Субчастицы рибосомные, определение

Сейчас проводится много экспериментов с использованием реагентов, образующих поперечные связи между белковыми молекулами. В частности, используются бифункциональные соединения, способные ковалентно связываться с двумя различными —SH- или —ЫНг-груп-пами [93—95]. Использование этого подхода дало возможность идентифицировать следующие связанные поперечными связями пары [93, 95] S2-S3, S4-S6, S4-S8, S4-S9, S4-S12, S5-S8, S5-S9, S7-S8, S7-S9, S11-S18, S13-S19 и S18-S21. Другой подход состоит в том, чтобы получать специфические антитела к отдельным рибосомным белкам и изучать при помощи электронного микроскопа места их связывания на поверхности рибосомных субчастиц [96, 97]. Этим методом была установлена локализация многих белков на поверхности как 30S-, так и 505-субчастиц (рис. 15-13). В ряде случаев антитела к определенному белку связывались сразу в нескольких участках. Тот факт, что связывающие места для антител к белкам S2, S12, S15 и S18 отстоят друг от друга на 8—19 нм, свидетельствует о том, что эти белки в 305-субчастице находятся в вытянутой, фибриллярной [c.230]

Две рибосомные субчастицы объединены в полную рибосому строго определенным образом. Контактирующей стороной 50S субчастицы является ее уплощенная сторона если смотреть на нее, то, когда головка субчастицы вверху, стержень будет справа (рис. 37 и 38). Субчастицы ассоциированы головка к головке , а боковой выступ к боковому выступу. Ассоциация головка к головке хорошо видна на электронно-микро- [c.66]

Характерной чертой процесса разворачивания рибосомных субчастиц является то, что он носит кооперативный характер и проходит через определенные дискретные стадии. Проще всего следить за процессом разворачивания по уменьшению седиментационных коэффициентов частиц (уменьшение седиментационных коэффициентов сопровождается увеличением характеристической вязкости, уменьшением коэффициента диффузии и увеличением радиуса инерции). Когда связанный Mg2+ в значительной мере вытеснен из частиц, то постепенное уменьшение ионной силы среды приводит к следующей динамике изменений. Сначала исходные 50S и 30S компоненты превращаются непосредственно в 35S и 26S компоненты, соответственно этот переход является скачкообразным, типа все или ничего , и в промежуточных условиях обе формы, исходная и развернутая, могут сосуществовать на седиментацион-ной диаграмме (рис. 75). Затем при дальнейшем понижении ионной силы 35S и 26S компоненты так же скачкообразно переходят в 22S и 15S компоненты, соответственно. Последние ведут себя уже как типичные полиэлектролиты, полностью напоминая некомпактные формы 23S и 16S РНК удаление солей из раствора приводит к их дальнейшему, теперь уже плавному, разворачиванию, сопровождаемому разрушением вто- [c.123]

Если инкубацию бактериальных клеток, содержащих такие мутации, проводят при пониженной температуре, образование функционально-активных субчастиц прекращается. Некоторые мутации вызывают изменения в определенных рибосомных белках другие могут локализоваться в генах, продукты которых каким-то образом влияют на процесс самосборки. [c.109]

Изучение топографии компонентов рибосом. Эта задача служит важной составной частью изучения проблемы биосинтеза белка. Один из перспективных подходов для ее решения — имму но электронная микроскопия. Например, с ПОМОЩЬЮ антител против определенного рибосом ного белка можно специфически сшить соответствующие рибосомные субчастицы. Выделив затем димеры сшитых бивалентными IgG-антителами субчастиц, их изучают с помощью электронной микроскопии и определяют локализацию соответствующего белка. [c.264]

Р. из самых разнообразных, организмов (как прокариотич., так и эукариотич.) имеют сходное строение. Они состоят из двух разделяемых субчастиц, или рибосомных субъединиц. При определенных условиях (напр., при понижении концентрации Mg + в среде) Р. обратимо диссоциирует на две субчастицы с соотношением их мол. масс ок. 2 1. Прокариотическая 70S Р. диссоциирует на субъедишщы с коэф. седиментации 50S (мол. м. 1,5-10 ) и 30S (мол. м. 0,85-10 ). Эукариотическая Р. разделяется на субчастицы 60S и 40S. Две рибосомные субчастицы объединены в полную Р. строго определенным образом, предполагающим специфич. контакты их поверхностей. [c.264]

Рибосомные белки характеризуются в основном глобулярной компактной конформацией, с развитой вторичной и третичной структурой. Одно время широко распространилось убеждение, что рибосомные белки являются особенными, не похожими на обычные глобулярные белки сообщалось об их сильно вытянутой или сильно рыхлой конформации, иногда разветвленной по всей рибосомной субчастице. Однако скоро стало понятно, что рыхлые конформации изолированных рибосомных белков представляют собой артефакт, являющийся следствием низкой стабильности их нативной конформации вне рибосомы. Конформация рибосомных белков стабилизируется при взаимодействии с РНК и друг с другом. Тем не менее, при соблюдении определенных условий большинство рибосомных белков можно выделить в индивидуальном виде в компактной конформации, по-видимому, близкой к нативной. Оказалось возможным также продемонстрировать компактность ряда рибосомных белков in situ, в составе рибосомной частицы. [c.95]

Для идентификации белковых компонентов 50S субчастицы, формирующих факторсвязьшающий участок, были использованы, в частности, антитела против различных рибосомных белков. Оказалось, что только антитела против белка L7 / L12 ингибировали связьшание EF-G, в то время как антитела против большого разнообразия других белков не влияли на эту функцию. Первоначально из этих опытов был сделан вьшод, что местом присоединения EF-G является белок L7 / L12. Действительно, избирательное удаление белка L7 / L12 то 50S субчастицы (с помощью диссоциации 0,5 М NH4 I с этанолом) приводило к значительному падению связьшания EF-G с рибосомой. Однако сродство не исчезало совсем, а лишь уменьшалось. Было показано, что даже при полном отсутствии белков L7 / L12 на рибосоме EF-G способен, хотя и гораздо менее эффективно, не только связываться, но и осуществлять свои функции в гидролизе ГТФ и в транслокации. Следовательно, белок L7 / L12 лишь помогает связьшанию EF-G, а основным связьшающим компонентом, ввиду отсутствия других причастных белков, должна быть рибосомная РНК. В прямых экспериментах это было подтверждено было найдено специфическое сродство определенного района 23S РНК к EF-G. [c.145]

Используя для образования ковалентных сшивок соединения с различной длиной молекулы, можно определить близость расположения двух данных белков. Суть метода состоит в следующем нативные субчастицы обрабатывают реагентами, образующими ковалентные сшивки, с последующим анализом белков, вошедших в состав конгломератов. (Однако возможности этого метода ограничены анализом белков.) Ковалентные сшивки белков с рРНК позволяют определить места их связывания с нуклеиновой кислотой. Другие методы, с помощью которых были получены сравнимые результаты о местоположении белков,-это использование нейтронного рассеивания субчастиц, в которых определенные белки дейтерированы, и измерение энергии переноса между флуоресцентно меченными парами рибосомных белков. [c.107]

Рибосомные РНК по массе составляют большую часть бактериальных 308- и 508-субчастиц. Они присутствуют повсеместно, и, вероятно, большинство или даже все рибосомные белки связаны с рРНК. Поэтому укладка рРНК определяет структуру каждой субчастицы. Сложность в определении конформации молекул рРНК и способа связывания ими рибосомных белков состоит в том, [c.107]

При наличии sa i-мутаций в клетке накапливаются частицы, которые по размеру меньше, чем функционально активные рибосомные субчастицы, и являются их предшественниками. Такие промежуточные частицы содержат рРНК, соединенную с некоторыми, но не со всеми белками, входящими в состав субчастиц. В каждом случае отсутствие конкретного белка блокирует самосборку на определенной стадии. Для каждой субчастицы охарактеризованы основные промежуточные продукты, образующиеся in vivo. [c.109]

Конформация рибосомных субчастиц очень лабильна. Их свойства существенно изменяются при связывании с некоторыми небольишми белками, тРНК или антибиотиками. Мутации, затрагивающие белки одной субчастицы, иногда сказываются на функционировании другой субчастицы. В системах меньщего размера эффекты такого рода обычно не наблюдаются. Если эти эффекты имеют биологический смысл, это может объяснить, почему природа для определенных целей создала такие сложные структуры. [c.212]

Описанная выше схема исследования по ряду причин недостаточно эффективна. Во-первых, таким способом нельзя решить важный вопрос о расположении в субчастице РНК, прежде всего ее концевых участков, так как получить к ним антитела при иммунизации собственна РНК невозможно. Во-вторых, достаточно трудно получить в иммунохимически чистом виде различные белки, входящие в состав рибосомы, что позволило бы иметь антитела к строго определенному белку. Обе эти трудности можно обойти в случае модификации рибосомной РНК и белков гаптенами и последующей димеризации рибосомных частиц антителами против этих гаптенов. В качестве примера подобного исследования можно привести работу, выполненную И. Шатским, М. Кожухаро-вой, Л. Мочаловой и А. Богдановым (1978—1982). [c.264]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология