Идентификация вирусных частиц

Идентификация вирусных частиц [c.47]

Основным фактором, осложняющим изучение инфекций в их латентном состоянии, является ничтожно малый размер вирусных частиц или части провирусов и небольшие морфологические отличия этих низших таксономических единиц, в связи с чем идентификация одного и того же вируса в двух разных хозяевах или двух разных вирусов в одном хозяине представляет почти непреодолимую трудность. Учитывая большую частоту заражения хозяев латентными вирусами, очень трудно установить, идентичен ли выделенный после заражения вирус тому вирусу, которым заражался [c.74]

Идентификация вирусных частиц. Процесс препаративно го выделения вируса должен осуществляться при постоянном биологическом контролена всех этапах концентрирования и очистки Важнейшим качеством полученного препарата является инфекционность так как это свойство [c.148]

Рис. 21.10. Образование HSV-вектора с помощью рекомбинации. Проводят котрансфекцию кдетки-хозяи-на плазмидой, которая содержит терапевтический ген, фланкированный последовательностями ДНК из вспомогательных областей HSV-генома, и ДНК HSV дикого типа. HSV-геном реплицируется в клеточно1М ядре по типу катящегося кольца , при этом между фрагментами ДНК HSV, входящими в состав плазмиды, и ДНК HSV дикого типа может произойти рекомбинация (штриховая линия). Молекулы ДНК HSV дикого типа и рекомбинантного HSV упаковываются в вирусные частицы, высвобождающиеся из клетки после лизиса. Вирусы размножают и проводят скрининг бляшек для идентификации рекомбинантных HSV. Полученные HSV-векторы хранят в условиях, исключающих их загрязнение HSV дикого типа.

Иммунная электронная микроскопия. ИЭМ позволяет обнаружить специфически связанные с антителами вирусные частицы. Преимуществом этого метода является одновременная концентрация вируса и его идентификация с помощью специфической сыворотки. Предложенные модификации ИЭМ предусматривают обработку вирусосодержащего материала антисывороткой в высоком титре, добавление к осадку фосфорно-вольфрамовой кислоты или уранилацетата с последующим нанесением на пленку (подложку) и высушиванием. При электронной микроскопии видны скопления вирусных частиц. [c.276]

Выделение (изоляция) вирусных частиц. Диагностика вирусных болезней основана на идентификации вирусных включений и частиц. Для этого необходимо прежде всего уметь обнаружить, и охарактеризовать по морфологическим признакам исследуемый материал в тканях хозяина. Изменения, происходящие в тканях насекомых под воздействием вирусов, описаны в разделах, посвященных различным типам возбудителей. Наиболее распространенные болезни, какими являются ядерные и цитоплазменные полиэдрозы или гранулезы можно диагностировать под микроскопом по массе полиэдров и включений, которых находят в пораженных тканях, в жировом теле, в гиподерме, трахейной выстилке, а также в кишечнике хозяина. Полиэдры и гранулы плохо окрашиваются анилиновыми красками, особенно в жировом теле, поэтому материал перед окрашиванием необходимо обрабатывать слабой кислотой или щелочью. Полиэдры и включения нерастворимы в воде, даже в горячей, в естественных препаратах лежат на дне, тогда как жировые капельки плавают на поверхности. В отличие от белковых частиц, имеющих подобные же свойства и расположенных в жировом теле гусениц бабочек перед окукливанием, вирусные частицы окрашиваются после обработки материала 1%-ным NaOH или 2%-ным НагСОз и видны внутри включений в виде мелких темных точек. При определении вирусов очень важно точное определение гистологическими методами мест включений. [c.78]

Вирусы намного меньше бактерий и в отсутствие адсорбции должны проходить через поры мембран, используемых обычно при фильтрации более крупных частиц. Мембраны, которые способны механически (стерически) задерживать вирусы, имеют размеры пор того же порядка, что и ультрафильтры. Однако при необходимости фильтрации больших объемов воды ультрафильтры забиваются слишком быстро, так что ими нельзя долго пользоваться. Для удаления вирусов из больших объемов, как, например, в случае проведения контроля по загрязнению воды, широко используются мембраны с порами бактериальных размеров. Несмотря на то что у этих мембран поры больше, чем размеры вирусных частиц, с их помощью можно выделять вирусы, которые адсорбируются на матрице мембраны. Действительно, поскольку толщина мембр,анных фильтров составляет примерно 5000 вирусных диаметров, они действуют по отношению к вирусам отчасти и как глубинные фильтры, хотя их эффективность по сравнению с истинными глубинными фильтрами довольно низка. Соответствующим подбором условий фильтрации, главным образом pH воды, можно увеличить задерживающую способность мембраны и удалить по существу все вирусные частицы из водной пробы, используя мембраны с размером пор порядка 0,45 мкм. Вирусные частицы, адсорбированные на мембране, могут быть затем десорбированы для их идентификации или подсчета. Применительно к вирусам мембранную фильтрацию наиболее часто используют при проведении анализа питьевой воды поэтому цель настоящей главы состоит в том, чтобы показать, как мембранная технология используется в этой области. Материал этой главы хорошо освещен в обзоре Биттона [29]. [c.333]

В цитоплазме клеток растений, инфицированных вирусом мозаики цветной капусты или родственным вирусом мозаики Dahlia, с помощью светового микроскопа обнаружены внутриклеточные включения характерной округлой формы. Эти структуры легко можно наблюдать в полосках эпидермиса листа системно инфицированных растений после окрашивания пиронином. Присутствие подобных включений в клетках мон ет служить хорошим диагностичёским признаком при идентификации вирусов этой группы (Шеферд, личное Сообщение). Как следует из результатов электронно-микроскопических наблюдений, вокруг этих включений, содержащих рассеянные в аморфном матриксе вирусные частицы, мембраны отсутствуют. [c.220]

Лабораторная диагностика. Работа с вирусом натуральной оспы проводится в строго режимных условиях по правилам, предусмотренным для особо опасных инфекций. Материалом для исследования служит содержимое элементов сыпи на коже и слизистых оболочках, отделяемое носоглотки, кровь, в летальных случаях — кусочки пораженной кожи, легкого, селезенки, кровь. Экспресс-диагностика натуральной оспы заключается в обнаружении а) вирусных частиц под электронным микроскопом б) телец Гварниери в пораженных клетках в) вирусного антигена с помощью РИФ, РСК, РПГА, ИФА и других специфических реакций. Выделение вируса осуществляют в куриных эмбрионах или клеточных культурах. Идентификацию вируса, выделенного из куриного эмбриона, проводят с помощью PH (на куриных эмбрионах), РСК или РТГА. Вирус, выделенный на культуре клеток, обладает гемадсорбирующей активностью по отношению к эритроцитам кур, поэтому для его идентификации используют реакцию торможения гемадсорбции и РИФ. Серологическую диагностику осуществляют с помощью РТГА, РСК, PH в куриных эмбрионах и на культурах клеток. [c.257]

С1 рого специфично для впрусов. Однако ё ряде случаей биологическая инертность препарата еще не является доказательством отсутствия в нем вирусных инфекционных частиц, так как в эксперименте не всегда удается создать условия, необходимые для заражения клетки хозяина. В подобных случаях идентификацию вируса осуществляют при помощи электронной микроскопии. При очистке вирусов очень важно точно определить корреляцию между ин-фекционностью и содержанием физических частиц. [c.149]

А на литическое ультрацентрифугирование это важнейший метод идентификации и оценки гомогенности вирусной суснензии в отношении размера частиц, их формы и плотности [375, 710, 715, 761]. В основе метода определения скорости седиментации лежит наблюдение за скоростью перемещения частиц под действием большого центробежного ускорения. Теория процесса седиментации за последние годы разработана детально Hojgiij,, ные сведения о методе аналитического ультрацентрифуГи-рования можно найти в ряде обзоров и руководств [128, 710, 715, 779], [c.151]

В гл. УП1 описаиы многокомпонентные вирусные системы. Известно, что у некоторых вирусов генетический материал состоит из нескольких дискретных фрагментов нуклеиновой кислоты. Число и размеры этих фрагментов служат ценным критерием при идентификации определенных групп вирусов (панример, вирусы группы погремковости табака). Не исключено, что, так же как и среди вирусов животных, среди вирусов растений будут обнаружены такие, у которых в одной частице содержится песколысо фрагментов активной пуклеииовой кислоты. [c.481]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология