ДЭАЭ-сефароза

При изучении свойств НАД-киназы из скелетных мышц использовали высокоочищенные, но ие гомогенные препараты НАД-киназы. Препарат фермента из сердца голубя был электро-форетически получен в гомогенном состоянии. Метод выделения и очистки в качестве последних стадий включал ионообменную хроматографию на ДЭАЭ-сефадексе А-50 и гель-фильтрацию на сефарозе 6В [5]. Сравнение свойств частично очищенных и гомогенных, по данным электрофореза, препаратов фермента позволило установить следующую закономерность. Частично очищенные ферментные препараты НАД-киназы из сердца голубя подобно ферменту из скелетных мышц кролика гетероген ны и представлены не менее чем пятью молекулярными формами, число которых могло варьировать от препарата к препарату НАД-киназную активность проявляли формы с молекулярными весами, равными 300 000—270 000, 230 000—200 000, 180 000, 120 000 и 45 000. Из распределения общей активности фермента между различными молекулярными формами следует, что большая часть НАД-киназы представлена олигомерами с молекулярным весом 180000. [c.138]

ДЭАЭ-сефароза СЬ-6В КМ—сефароза СЬ 6В [c.15]

Смолы 1) ДЭАЭ-ТСК или ДЭАЭ-52 2) фенил-сефароза 4В. [c.379]

ДЭАЭ ДЭАЭ-сефадекс А-25 ДЭАЭ-сефадекс А-50 ДЭАЭ-сефароза L-6B ДЭАЭ-биогель А i-0- Hj- H2-NEt2 Сефадекс G-25 Сефадекс G-50 Сефароза L-6B Биогель А (4% агарозы) 3.5 + 0,5 3.5 + 0,5 0,15 + 0,02 0,02 0,005 5 28 Набухшая смола Набухшая смола Основание средней силы. рК, 9,5 Предел эксклюзии Г 1 О [c.438]

Хроматография на фенил-сефарозе. Разбавленный в два раза буфером Б элюат с ДЭАЭ-ТСК после добавления в него СаСЬ до конечной концентрации 1 мМ наносят на колонку с фенил-сефарозой, предварительно уравновешенную буфером Б, содержащим 1 мМ a l2-Объем колонки 20 мл. Смолу промывают буферным раствором Б, содержащим 0,1 М Na l и 1 мМ СаСЬ до исчезновения показаний оптической плотности при длине волны 280 нм 1иа увикорде) в диапазоне 0,05 опт. ед. Скорость промывки — 1 мл/мин. Элюцию фосфодиэстеразы с фенил-сефарозы проводят буфером В. Скорость элюции— [c.380]

Повторная хроматография на ДЭАЭ-ТСК. Элюат с фенил-сефарозы наносят на колонку ДЭАЭ-ТСК объемом 20 мл, предварительна уравновешенную буфером В, и промывают 60 мл этого буфера. Элюцию фермента осуществляют линейным градиентом Na l (О—0,3 М) в буфере В. Объем буфера в камерах градиентатора — 2x100 мл. Скорость элюции — 2 мл/мин. Фракционирование необходимо проводить в пробирки по 4 мл. [c.380]

В настоящее время применяют ряд усовершенствованных методов разделения нуклеиновых кислот на фракции из суммарного препарата, полученного описанным методом. Это прежде всего хроматография на геле фосфата кальция, ионообменная хроматография (в качестве адсорбентов используют ДЭАЭ-целлюлозу, ДЭЛЭ-сефадекс и др.), ультрацентрифугирование в градиенте плотности сахарозы, хроматография по сродству на белковых носителях, фильтрация через гели агарозы и сефарозы, гель-электрофорез и др. [c.97]

Развитие аффинной хроматографии сопровождается увеличением количества продажных иммобилизованных аффинных лигандов. Для составления общей картины о применении некоторых веществ в практике аффинной хроматографии в табл. 11.1 перечислены промыптленные названия носителей и иммобилизованных аффинных лигандов. Из цитированной в таблице литературы очевидно, что в настоящее время очень возросло применение продажных п.ммобилизованных аффинных лигандов, например конканавалина А, связанного с сефарозой ( кон А — сефароза). Можно полагать, что то же ожидает и другие хроматографические материалы. Точно так же как сегодня в очень редких лабораториях готовят ДЭАЭ- и КМ-целлюлозу, совершенно закономерно, что будет постепенно увеличиваться использование продажных био-специфических сорбентов. Это справедливо прежде всего для сорбентов с групповой специфичностью или сорбентов специфических к веществам, постоянно получаемым в лабораториях, и обусловлено специфической природой аффинной хроматографии. Из разнообразия биологически активных веществ следует, что необходим очень широкий ассортимент специфических сорбентов поэтому много научных работников, по-видимому, будут вынуждены сами готовить специальные высокоэффективные сорбенты. [c.137]

Амино-4,6-дихлор-сыдг.лг-триазин приготовлен исходя из циануро-вой кислоты и затем введен в реакцию с различными полисахаридными носителями, такими, как целлюлоза, ДЭАЭ-целлюлоза, КМ-цсллю.лоза, а также сефадекс и сефароза. Ниже приведена методика проведения реакции. [c.179]

Антигены, Антигены, используемые для иммунизации, должны быть очень хорошо очищены, для чего можно использовать метод иммуноаффинной хроматографии или классические методы . Чистая GGT из почек быка может быть выделена солюбилизацией фермента в присутствии дезоксихолата натрия с последующей обработкой -бутанолом, фракционированием сульфатом аммония и хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе [27]. Полученный после разделения на сефарозе 6В препарат GGT подвергается протеолитическому гидролизу бромелаином, и полученная GGT (легкая форма) очищается электрофорезом в полиакриламидном геле [28]. Чистая GGT из почек крысы (фермент П1) может быть получена [29] подобным методом. [c.153]

Следует подчеркнуть, что большинство препаратов иммуноглобулина определенного класса обычно содержит примеси Ig других классов, за исключением IgG, выделенных хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе, и IgM, выходящих в первом пике при хроматографии на сефадексе G-200. Поэтому рекомендуется проводить рехроматографию полученных препаратов на той же колонке и в тех же условиях, либо использовать какую-то иную процедуру, например электрофорез в агарозном блоке или гель-фильтрацию. Для той же цели можно применить и аффинную хроматографию на сефарозе с класс-специфической антисывороткой. Миеломные белки классов G, А и М и парапротеины при макроглобулинемии Вальденстрёма удается очистить одноэтапной хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе или зональным электрофорезом, поскольку они являются основным компонентом сыворотки. Чистоту каждой фракции иммуноглобулинов исследуют с помощью иммуноэлектрофореза, двойной иммунодиффузии или радиоиммунным методом с класс- или подкласс-специфическими антисывороткамн. Чистые белки хранят при 4°С в присутствии 0,02% NaNs или замораживают растворы с концентрацией 10— 30 мг/мл. [c.72]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология