Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

ДНК-диагностика

Таблица 8.2. Сравнительные характеристики прямых и непрямых методов ДНК-диагностики Таблица 8.2. <a href="/info/33982">Сравнительные характеристики</a> прямых и <a href="/info/141769">непрямых методов</a> ДНК-диагностики

    В настоящее время некоторые наследственные заболевания устанавливаются с помощью ДНК-диагностики. [c.227]

    В табл. 8.1 представлены характеристики разных скрининговых методов ДНК-диагностики. Врач лаборант-генетик заранее определяет стратегию поиска исходя из оснащенности лаборатории. [c.268]

    Молекулярная диагностика — это быстро развивающееся направление. Хотя его основные принципы уже сформировались, технические детали отдельных тестов могут различаться. Для получения в достаточном количестве ДНК-мишени сейчас успешно применяют ПЦР. Использование ПЦР и специфических зондов существенно повышает чувствительность тестов и позволяет применять нерадиоактивные хромогенные, хемилюминесцентные и флуоресцентные системы регистрации. Во многих случаях для выявления мутации или экзогенной ДНК инфекционного агента в исследуемом образце достаточно провести ПЦР с последующим электрофоретическим разделением продуктов. Не вызывает сомнения, что с помощью ДНК-диагностики можно будет выявлять большинство, а возможно и все наиболее распространенные ге- [c.201]

Таблица 8.1. Сравнительный анализ эффективности основных скрининговых методов ДНК-диагностики Таблица 8.1. <a href="/info/606472">Сравнительный анализ</a> <a href="/info/575451">эффективности основных</a> скрининговых методов ДНК-диагностики
    Прямые и косвенные методы ДНК-диагностики [c.264]

    Гемоглобинопатии [2345]. До недавнего времени для выявления различных талассемий анализировали клетки крови плода, полученные с помощью эндоскопии. В настоящее время этот метод замещается ДНК-диагностикой с использованием клеток плода, получаемых при биопсии ворсинок эпителия хориона. д м серповидноклеточной анемии возможно прямое выявление мутации (см. разд. 4.3), тогда как для диагностики талассемий выявляют сцепление с различными ДНК-маркерами. [c.159]

    Одним из самых неприятных артефактов, с которым приходится сталкиваться при постановке ПЦР, это появление продукта ПЦР в обязательном отрицательном контрольном образце, т.е. в отсутствие матрицы. Такие артефакты относятся к категории ложноположительных результатов. Причиной, чаще всего, является загрязнение компонентов реакции или лабораторного пластика продуктами ПЦР, что может легко произойти в процессе постановки массовых ПЦР, например, в ДНК-диагностике при недостаточно чистой работе. При появлении этого грозного признака неаккуратной работы приходится менять загрязненный [c.203]

    Аналогичные проблемы возникают при генетическом тестировании пациентов, которое может проводиться как по запросу пациента, так и в обязательном порядке, например для определенных профессиональных групп. В последние годы возможности тестирования наследственных заболеваний быстро возрастают благодаря внедрению в практику методов ДНК-диагностики. Раньше выявление того или иного гена строилось на обнаружении определенных метаболитов, которые им контролируются. ДНК-диагностика позволяет проводить прямое обнаружение генов в любых ядросодержащих клетках. [c.246]


    Принципиально различают прямую и косвенную ДНК-диагностику моногенных наследственных болезней. Прямые методы возможны лишь при условии, что ген заболевания клонирован, известна его экзон-интронная организация или нуклеотидная последовательность полноразмерной комплементарной ДНК. При прямой диагностике предметом анализа являются мутации гена. Главным преимуществом прямых методов диагностики является почти 100% эффективность. [c.264]

    Однако в большинстве случаев наследственных заболеваний ген не клонирован или заболевание является генетически гетерогенным, т.е. обусловлено повреждениями в разных генах, либо молекулярная организация гена не позволяет использовать прямые методы. Эти трудности могут быть преодолены с помощью косвенных методов ДНК-диагностики, основанных на использовании сцепленных с геном полиморфных маркёров. В этом случае определяется гаплотип хромосомы, несущей мутантный ген в семьях высокого риска, т.е. у родителей больного и его ближайших родственников. Такой подход возможен практически для всех моногенных заболеваний с известной локализацией гена. [c.264]

    Системы рестрикции-модификации типа II устроены наиболее просто [74, 75]. В таких системах модифицирующая ДНК-ме-тилтрансфераза функционирует в виде свободного мономера, а эндонуклеаза рестрикции - в виде димера, причем эти два фермента не зависят друг от друга. Рестриктазы типа II узнают специфические последовательности нуклеотидов в точке расщепления ДНК или непосредственной близости от нее, они активны в присутствии ионов Mg2+ без каких-либо дополнительных кофакторов и чаще всего используются при молекулярном клонировании, а также в ДНК-диагностике. [c.50]

    Высокая эффективность ПЦР позволяет накопить необходимое количество ДНК при очень малых исходных количествах — достаточно одной капли крови, одного волоса, даже одной клетки или одной молекулы ДНК. Метод ПЦР резко ускорил изучение генома человека, и нашел практическое применение для диагностики болезней (ДНК-диагностика), а также для идентификации личности. [c.150]

    В частности, ПЦР применяют для диагностики инфекционных болезней. Традиционная диагностика таких болезней основана на использовании микробиологических методов, которые часто требуют гораздо больше времени и менее надежны, чем ДНК-диагностика. Метод основан на том, что первичная структура ДНК разных видов организмов различна. Следовательно, можно подобрать такие затравки, которые будут гибридизоваться с ДНК возбудителя, но не с ДНК человека. Если, используя эти затравки, провести ПЦР с материалом (кровь, биопсийный материал), полученным от больного, то нарастание количества ДНК в пробе будет указывать на наличие возбудителя в организме пациента в ПЦР будет синтезироваться только ДНК возбудителя, а не пациента. [c.150]

    Рассмотренные здесь примеры непереносимости лекарственных или пищевых веществ представляют группу явлений того же рода, что и наследственная предрасположенность к болезням. Для диагностики наследственных болезней, обусловленных генными мутациями, часто используют ДНК-зонды, аналогично ДНК-диагностике серповидно-клеточной анемии, описанной в начале этой главы. [c.171]

    Весьма желательно, чтобы ДНК-диагностику можно было проводить на исходном материале, без дополнительного его культивирования или вьщеления нуклеиновых кислот, особенно в тех случаях, когда тестируются клинические образцы. Исследователи с успехом проводят гибриди- [c.188]

    ДНК-диагностика основывается на обнаружении известных нуклеотидных последовательностей для этого синтезируют специфичес1сие праймеры и амплифицируют последователь-ность-мишень. Это позволяет использовать нерадиоактивные системы детекции (например, хемилюминесцентный метод) или регистрировать ПЦР-продукты методом гель-электрофореза. Кроме того, ПЦР-продукты можно пометить флуоресцентным красителем, присоединив его к 5 -концу праймера. [c.202]

    Методы ДНК-диагностики применяют также для обнаружения точковых мутаций в данном гене. Один из подходов заключается в лигировании двух олигонуклеотидных праймеров. При несоответствии всего одного нуклеотида в месте стыковки гибридизовавшихся олигонуклеотидов лигирования не происходит. [c.202]

    Книга, предлагаемая вниманию читателей, основана на материале, который используется мной при чтении спецкурса по искусственным генетическим системам для студентов четвертого года обучения кафедр биоорганической химии МГУ и физикохимической биологии и биотехнологии Московского физико-технического института. Как и следует из названия, монография, в основном, посвящена изложению методических, а скорее даже методологических достижений современной молекулярной генетики. При этом я умышленно сузил понятие термина генная инженерия , сохранив за ним разделы по конструированию генов и систем их экспрессии как таковых в рамках центрального постулата молекулярной биологии (ДНК<->РНК- белок). Методические разделы таких направлений исследований, как клонирование млекопитающих, трансгенез, антисмысловые и биочиповые технологии, ДНК-диагностика, генотерапия и тому подобные наукоемкие приложения генно-инженерных подходов, которые в большей степени направлены на системное познание генетических явлений, предполагается объединить в дальнейшем под названием Нуклеиновые кислоты как объект и инструмент исследований во втором томе Искусственных генетических систем . [c.9]


    При практическом использовании ПЦР, по крайней мере, три характеристики этого метода наиболее важны для исследователя - это специфичность реакции, точность синтеза ДНК и его эффективность [263]. При абсолютной специфичности ПЦР продукт должен быть копией именно того локуса, который амп-лифицировали, а другие амплифицированные последовательности нуклеотидов в продукте ПЦР не должны присутствовать. При этом, как правило, не обращают внимания на то, имеются ли в продукте ПЦР ошибочно включенные нуклеотиды, которые некомплементарны амплифицируемому участку ДНК и появляющиеся благодаря сбоям в работе ДНК-полимеразы. Такой подход имеет место, например, при ДНК-диагностике инфекционных за- [c.194]

    Метод LA-P R в настоящее время находит применение в ДНК-диагностике для обнаружения крупных перестроек геномной ДНК, сопровождающихся экспансией тринуклеотидных повторов [281], выявления протяженных транслокаций, а также для амплификации целых генов, например, гена ретинобластомы [282] или вирусных геномов [283]. [c.213]

    Полимеразная цепная реакция (ПЦР). Для проведения некоторых исследований необходимо большое количество хорошо очишенной высокомолекулярной ДНК. Метод ПЦР дает возможность избирательно синтезировать in vitro небольшие участки ДНК и получить за 3-4 ч несколько миллионов копий исследуемого фрагмента. Объектами для выделения ДНК могут быть кровь, биоптат ткани, слюна, моча, околоплодные воды и т.д. Подробно этот метод и его применение в ДНК-диагностике будут рассмотрены в теме 3.10. [c.62]

    Конец XX в. ознаменован разработкой и началом осуществления грандиозной международной профаммы Теном человека . Ее задача — изучение генома человека, включая картирование хромосом и секвенирование их ДНК, определение полной нуклеотидной последовательности генома, состоящего из трех миллиардов пар нуклотидов. В рамках этой профаммы разрабатываются методы диагностики и лечения наследственных болезней. В настоящее время уже возможна ДНК- диагностика более 100 наследственных дефектов. В недалеком будущем станет реальностью генотера-пия наиболее распространенных болезней человека, патогенез которых уже известен. [c.8]

    Виды ДНК-диагностики подтверждающая, пресимптоматическая, носительства, пренатальная. [c.264]

    В ДНК-диагностике в настояшее время используются разнообразные прямые методы. Наиболее просто обнаруживаются мутации, изменяюшие -длину амплифицированных фрагментов ДНК, которые выявляются при электрофоретическом анализе. [c.265]

    На рис. 8.14 представлены результаты ДНК-диагностики в семье с мальчиком, страдающим муковисцидозом. Молекулярная структура этого гена хорошо известна. ПЦР-амплификация проведена по участку (сайту) расположения мутации ДР508 в гене муковисцидоза у детей и родителей. Как видно из электрофоретической картины, отец, мать и дочь (они здоровы) имеют две полосы (98 и 95 пар нуклеотидов), следовательно, они гетерозиготы. У больного мальчика — одна полоса (95 пар нуклеотидов), т.е. он гомозиготен по мутантному аллелю ДР508. [c.265]

Рис. 8.14. ДНК-диагностика муковисцидоза с помощью технологии ПЦР в сайте АР508. Рис. 8.14. ДНК-<a href="/info/1412336">диагностика муковисцидоза</a> с помощью технологии ПЦР в сайте АР508.
    Косвенная ДНК-диагностика по существу сводится к анализу полиморфных генетических маркёров у больных и здоровых членов семьи. Маркёры должны быть расположены в том хромосомном регионе, где и ген болезни, т.е. они сцеплены. Такими маркёрами могут быть участки ДНК, существующие в популяции в нескольких аллельных вариантах. Отличия могут быть по составу нуклеотидов, по числу динуклеотидных повторов. На основе вариабельности состава маркёрных участков ДНК можно дифференцировать материнское или отцовское происхождение конкретного варианта маркёра, сцепленного с геном болезни. Сцепление означает, что маркёр и ген болезни располагаются близко друг от друга они передаются в составе одного хромосомного сегмента. Благодаря анализу полиморфных генетических маркёров можно проследить в ряду поколений наследование каждой из родительских хромосом. [c.269]

    Косвенная ДНК-диагностика путём анализа полиморфизма по длине рестриктных фрагментов и тандемных повторов [c.271]

    Беременным, имеющим риск рождения ребёнка с врождённой гиперплазией коры надпочечников, до 10-й недели беременности назначают дексамета-зон (20 мкг/кг) независимо от состояния плода. Дексаметазон подавляет секрецию андрогенов эмбриональными надпочечниками. Одновременно необходимо провести пренатальную диагностику пола плода и ДНК- диагностику мутаций в гене (либо путём биопсии хориона, либо амниоцентезом). Если обнаруживается, что плод мужского пола или что плод женского пола не поражён, то пренатальную терапию прекращают, а если у плода женского пола находят мутации в гомозиготном состоянии, то лечение продолжают до самых родов. [c.306]

    Генодиагностика (или ДНК-диагностика) — совокупность методов по выявлению мутаций, приводящих к наследственной патологии. [c.352]

    В книге изложены основные сведения о геноме человека, новые подходы к изучению генов человека. Подробно описаны различные методы ДНК-диагностики моногенных, хромосомных и сложно наследующихся заболеваний человека, подходы к генотерапии. [c.438]

    В монографии рассмотрены современные представления о строении и механизмах функционирования генов прокариот и эукариот, а также основные методы их исследования. Книга состоит из двух частей. В первой части обсуждаются структура генома прокариотических и эукариотических организмов, а также механизмы транскрипции, трансляции, репликации, репарации и их регуляции. Сформулирована современная концепция гена. Во второй части монографии рассмотрены принципы основных методов, используемых в исследованиях генов. Главное внимание уделено современным методам генной инженерии. Обсуждаются наиболее важные аспекты развития современной молекулярной генетики в исследованиях направленного мутагенеза и белковой инженерии, антисмысловых РНК, аптамеров, рибозимов и дезокси-рибозимов, трансгеноза и генотерапии, а также достижения в разработке микрочипов ДНК, ДНК-диагностике и ДНК-типировании и изучении генома человека. В книге учтены данные литературы на конец 1999 г. [c.277]


Смотреть страницы где упоминается термин ДНК-диагностика: [c.187]    [c.188]    [c.195]    [c.208]    [c.248]    [c.365]    [c.270]    [c.274]    [c.341]   
Молекулярная биотехнология принципы и применение (2002) -- [ c.187 , c.188 , c.189 , c.190 , c.191 , c.192 , c.193 , c.194 ]

Искусственные генетические системы Т.1 (2004) -- [ c.6 ]




ПОИСК







© 2024 chem21.info Реклама на сайте