Ионообменная хроматография сефадексах

Осаждение сульфатом аммония, ионообменная хроматография на ДЕАЕ-цел-люлозе и ЗР-сефадексе, сефадексе 0-200 [c.124]

Г ель-хроматография на Сефадексе 0-50 и 0-100, ионообменная хроматография на ДЕАЕ-сефадексе [c.124]

Удобным методом разделения порфиринов и их комплексов (гемов) является ионообменная хроматография, главным образом на сефадексах. [c.139]

Для бобовых многие авторы предпочитают использовать ионообменную хроматографию (DEAE — целлюлоза, DEAE — сефадекс и др.) гель-фильтрации. Этот метод в целом обеспечивает достаточное разрешение и использовался для фракционирования белков сои [20,60, 116], гороха [40,47] и люпина [34]. [c.154]

В качестве сорбентов для тонкослойной хроматографии азотсодержащих соединений (амины, аминокислоты и их производные, белки) используют производные целлюлозы, обладающие ионообменными свойствами, сефадексы, гидроксилапатит, силикагель, порошки целлюлозы. [c.111]

Однако необходимо отметить, что фракции, элюируемые с сефадекса, как правило, не являются гомогенными и содержат несколько пептидов (до 10 и более). Поэтому этот метод разделения необходимо сочетать с такими приемами фракционирования, как фингерпринт и ионообменная хроматография. [c.83]

Декстран ( Sephadex ) — очень гидрофильный материал. Присоединение ионогенных групп происходит также по гидроксилалг полисахарида. Пористость и жесткость матриц на основе сефадексов зависит от процентного содержания сшивки (эпихлоргидрина). Модифицированные сефадексы для ионообменной хроматографии выпускаются на основе только двух типов сефадексов G-25 и G-50. Размеры пор у модифицированных сефадексов значительно выше, чем у двух исходных типов матриц, за счет уже знакомого нам эффекта расталкивания одноименно заряженных ионогенных групп. Ионообменные сефадексы соответственно и менее жестки их объемы тоже могут изменяться в зависимости от pH и ионной силы элюента. Особенно сильно это выражено у ионообменников, полученных на основе сефадекса G-50. Рабочий диапазон pH 2—12. [c.251]

В растительном материале протеолипиды представлены в хлоропластах. Для выделения их используют различные методы осаждения, диализ, хроматографию на сефадексах, электрофорез, ионообменную хроматографию и др. [c.379]

Применение сефадекса дало возможность выделять и разделять аминокислоты, используя различия в заряде и размерах молекул. Поэтому применение гель-хроматографии к исследованию загрязнений воды легко осуществимо. Ионообменную хроматографию широко используют в автоматических анализаторах [96]. Описано также ее применение для исследования вредных примесей в воде [93, 94]. Автоматизированную хроматографию на силикагеле использовали также для анализа аминокислот [7], однако обычно предпочитают ионный обмен. [c.411]

Достигнуто хорошее отделение от других соединений очистка производилась с использованием ионообменной хроматографии и на сефадексах [c.417]

В ионообменной хроматографии целлюлозоиониты применяются либо в виде порошка, которым заполняют колонку, либо в виде сефадексов и химически сшитых агарозных гелей в тонкослойной хроматографии (см. гл. IV). [c.117]

Для разделения в препаративных целях преобладающим методом является жидкостная колоночная хроматография, а для нестабильных веществ она является единственным методом, помимо тонкослойной хроматографии. Классическими адсорбентами для колоночной хроматографии являются силикагель, окись алюминия и кремневая кислота, позднее стали использоваться также силикагель и окись алюминия, пропитанная раствором нитрата серебра, и менее часто флорисил и древесный уголь. Для разделения терпеновых метаболитов и сильнополярных тер-пеновых веществ используются также различные типы ионообменных смол, сефадексы и модифицированные целлюлозы. Несмотря на то что вплоть до настоящего времени терпеновые вещества разделялись преимущественно методами. [c.249]

Ионообменная хроматография. После диализа раствор наносят на колонку (4x20 см), заполненную ДЭАЭ-сефадексом А-50, уравновешенную буфером В. Колонку промывают тем же буфером (500 мл), после чего проводят элюцию 0,3 М трис-фосфатным буфером, pH 8,0, содержащим 0,1 мМ ЭДТА (500 мл). Фракции, содержащие фермент, объединяют и добавляют сульфат аммония до 807о-ного насыщения. Продолжают перемешивание в течение часа, центрифугируют (20 мин при 15000 ). Осадок осторожно суспендируют в буфере В, насыщенном сульфатом аммония, и хранят при 4° С. [c.245]

Хроматография на Ультрагеле АсА-44, ионообменная хроматография на ДЕАЕ-и ЗЕ-сефадексе, конканавалин-А-сефарозе [c.124]

Л. извлекают из водорослей горячей водой или разб. к-тами сопутствующие кислые полисахариды отделяют осаждением в виде нерастворимых солей (напр., с катионными детергентами типа цетилтриметиламмонийбромида) или ионообменной хроматографией. М-Цепи и G-цепи разделяют хроматографически с использованием в качестве сорбента диэтиламиноэтилцеллюлозы (ДЭАЭ-сефадекс) в мо-либдатной форме. [c.577]

Ионообменная хроматография целлобиогидролаз и целлобиаз протекает, как правило, с высокими выходами ферментов по активности (50-90%). Иная картина наблюдается при очистке эндоглюканаз в режиме сорбции фермента с последующей его элюцией путем увеличения ионной силы. Как уже отмечалось, для этого требуется нанесение фермента при pH 7-8,5, что наряду с длительностью процесса (особенно при использовании мягких носителей типа сефадекс) приводит к значительным, до 90%, потерям активности фермента. Выходом из этого положения является применение более жестких носителей на основе сферона, трисак-рила, методов ВЭЖХ. Как будет показано ниже, это позволяет значительно увеличить разрешающую способность методов при практически полном сохранении активности фермента за счет быстрого проведения процесса. [c.125]

Хюбнер и др. [98] разделяли глютенины после восстановления и алкилирования (Я -глютенины) гель-фильтрацией на сефадексе G 200 (0,03М уксусная кислота, 4М мочевина) на три фракции (А, В, С) равной величины, из которых первая (А) обнаружена в агрегированной форме. Две неагрегированные фракции (В, С) были повторно фракционированы ионообменной хроматографией на сульфоэтилцеллюлозе. В таких условиях фракция В разделяется на 7 фракций, из которых некоторые, хотя состоят из нескольких субъединиц с разными молекулярными массами, при электрофорезе в кислом pH ведут себя как гомогенные. Аналогичные результаты получены [89] при фракционировании на сефадексе G 100. Данно и др. [58] добивались аналогичного разделения путем. избирательного осаждения субъединиц этанолом. Для фракционирования субъединиц глютенинов используются также гель-фильтрация и ионообменная хроматография после избирательного растворения в уксусной кислоте [127]. [c.200]

В настоящее время применяют ряд усовершенствованных методов разделения нуклеиновых кислот на фракции из суммарного препарата, полученного описанным методом. Это прежде всего хроматография на геле фосфата кальция, ионообменная хроматография (в качестве адсорбентов используют ДЭАЭ-целлюлозу, ДЭЛЭ-сефадекс и др.), ультрацентрифугирование в градиенте плотности сахарозы, хроматография по сродству на белковых носителях, фильтрация через гели агарозы и сефарозы, гель-электрофорез и др. [c.97]

Другие полимерные полисахариды (от С-Ю до С-200) 8Р-сефадекс 1 Декстраны, сшитые мостиками -0-СН2-СН(ОН)СН2-0-с помощью эпихлоргидрина Сульфопропильная -0-(СН2)з-80з Разделение по молекулярным массам Сочетание ионообменной хроматографии с молекулярно-ситовым действием [c.239]

Как уже отмечалось, иониты на основе целлюлозы и декстрана не обладают необходимыми механическими и ионообменными свойствами и вследствие этого их редко используют для хроматографического разделения аминокислот. Карбоксиметилцеллюлозу применяли для отделения лизина от его олигомеров и полимеров [26]. Известны попытки модификации DEAE-и QAE-сефадексов путем введения дополнительных поперечных связей и применения их для разделения цистеина и глутатиона [27]. Использование дауэкса 1-Х8 и сефадекса G-10 означает переход от ионообменной хроматографии к гелевой [28]. [c.334]

При предварительном фракционировании природных препаратов удобно разделять индолы на кислые, основные, нейтральные и амфотерные фракции. Эффективным методом фракционирования индолов является ионообменная хроматография [116]. Смесь индолов последовательно пропускают через смолу дауэкс 50 [( 2Hs)3N+], удерживающую соединения с основными и амфотерными свойствами, затем через сефадекс А-25 (в ацетатной форме), который адсорбирует соединения, обладающие кислыми свойствами, и в элюате получают нейтральную фракцию. Основные и амфотерные индолы элюируют триэтиламином и далее разделяют на смоле дауэкс 1 (НСОО ). Индолы с кислотными свойствами элюируют уксусной кислотой или ацетатом аммония. [c.139]

Развитие ТСХ шло несколькими путями. Во-первых, всемерно расширялась область ее применения, от эфирных масел и алкалоидов — первых объектов ТСХ, исследователи перешли к анализу полярных соединений (аминокислоты и их производные, феполрл и др.) и, наконец, к высокомолекулярным соединениям — синтетическим полимерам и полимерам природного происхождения — белкам и нуклеиновым кислотам. Неорганические соединения стали также исследоваться методами ТСХ. Во-вторых, расширялся диапазон используемых адсорбентов. Вслед за окисью алюминия и силикагелем нашли применение окись магния, силикат магния, ионообменные кристаллы, целлюлоза и ее ионообменные производные, сефадексы, пористые стекла. Очень интересное направление в развитии ТСХ связано с работами Ванга [5—7], предложившего для хроматографии пористую полиамидную пленку, которая наряду с хорошими гидродинамическими характеристиками обладала необходимой устойчивостью, позволяющей ее использовать многократно. В-третьих, исследовались теоретические аспекты ТСХ, связанные с динамическими характеристиками этого процесса [8—11], особенностями поведения многокомпонентного элюента на хроматографической пластинке, который разделяется на аь -тивном адсорбенте, образуя отдельные зоны разного состава (так называемая нолизональная хроматография) [12, 13] и, наконец, с вопросами [c.134]

Для тонкослойной хроматографии используется большой ассортимент пористых материалов, которые могут выполнять роль сорбентов (адсорбционная, ионообменная хроматография) или пористых твердых носителей для неподвижной жидкой фазы (распределительная хроматография). Основными видами пористых материалов, применяемыми в тонкослойной хроматографии, являются силикагель, окись алюминия, кизельгур, порошкообразная целлюлоза и целлюлозные ионообменники. В меньшей степени используются ионообменные смолы, полиамидные порошки, сефадексы, полиэтиленовый порошок, гидроксилаппатит, силикат магния, сульфат кальция, смеси гидроокиси кальция с силикагелем (6 1 и 4 1), флоризил (смесь силикагеля и магнезии). [c.285]

Несколько большего успеха удалось добиться с помощью ионообменной хроматографии. В качестве адсорбентов обычно используют слабые аниониты — диэтиламиноэтилцеллюлозу или ДЭАЭ-сефадекс. Транспортные РНК при хроматографии на ДЭАЭ- и ЭКТЭОЛА-целлюлозах двигаются компактной зоной, и лишь тщательный анализ показывает, что имеет место частичное разделение. [c.336]

Приведем еще один пример, демонстрирующий применение биполярного ионита. Порат и Фриклунд [156] применяли хроматографию на биполярном ионите для фракционирования яда змеи Naja nigri ollis. Ионит приготавливали путем связывания Р-аланина с сефадексом G-75 после активации последнего бромцианом, проведенной по методике, описанной в разд. 7.2. Результаты фракционирования показаны на рис. 5.32. Последующее регенерирование колонки и приведение биполярного ионита к равновесию демонстрируется на рис. 5.33. Некоторые примеры хроматографии белков даны в табл. 5.17. Большое число ссылок на работы по применению ионообменной хроматографии для разделения белков и ферментов можно найти в библиографиях [40, 41]. [c.320]

Попытки разделить антибиотик с помощью ионообменной хроматографии, препаративным электрофорезом на акриламидном геле, проти-воточным распределением по Крейгу не увенчались успехом. В лучшем случае получалась смесь веществ, в которой содержание пролина увеличивалось до 0,4—0,6 моль1моль антибиотика. Однако при использовании метода гель-фильтрации на колонке с сефадексом 0-25 нам удалось получить биологически активный компонент антибиотика А-128, [c.399]

Методика [17]. Клеточные стенки (250 мг) La toba illus plantarum 10i6 суспендируют в 20 мл 0,5 н. раствора едкого натра и суспензию перемешивают 4 ч при 22 °С. За это время 95% фосфата переходит в раствор. Смесь центрифугируют (10 000 g, 30 мин) и супернатант нейтрализуют 0,5 н. соляной кислотой, после чего экстракт диализуют против дистиллированной воды и лиофилизуют. На этой стадии выделения препарат содержит в небольшом количестве пептидные вещества, основную часть которых удаляют, используя ионообменную хроматографию (см. далее). Кроме того, тейхоевую кислоту можно также очистить гель-фильтрацией на сефадексе G-50 [16]. [c.133]

Ионообменную хроматографию белков [20] выполняют на ионообменниках, имеющих гидрофильную матрицу, например на целлюлозе и декстране. Анионообменники, особенно ОЕАЕ-целлюлозу и ОЕАЕ-сефадекс, используют чаще, чем катионооб-менники типа СМ-целлюлозы. Ионообменники на основе целлюлозы имеют открытую сетчатую структуру с ионизованными центрами, легкодоступными для белков. Число ионных связей, образующихся между обменником и белком, зависит не только от используемого материала, но также в большой степени от pH и ионной силы буфера. Эти ионные пары постоянно диссоциируют и образуются вновь, так как ионы элюента конкурируют за центры обмена. Обменники, пригодные для фракционирования белков, имеют низкую плотность зарядов, поэтому число ионных связей между ионитом и отдельными молекулами белка не столь велико, чтобы вообще воспрепятствовать продвижению последних вдоль колонки. Хотя ионные связи постоянно диссоциируют и образуются вновь, в начале хроматографирования белок связывается с ионообменником и не элюируется с колонки. Однако когда концентрация небольших конкурирующих ионов буфера возрастает до такого уровня, что все связи одновременно разрываются, белок начинает двигаться вниз по колонке. Если в процессе разделения используют градиент ионной силы, белок, перемещающийся в стартовой зоне медленнее, чем буфер, элюируется им при увеличении концентрации ионов. Таким образом, элюирующая способность буферного раствора постоянно увеличивается и макромолекула перемещается все быстрее и быстрее. Скорость ее перемещения становится сравнимой со скоростью движения жидкости, когда в элюенте достигается такая концентрация соли, которая эффективно препятствует взаимодействию молекулы белка с обменником. Важное значение в каждом отдельном случае имеет профиль градиента чтобы увеличить разрешение пиков в определенных участках хроматограммы, используемый градиент должен быть сравнительно пологим, но в то же время достаточно крутым в других участках, чтобы избежать уширения пиков. [c.108]

Смотреть страницы где упоминается термин Ионообменная хроматография сефадексах : [c.286] [c.414] [c.184] [c.273] [c.87] [c.123] [c.123] [c.254] [c.284] [c.19] [c.54] [c.58] [c.84] [c.278] [c.61] [c.296] [c.333] [c.85] [c.161]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология