Клеточные гибриды, метод HAT

В книге английского ученого описаны разные типы культур клеток млекопитающих, оборудование, реактивы и аппаратура для выращивания клеток, получение и диспергирование клеток подробно изложены методы получения клеточных культур из различных тканей, способы культивирования, методы синхронизации клеток. Рассмотрены клеточные гибриды и мутанты, взаимоотношения между вирусами и клеточными культурами и. другие вопросы. [c.343]

Отбор клеточных гибридов с помощью метода HAT [c.298]

Методы селекции клеточных гибридов [c.190]

С целью преодоления преград для генетического обмена, существующих в обычных системах скрещивания, был разработан метод слияния протопластов (клеток с удаленными клеточными оболочками). Этот метод пригоден для получения межвидовых и даже межродовых гибридов. Его можно использовать при гибридизации клеток одного вида, которые принадлежат к несовместимым труппам спаривания или же когда природная система скрещивания малоэффективна в плане образования генетических рекомбинантов. [c.308]

Другой метод, с успехом применяемый к картофелю, состоит в слиянии двух соматических (неполовых) клеток от разных сортов. Для этого у клеток сначала удаляют клеточные стенки, чтобы получить голые протопласты. Образующиеся в результате слияния протопластов соматические гибриды можно выращивать в культуре ткани. Это могут быть гибриды между двумя сортами, которые не удалось бы скрестить половым путем ввиду их несовместимости. Таким образом из дикорастущего картофеля были получены промышленные сорта, устойчивые к вирусу скручивания листьев и к холоду. [c.54]

Вторая группа методов ведет к самостоятельному, независимому от традиционных методов селекции, получению новых форм и сортов растений клеточная селекция с использованием каллусной ткани, соматическая гибридизация (слияние изолированных протопластов и получение неполовых гибридов), применение методов генной инженерии. [c.133]

В клетке можно пометить любые молекулы для этого е них вводят один или несколько радиоактивных атомов. Нестабильные радиоактивные атомы распадаются, испуская излучение, что позволяет прослеживать судьбу исследуемых молекул. Применение радиоизотопов в клеточной биологии ограничено двумя видами экспериментов анализ метаболических путей по методу вытеснения метки и локализацией меченых молекул в клетке с помощью радиоавтографии. Антитела представляют собой очень удобный и чувствительный инструмент для локализации специфических биологических макромолекул В организме позвоночных животных продуцируются миллионы различных антител, в каждом из которых имеются участки связывания, опознающие специфические группы молекул. Метод гибридом позволяет получать моноклональные антитела с одинаковой специфичностью практически в неограниченных количествах. В принципе можно получать моноклональные антитела против любых макромолекул в клетке и затем использовать эти антитела для локализации или очистки определенных макромолекул, а в некоторых случаях и для анализа внутриклеточных свойств этих молекул. [c.228]

Применяя специальные методы, удается получать гибриды, которые первоначально содержат два полных набора хромосом и человека и грызуна. Однако в ряду клеточных делений хромосомы человека постепенно утрачиваются. Благодаря этому, контролируя этап за этапом, удается проследить, какие человечьи гены сохраняются, какие исчезают. Открывается замечательная возможность точно установить расположение тех или иных генов в определенных хромосомах, подобно тому как это уже давно удалось сделать для дрозофилы или для фагов. У них возможность исследования была обеспечена быстрой сменой поколений. У человека же преж- [c.169]

Без методов иммуноферментного анализа невозможно представить себе развитие клеточной инженерии. В частности, получение гибридом целиком базируется на использовании иммуноферментного анализа при клонировании клеток. При генноинженерных работах эти методы позволяют быстро отбирать клоны-продуценты. Методы иммуноферментного анализа эффективны при решении фундаментальных проблем онкологии, вирусологии, биохимии и физиологии. [c.122]

Обсуждены разные приемы клеточно-инженерной технологии на растительных, животных н бактериальных клетках. Рассмотрены проблемы модификации протопластов и соматической гибридизации клеток растений, способы получе ния гибридов и методы идентификации и выделения ассоциаций клеток высших растений с микроорганизмами. [c.4]

Определение видовой специфичности необходимо для выявления в культуре примесных клеток, а также для анализа процессов, происходящих при культивировании клеток и при создании клеточных гибридов. Эта задача может быть решена с помощью изофермент-ного анализа [1]. По принятому сейчас определению, изоферментами являются ферменты с одинаковой субстратной специфичностью, которые представляют собой результат экспрессии одного или нескольких структурных генов, имеющихся в геноме вида. Изоферменты могут отличаться друг от друга по своим физико-химическим параметрам, например по заряду, что позволяет разделять их с помощью электрофореза (ЭФ) в крахмальном, агарозном или полиакриламидном (ПААГ) гелях [2] (подробно об ЭФ см. [3, 4]). В данном сообщении основное внимание уделено методам ЭФ и последующего анализа спектра изоферментов применительно к проблемам типиро-вания клеточных культур. Процедура состоит из следующих этапов [c.98]

Селекция методом токсин—антитоксин [13]. Метод основан на предварительном введении в клетки А антител против рицина, а в клетки Б — антител против дифтерийного токсина. После слияния клетки инкубируют в среде с рицином и дифтерийным токсином, в результате чего выживают только клеточные гибриды, защищенные антителами обоих видов. Метод разработан на диплоидных фибро-бластах человека. [c.190]

Райт В. Отбор гетерокарионов и клеточных гибридов с помощью метаболических ингибиторов — йодацетамида и диэтилпирокарбоната//Методы генетики соматических клеток, М,, 1985, Т, 1. С, 62—85, [c.193]

Ni otiana) обрабатывали для удаления клеточной стенки ферментами, разрушающими целлюлозу и пектин. Затем вызывали слияние образующихся протопластов с протопластами других видов табака, получая в результате гибриды, образованные неполовым путем . Хотя на пути к практическому применению этого метода придется преодолеть многие препятствия, тем не менее с его помощью, по-видимому, можно будет получить большое число новых растений. [c.269]

Тем не менее, следует особо выделить методы клеточной и генной инженерии, когда в экспериментальных условиях удается создавать клетки с заведомо известными свойствами Так осуществлены соматическая гибридизация клеток картофеля и томата (гибрид назван "помато"), перенос генетической информации о синтезе человеческого или животного гормона инсулина в бактериальные клетки (кишечной палочки), способных затем продуцировать полипептидные цепи инсулина [c.41]

Для выделения РНК из гибридов можно применять хорошо изученный метод агаровых колонок (ра,зд. II, Б, 1). Болтон и Мак-Карти [3] использовали этот метод для выделения комплементарных РНК (иРНК) нутем гибридизации суммарной клеточной РНК с гомологичной ДНК. Если большая часть ДНК насыщена РНК, то основным видом РНК в гибриде является иРНК. И в этом случае соотношение между различными видами РНК, гибридизующимися с ДНК, зависит от того, какую часть [c.167]

Культура изолированных зародышей как вспомогательный метод при отдаленной гибридизации применяется не только для преодоления постгамной несовместимости, но также с целью микроразмножения ценных гибридов. В этом случае микроразмножение идет путем каллусогенеза, индукции морфогенеза и получения растений-регенерантов из каллусной ткани. Техника клонирования незрелых зародышей позволяет размножать ценные генотипы растений на ранних стадиях жизненного цикла. Еще одна возможность применения культуры зародышей — использование ее в клеточной селекции. [c.134]

Гибридизация соматических клеток. Следующий метод клеточной селекции — создание неполовых гибридов путем слияния изолированных протопластов, полученных из соматических клеток. Этот метод позволяет скрещивать филогенетически отдаленные виды растений, которые невозможно скрестить обычным половым путем, вызывать слияние трех и более родительских клеток, получать асимметричные гибриды, несущие весь генный набор одного из родителей наряду с несколькими хромосомами или генами, или только органеллами и цитоплазмой другого. Гибридизация соматических клеток дает возможность не только соеди-нить в одном ядре гены далеких видов растений, но и сочетать в гибридной клетке цитоплазматические гены партнеров. [c.154]

При соматической гибридизации эксперимент строится аналогично опытам по генетике микроорганизмов. Иными словами, используются большие популяции клеток обоих родителей. При обработке смешанной суспензии протопластов фьюзогенами часть из них сливается друг с другом, но в суспензии остаются и неслившиеся протопласты. Все они, включая гибридные, в дальнейшем регенерируют клеточные стенки и переходят к делениям. Возникает задача — выделить из общей массы гибридные экземпляры. Селекция гибридов может применяться либо на клеточном уровне, либо на стадии регенерации и осуществляется несколькими методами. [c.157]

Другим методом, позволяющим производить отбор гибридов, является генетическая комплементация. Этот метод был применен для обнаружения гибридов табака, при этом использовались хлорофиллдефектные мутации у родителей с последующей комплементацией в гибридных продуктах. Сочетание двух ядерных рецессивных мутаций у табака вызывает светозависимую хлорофильную недостаточность. Растения, гомозиггот-ные по любому из этих генов, выращиваемые при интенсивном освещении, обесцвечиваются и гибнут. После слияния и регенерации клеточные колонии пересаживают на среду, индуцирующую стеблевой органогенез, и культивируют на свету. [c.158]

Осуществить слияние клеток и получить внутри- или межвидовые гибриды клеток млекопитающих методически проще, чем в случае микроорганизмов или растений, так как клетки млекопитающих не имеют клеточной стенки, которую необходимо удалять перед слиянием. Первый метод контролируемого слияния клеток млекопитающих был основан на использовании инактивированного вируса Сендай. Этот вирус относится к группе парамиксовирусов его вирион покрыт липидсодержащей оболочкой, сливающейся с мембраной клетки-хозяина и обеспечивающей проникновение вируса в клетку. Вирус способствует слиянию, связываясь одновременно с мембранами двух клеток. В опытах по слиянию клеток млекопитающих используются также некоторые химические вещества (ионы кальция, лизоле-цитин, ПЭГ). [c.312]

Традиционные методы генетического анализа, разработанные Менделем, основаны на переходе из диплоидного состояния в гаплоидное в процессе мейоза. Восстановление диплоидности происходит при оплодотворении. Изменения плоидности обеспечивают сегрегацию генов, то есть их распределение в потомстве. Несколько десятилетий назад было показано, что соматические клетки эукариот можно размножать in vitro, т.е. поддерживать в виде так называемых клеточных культур (рис. 18.1). У этих культивируемых in vitro клеток в норме не происходит смены диплоидной и гаплоидной фаз. Тем не менее существуют различные способы, позволяющие изучать определенные генетические феномены на культурах клеток. Существенным преимуществом клеточных культур является то, что возникновение новой клеточной генерации занимает несколько часов, тогда как появление нового поколения на уровне целой особи-это месяцы или годы. Дополнительное преимущество для изучения генетики человека-это возможность комбинировать наследственные детерминанты клеток в культуре, поскольку проведение направленных скрещиваний между людьми, естественно, невозможно. Недавно были разработаны способы получения гибридных клеток, содержащих наследственную информацию различных видов организма, например человека и мыши. Такие гибриды нельзя получить другими способами, т.е. на уровне целых организмов. [c.290]

Методы картирования генов, обсуждавшиеся в предыдущих разделах, были основаны на экспрессии изучаемых генов в культурах клеток. Гены, кодирующие ферменты клеточного метаболизма, (табл. 18.2) и гены, кодирующие поверхностные антигены, такие, как белки главного комплекса гистосовместимости или антигены группы крови, удовлетворяют этому условию. Гены, не обладающие подобным фенотипическим проявлением, не могут быть картированы лищь с использованием описанных методов. Это ограничение удается преодолеть с помощью методов генной инженерии. При этом становится возможным картирование любых последовательностей ДНК, для которых можно получить соответствующий ДНК-зонд. Эти методы внесли поистине революционный переворот в генетический анализ гибридов соматических клеток. [c.308]

Метод MMGT технически труден, капризен , отнимает у исследователя много времени. В наших экспериментах мини-клеточные межвидовые гибриды получались только с частотой 10-7—10-6, [c.17]

Обычная техника гибридизации in vitro обеспечивает получение усредненных показателей для ткани-мишени в целом. Это затрудняет интерпретацию результатов, полученных на смешанной популяции клеток разных типов, или на популяции клеток одного типа, неоднородных, например, по стадии дифференцировки, или по положению в клеточном цикле при асинхронной пролиферации, или по другим показателям. Техника гибридизации in situ позволяет в известном смысле преодолеть эти проблемы, поскольку полученные результаты относятся к индивидуальной клетке и даже к индивидуальной хромосоме. Комбинация гибридизации с цитологическим исследованием позволяет получить дополнительную информацию о локализации молекулярного гибрида в той или иной структуре ткани-мишени. И наконец, этот метод пригоден для анализа небольшого числа клеток. [c.304]

Смотреть страницы где упоминается термин Клеточные гибриды, метод HAT: [c.4] [c.189] [c.8] [c.159] [c.185] [c.398] [c.460] [c.465] [c.398] [c.312] [c.174] [c.177] [c.506] [c.90] [c.12] [c.47] [c.92] [c.100] [c.23] [c.180] [c.286]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология