Определение специфичности гибридом

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СПЕЦИФИЧНОСТИ ГИБРИДОМ [c.320]

Для определения специфичности гибридом используют, как правило, непрямой метод ИФА с использованием антивидовых антител, конъюгированных с ферментной меткой. В нашем случае используются [c.320]

Отбор моноклональных антител по специфичности взаимодействия с антигеном. Для того чтобы оценить возможности моноклональных антител в иммуноанализе, необходимо в первую очередь выявить их способность перекрестно реагировать с другими соединениями. Поскольку процесс получения гибридом длителен и трудоемок, определение специфичности взаимодействия моноклональных антител с антигеном желательно проводить на как можно более ранних этапах после их получения. [c.172]

Клетки миеломы находят широкое применение для получения гибридом - линий клеток, производящих моноклональные антитела определенной специфичности. Поскольку эти клетки осуществляют эффективную секрецию рекомбинантных белков, они хорошо изучены в отношении экспрессии в них соответствующих рекомбинантных генов, введенных с помощью трансфекции. Кроме того, такие клетки способны расти в суспензионной культуре (без прикрепления к поверхности субстрата), что облегчает их культивирование при необходимости крупномасштабной наработки. [c.178]

В клетке можно пометить любые молекулы для этого е них вводят один или несколько радиоактивных атомов. Нестабильные радиоактивные атомы распадаются, испуская излучение, что позволяет прослеживать судьбу исследуемых молекул. Применение радиоизотопов в клеточной биологии ограничено двумя видами экспериментов анализ метаболических путей по методу вытеснения метки и локализацией меченых молекул в клетке с помощью радиоавтографии. Антитела представляют собой очень удобный и чувствительный инструмент для локализации специфических биологических макромолекул В организме позвоночных животных продуцируются миллионы различных антител, в каждом из которых имеются участки связывания, опознающие специфические группы молекул. Метод гибридом позволяет получать моноклональные антитела с одинаковой специфичностью практически в неограниченных количествах. В принципе можно получать моноклональные антитела против любых макромолекул в клетке и затем использовать эти антитела для локализации или очистки определенных макромолекул, а в некоторых случаях и для анализа внутриклеточных свойств этих молекул. [c.228]

Примером практического применения метода гибридизации соматических клеток является создание гибридом — клеток, способных производить моноклональные антитела. Все антитела (иммуноглобулины) в принципе устроены одинаково, но в организме животного имеются миллионы их вариантов. Потенциально синтез антител обеспечивается таким же количеством различных линий В-лимфоцитов, находящихся в крови и селезенке. Каждый из лимфоцитов способен производить строго определенное антитело. Однако в ответ на инъекцию белка-антигена в животном активируются различные В-лимфоциты и вырабатываются разные антитела. Это происходит вследствие того, что на одной молекуле антигена может быть несколько антигенных детерминант или одна детерминанта вызывает синтез нескольких антител, специфичных к ней в разной степени. Таким образом, обычные сыворотки содержат смесь антител, разделить которые практически невозможно. [c.147]

Еще одним доказательством комплементарной природы РНК, полученной на данной ДНК-затравке, служит образование специфического комплекса при нагревании с последующим охлаждением смеси ДНК-затравки и РНК-продукта. При эквимолекулярных соотношениях два полинуклеотида образуют гибридные комплексы, причем ренатурация ДНК исключается благодаря большей стабильности гибрида. Образование гибрида специфично для ДНК-затравки и не происходит с другими дезоксинуклеиновыми кислотами, даже если они обладают сходным нуклеотидным составом. Следовательно, средний нуклеотидный состав, анализ ближайшего соседа и полная комплементарность последовательности — все говорит о доминирующей роли последовательности нуклеотидов в затравочной ДНК в определении природы ферментативно синтезированной РНК- При использовании определенной бактериальной системы Mi ro o us lysodeikti us) не было обнаружено, чтобы матрица и продукт образовывали промежуточные соединения, гибриды (в отличие от ДНК-полимеразы). Далее, после ферментативного синтеза РНК не происходит изменений в плотности матрицы и денатурации (разделении нитей) ДНК- Следовательно, либо двухспиральная ДНК действует как матрица, не раскручиваясь, либо механизм заключается в том, что функционируют небольшие одноцепочечные олигонуклеотидные участки, непосредственно прилега- [c.319]

В связи с различным происхождением, а также разнообразием родительских форм каждому сорту или гибриду растений свойственны определенные физиологические процессы не только в целом, но и по этапам их роста и развития. Ватедствие этого каждой группе растений присуща своя биологическая и функциональная специфичность цитоплазматических белков и ферментов, определяющая особенности обмена веществ. А так как фитотоксичность многих гербицидов проявляется в нарушении фотосинтетической деятельности и метаболизма, то одной из главных причин различной чувствительности сортов и гибридов растений к гербицидам является именно эта специфичность анатомических особенностей и физиологических свойств. [c.121]

Эксперименты проводили с инбредными линиями мышей и с различными антигенами. А — мыши генотипа А развивают низкий (Ь) иммунный ответ на определенный антиген узкой специфичности. Б — мыши генотипа В характеризуются высокой (Н) иммунной реактивностью к тому же антигену. В — гибриды (АхВ)р1 — хорошие продуценты антител из этого следует, что сила иммунного ответа наследуется по доминантному типу. Г — гибриды возвратного С1фещивания (АхВ)р1хА, в котором мыши генотипа А — слабые продуценты антител, дают распределение в потомстве 50% — слабых продуцентов антител и 50 % — сильных. Четкое распределение по двум равным оппозитным группам указывает на то, что генетический контроль иммунного ответа на антигены узкой специфичности осуществляется одним геном. Характер наследования не зависит от пола животных. Таким образом, генетический контроль иммунного ответа осуществляется одним аутосомным доминантным геном, получившим название 1г-гена [c.284]

Высокая специфичность моноклональных антител позволяет создать иммуноферментные диагностику мы для определения антигенов, которые имеются в ограниченных количествах или же недоступны в очищенном состоянии. В таких случаях для иммунизации животных и получения гибридом может быть использован препарат, содержащий около 1 % антигена. Высокоочищенный антиген необходим на стадии тестирования гибридом однако при наличии высокочувствительного метода определения нужные количества антигена исчисляются несколькими микрограммами. После получения гибридомы антиген может быть выделен методом аффинной хроматографии на моноклональных антителах. Полученный в вы-сокоочищенном состоянии в значительных количествах антиген в дальнейшем может быть использован в составе иммуноферментных диагностикумов. [c.170]

Если клетки после слияния рассевают в лунки панели для микротитрования, то гибридомы, продуцирующие антитела нужной специфичности, затем пересаживают в 24 луночные панели для культуры тканей с объемом лунок 2 мл. Далее при образовании монослоя и окращивания среды в желтый цвет, супернатант можно повторно тестировать, используя определенный набор антигенов. Если результаты тестирования удовлетворительные, то гибридому наращивают в нескольких лунках, затем в универсальных контейнерах и далее во флаконах постепенно возрастающего объема. К этому времени обычно уже происходит самопроизвольное клонирование клеток. Тот клон, который отличается наилучщим ростом (предполагаемый источник антител), постепенно получает преимущество над всеми другими в культуре. [c.138]

Определение видовой специфичности необходимо для выявления в культуре примесных клеток, а также для анализа процессов, происходящих при культивировании клеток и при создании клеточных гибридов. Эта задача может быть решена с помощью изофермент-ного анализа [1]. По принятому сейчас определению, изоферментами являются ферменты с одинаковой субстратной специфичностью, которые представляют собой результат экспрессии одного или нескольких структурных генов, имеющихся в геноме вида. Изоферменты могут отличаться друг от друга по своим физико-химическим параметрам, например по заряду, что позволяет разделять их с помощью электрофореза (ЭФ) в крахмальном, агарозном или полиакриламидном (ПААГ) гелях [2] (подробно об ЭФ см. [3, 4]). В данном сообщении основное внимание уделено методам ЭФ и последующего анализа спектра изоферментов применительно к проблемам типиро-вания клеточных культур. Процедура состоит из следующих этапов [c.98]

В процессе фундаментальных исследований механизмов синтеза иммуноглобулинов, проводимых с применением клеточных культур и гибридологического анализа, выявились закономерности, практическое применение которых произвело революцию в иммунологии [1]. Был найден подход, позволяющий получать практически в неограниченных количествах моноклональные антитела (МонАТ) с известной специфичностью. Суть новой технологии состоит в получении гибридов между клетками миеломы и нормальными В-лимфоцитами от доноров, иммунизированных определенными антителами. В таких гибридах (гибридомах), которые при культивировании бессмертны , продуцируются гомогенные антитела против индивидуальных эпитопов антигена. [c.194]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология