Разделение рибосомальной РНК

Другим эффективным денатурирующим агентом является деионизованный формамид. Если РНК, растворенные в 98%-ном формамиде, подвергнуть электрофорезу в низкопроцентных полиакриламидных гелях, также содержащих 98%-ный формамид, то подвижность РНК будет определяться размерами их молекул [89, 90]. С помощью этого метода было осуществлено как аналитическое, так и препаративное разделение многих матричных и рибосомальных РНК [78] (рис. 10.7). [c.179]

Хроматографию проводят на термостатированной колонке (2,5X ХЮО см) с биогелем А-15 (100—200 меш) (Bio-Rad. Labs., Ri hmond, alif., U.S.A.) O скоростью подачи 30 мл/ч. В качестве образца наносят 0,4—0,8 мл рибосомального препарата с поглощением примерно 3,00 при 260 нм. Анализ элюата ведут, измеряя оптическую плотность при 260 нм. Типичный пример разделения рибосомальных препаратов на биогеле А-15 приведен на рис. 50.1. [c.312]

В другой работе [Howard, Traut, 1973] разделение рибосомальных белков по заряду в первом направлении вели тоже в 4%-ном ПААГ в присутствии 6 М мочевины, но в 0,4 М Трис-боратном буфере, pH 8,7. При этом pH часть белков рибосом оказывается заряженной отрицательно, а другая часть —положительно. Белковый препарат смешивали с расплавленной 1%-ной агарозой и вносили в середину трубки, наслаивая его на заполимеризованный нижний участок ПААГ. После затвер-девания агарозы в трубку заливали новую порцию смеси моно меров и полимеризовали верхний участок ПААГ. При этом в интересах концентрирования полос на обеих границах с ПААГ агарозу с белковым препаратом полимеризовали в разбавленном (0,06 М) Трис-боратном буфере. При включении напряжения миграция белков шла в обе стороны —к катоду и аноду. Во втором направлении разделение белков вели по их размерам, но без обработки ДДС-Na. Для этого использовали пластину еще более мелкопористого геля, чем в предыдущей работе (Т= = 18,25 С=1,37), полимеризованного в 0,9 М уксусной кислоте, титрованной КОН до pH 4,5, также с добавлением 6 М мочевины. В этом случае все белки были заряжены положительно и мигрировали к катоду. В качестве лидирующего красителя использовали 0,1%-ный раствор пиронина. Из цилиндрика геля [c.79]

Гамильтон [Hamilton, 1974] при разделении рибосомальных белков по заряду в первом направлении использовал ступенчатый электрофорез в кислом буфере (7,5%-ный ПААГ с pH 4,6 — в рабочем геле, 2,5%-ный ПААГ с pH 6,5 —в формирующем). Во втором направлении он вел разделение белков в комплексе с ДДС-Na в 15%-ном ПААГ. Обработку детергентом он осуществлял, вымачивая извлеченный из трубки гель первого направления в 1%-ном растворе детергента. В работе были определены молекулярные массы рибосомальных белков (путем сравнения с маркерами во втором направлении) и оценены их количественные соотношения в составе малой субъединицы рибосом печени крысы. [c.80]

Позже был описан аналогичный метод разделения 28S и 18S рибосомальных РНК на колонках, заполненных нитроцеллюлозой типа Nitro el S фирмы Serva [Popovi , 1982]. Недавно Попович [c.179]

М мочевины, 1 мМ ДТТ и 0,5% метиламина. На колонке СМ-целлюлозы (1 X 30 см) линейным градиентом концентрации Na l (О—0,4 М) смесь белков удавалось разделить примерно на 20 фракций (рис. 122). Конечно, по своему качеству это разделение уступает двумерному электрофорезу рибосомальных белков, но зато его можно вести в любом препаративном масштабе и нет проблемы элюции белков из геля. [c.311]

В девятом издании Определителя бактерий Берги все обнаруженные организмы, отнесенные в царство Prokaryotae, разделены на 33 группы. Признаки, по которым осуществляется разделение на группы, как правило, относятся к категории легко определяемых и вынесены в названия групп, например грамотрицательные аэробные палочки и кокки (группа 4), анаэробные грамотрицательные кокки (группа 8), грамположительные палочки и кокки, образующие эндоспоры (группа 13), скользящие бактерии, образующие плодовые тела (группа 24). Основная идея классификации по Берги — легкость идентификации бактерий. Для осуществления этого используют совокупность признаков морфологических (форма тела наличие или отсутствие жгутиков капсулы способность к спорообразованию особенности внутриклеточного строения окрашивание по Граму), культуральных (признаки, выявляемые при культивировании в лаборатории чистой культуры), физиолого-биохимических (способы получения энергии потребности в питательных веществах отношение к факторам внешней среды нуклеотидный состав и последовательность нуклеотидов в молекуле ДНК наличие и характер минорных оснований в ДНК нуклеотидный состав рибосомальной РНК последовательность аминокислот в ферментных белках с аналогичными функциями). [c.158]

Достижения в области изучения первичной структуры нуклеиновых кислот непосредственно связаны с развитием методов фракционирования олигонуклеотидов. Ускорению этих исследований способствовало наличие очищенных препаратов РНК и рибонуклеаз, специфически расщепляющих одноцепочечную молекулу РНК. К настоящему времени установлена полная нуклеотидная последовательность многих РНК, в том числе многочисленных тРНК, 5S- и 5,8S-PHK, информационных и рибосомальных РНК. Работы по определению первичной структуры ДНК начались несколько позднее, однако благодаря использованию электрофоретических методов, позволяющих быстро анализировать смеси, они вскоре достигли того же уровня, что и исследования РНК. Стратегия установления первичной структуры нуклеиновых кислот описана во многих превосходных обзорах [5, 121—123]. В настоящем разделе особое внимание уделено методам электрофореза на бумаге и в геле, используемым для разделения рибонуклеотидов и дезоксирибонуклеотидов. [c.188]

Георгиев Г, П., Мантьева В, Л, Информационная и рибосомальная рибонуклеиновые кислоты хромосомно-ядрышкового аппарата, методы разделения и нуклеотидный состав. — Биохимия , 1962, т. 27, с. 949—957. [c.371]

Во многих случаях электрофореза, описанных ниже, бывает желательно оценить молекулярные размеры (или молекулярную массу) фракционируемых нуклеиновых кислот. Для этой цели удобно иметь набор молекул того же типа, но известной длины. Проведя разделение смеси таких маркеров в отдельном треке пластины геля, можно сопоставить положение полосы исследуемой нуклеиновой кислоты в параллельном треке с расположением полос маркерного набора. Для РНК с этой целью используют тРНК, 5S, РНК,, рибосомальные и другие РНК известного размера. Для ДНК роль маркеров выполняет обычно набор фрагментов известной длины, полученных при расщеплении хорошо [c.125]

Так, Миро и соавторы еще в 1971 г. в таком градиенте продемонстрировали очень хорошее разделение РНК из ядрышек HeLa в интервале размеров 18—45S. На приведенной в их работе электрофореграмме (рис. 37) видны острые пики и убедительное разделение таких близких по величине молекул, как предшественник рибосомальных РНК (45S) и промежуточная форма его процессинга (41S) [Mirault et al., 1971]. [c.142]

Таким образом, используя комбинированный метод солевого фракдионирования с хроматографией на дорошко-вой целлюлозе, из тотального препарата РНК из зараженных клеток можно выделить три типа РНК рибосомальную хозяйскую, вирусспедифическую репликативную и репликативную промежуточную формы, Франклин показал, что в указанных условиях нативная ДНК и г-РНК не сорбируются на целлюлозе, а денатурированная ДНК элюируется 15%-ным этанолом. Однако этим методом невозможно разделить различные типы односпиральных РНК. Но при сочетании этого метода с фракционированием на МАК е и в градиенте плотности сахарозы можно добиться хорошего разделения основных типов нуклеиновых кислот, выделяемых из зараженной вирусом клетки [c.185]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология