, что спускают жидкость из колонки так, чтобы открылся (но не начал обсыхать ) слой сорбента. Затем сливную трубку зажимают. Раствор препарата остороншо, чтобы не взмутить сорбент, заливают по стенке колонки, начиная от расстояния в 1 мм над поверхностью сорбента и постепенно вместе с уровнем раствора препарата продвигая кончик пипетки вверх по стенке. После того как весь объем препарата внесен в колонку, сливную трубку освобождают от зажима и дают слою препарата войти в сорбент до того момента, когда его поверхность снова обнажится. Так же, как описано, вносят объем элюента, равный объему препарата, а затем спускают его в сорбент. Такую промывку стенок колонки целесообразно повторить еш е раз. После этого заливают (так же) некий объем элюента (на высоту 1—2 см) и вставляют верхнюю пробку с капельницей. Слой свободного элюента предназначен для того, чтобы обеспечить образование некоторого разрежения над сорбентом, необходимого для всасывания жидкости из резервуара, если он располагается ниже верха колонки при элюции без насоса (образование сифона), или для предотвраш ения обнажения верхнего слоя сорбента при. неработающем насосе и открытом сливе из колонки (в первый момент после открывания слива пз колонки вытекает немного жидкости, затем, если система герметична, вытекание прекращается). Вместе с тем следует иметь в виду, что в слое свободного элюента над сорбентом происходит перемешивание градиента, поэтому в случае градиентной элюции высота этого слоя должна быть минимально необходимой. После того как внесение препарата п подготовка колонки закончены, можно присоединить резервуар нли насос, открыть сливную трубку п начать элюцию. [c.77]

А — положение ротора при заполкенип петли раствором препарата В — положение ротора при внесении препарата на колонку [c.96]

Авторы цитируемой работы не упоминают о степени вязкости исходного препарата, что в случае внесения на колонку непосредственно клеточного лизата представляет интерес, тем более что элюцию вели с довольно большой скоростью — около 12мл/см -ч. В случае растворов ДНК с нежелательным эффектом вязкости всегда приходится считаться, выбирая концентрацию ДНК в исходном препарате в соответствии с приведенными выше рекомендациями (см. раздел Внесение препарата ). [c.143]

Еслп колонка заполняется сорбентом до внесения препарата, то ео полезно промыть сначала >—4 объемалл буфера для посадки [c.409]

Стандартные белковые образцы могут также использоваться для выяснения количественного выхода белка при обратнофазовой хроматографии. Применение для этих целей метилированной (метил- С) карбоангидразы (New England Nu lear) показало, что выход этого относительно гидрофобного белка при хроматографии на колонке Vyda С-18 составляет 100%, причем в случае карбоангидразы полнота выхода практически не меняется при внесении в колонку от 50 нг до 2 мг белка (разд. V, Б, 7, в). Регистрируемое детектором количество элюированного белка линейно возрастало в зависимости от массы внесенного препарата, что подтверждалось аминокислотным анализом (рис. 6-5). Однако такие гидрофобные белки, как овальбумин, часто элюируются с меньшей эффективностью (выход <80%). [c.120]

Рис. 71. Внесение малого объема раств(фа препарата па колонку пз петлп с помощью двух крапов типа 8КУ-4

Авторы дайной работы обратили внимание на то, что n продажной октилсефарозе L-4B фирмы Pharma ia имеются какие-то особо гидрофобные примеси. Часть исследуемого ими фермента сорбировалась на колонке так прочно, что ЭГ ее не снимал. Для элюции этой доли фермента нужно было использовать 1 %-ный раствор холата натрия. Столь прочное задержание части фермента было связано именно с особенностями матрицы, поскольку при внесении на новую порцию сефарозы препарата, ранее снятого с колонки эти-ленгликолем, часть его снова так же прочно сорбировалась на матрице. Можно предположить, что при модификации сефарозы в октиловом спирте присутствовали более высокомолекулярные примеси. [c.188]

Е. И. Гапоном и Г. М. Шувасвой (1950) детально изучена хроматография неорганических ионов на оригинальном препарате алюминатной окиси алюминия. Алюминатная окись алюминия без дополнительной обработки является катионообменным адсорбентом и поэтому пригодна для хроматографии катионов. Адсорбент может быть внесен в стеклянную трубку в виде сухого порошка или водной суспензии. В последнем случае раснределение адсорбента получается более равномерным. Раствор ионов вводится в колонку без отсасывания, затем включается насос. Схема процесса ионного обмена может быть представлена следующим образом (М — символ катиона, Ъ — аниона растворенной соли) [c.134]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология