Гели фосфата кальция

Адсорбционная хроматография. Разделение компонентов смеси (образца) основано на их различной сорбируемости на твердом адсорбенте. В качестве адсорбентов используют активированный древесный уголь, гель фосфата кальция, оксиды алюминия или кремния. Адсорбент в виде суспензии с растворителем (чаще всего буферным раствором) вносят в стеклянную вертикальную трубку (колонку) и равномерно в ней упаковывают. Образец в небольшом объеме растворителя наносят на колонку - [c.27]

Иногда для иммобилизации ферментов применяют гель фосфата кальция. В этом случае образование пространственной сетки обусловлено не ковалентными, а ионными связями. [c.60]

Гель фосфата кальция (получение см. ниже). [c.83]

Фракционирование белков на гидроксиапатите [23, 24] или геле фосфата кальция [25] является особой разновидностью ионообменной хроматографии. В этом случае разделение также основано на образовании электростатических связей между заряженными группировками молекул белков и ионами фосфата и кальция в кристаллах гидроксиапатита (ГА). Микрокристаллические частицы ГА состава Саю(Р04)б(0Н)2 или гель фосфата кальция фиксированы обычно на инертном носителе, например целлюлозе. ГА амфотерен, его изоэлектрическая точка сильно зависит от метода получения она может находиться в диапазоне от 6,5 до 10,2. На прочность связывания положительно заряженных группировок оказывают сильное влияние неорганические соли прочность связывания отрицательно заряженных групп практически не зависит от концентрации солей. Кроме того, сорбция в присутствии солей зависит и от молекулярной массы белка. Различные аспекты применения ГА для [c.437]

Элюция с геля фосфата кальция .20 780 73 40 [c.84]

Некоторые белки адсорбируются на гелях фосфата кальция или гидроокиси алюминия. Обычно адсорбция происходит наиболее эффективно при низком pH и малой ионной силе. Белок можно элюировать, повышая pH или увеличивая ионную силу. Белки, не адсорбируемые гелем, удается иногда очистить путем адсорбции других белков такой процесс получил нелогичное название отрицательной адсорбции . [c.14]

Вещества, имеющие большую поверхность частиц (гель фосфата кальция и гель гидроокиси алюминия), характеризуются высокой адсорбционной способностью. Разные белки адсорбируются и элюируются по-разному, что и дает возможность использовать адсорбенты для очистки ферментов. Различают негативную адсорбцию, когда при добавлении адсорбента фермент остается в растворе, и положительную адсорбцию, когда фермент адсорбируется, а часть балластных белков остается в растворе. Наибольший эффект достигается при их совместном использовании, т. е. сначала адсорбируют возможное ко- [c.203]

Гель фосфата кальция (постаревший). [c.416]

К раствору добавляют гель фосфата кальция (деаэрированный) из расчета 4 мг сухого веса геля на 1 мл раствора и суспензию перемешивают под током азота 10 мин. Смесь центрифугируют в закрытых [c.417]

Адсорбционная хроматография. Избирательное адсорбирование белков некоторыми материалами и последующая их избирательная элюция часто используются для очистки белков. Такое фракционирование может проводиться как па колонках, так и на пластинках адсорбента. Для адсорбционной хроматографии белков применяют обычно такие носители, как гель фосфата кальция, алюмогель, диатомовая земля (целит), крахмал г гидроксилапатит. [c.80]

НЫМ фосфатом натрия и промывали гелеобразный осадок дистиллированной водой. Затем гель оставляли для созревания в течение нескольких месяцев это продолжалось до тех пор, пока он не приобретал оптимальные характеристики по своей плотности [112]. Гелеобразная консистенция этого материала не позволяет применять его непосредственно в колонках из-за плохих фильтрационных параметров, однако он идеален для сорбции в объеме. Гель фосфата кальция имеет высокую емкость вследствие большой площади поверхности на единицу веса до развития ионообменной хроматографии он широко использовался для очистки белков. Его применение незаслуженно забыто в последнее время в связи с распространением более сложных адсорбентов и производством фосфата кальция с частицами контролируемых размеров, предназначенного специально для хроматографии. Были предприняты попытки использовать этот кальций-фосфатный гель, смешанный с целитом (вспомогательный фильтрующий материал), для хроматографического разделения белков в колонках. Однако этот метод имеет мало преимуществ по сравнению с использованием кристаллического гидроксилапатита, предназначенного специально для колонок. Главное преимущество геля фосфата кальция заключается в возможности его применения для быстрой адсорбции белков в объеме . [c.181]

ОЧИСТКА БЕЛКОВ СОРБЦИЕЙ НА ALUMINA Су И ГЕЛЕ ФОСФАТА КАЛЬЦИЯ В ОБЪЕМЕ [c.245]

Из большого числа поверхностно-активных веществ, пригодных в качестве сорбентов при адсорбционной хроматографии, в белковой химии широкое применение получили гели фосфата кальция. В настоящее время в хроматографии белков чаще используют особую форму фосфата кальция—гидроксилапатит (Са50Н(Р04)з). Эта форма более устойчива в широкой области pH и обладает большей стабильностью. Гидроксилапатит готовят смешиванием растворов хлористого кальция и двузамещенного фосфата натрия. Образующийся осадок двузамещен-ного фосфата кальция под действием концентрированной щелочи гидролизуется в новую разновидность фосфата кальция — гидроксилапатит. [c.114]

Колонку размером 2X20 см подготавливают так, как это описано на с. 101, и заполняют густой взвесью геля фосфата кальция до тех пор, пока высота столба геля не достигнет 15 см. Необходимо, чтобы верхний слой геля имел гладкую горизонтальную поверхность. Колонку соединяют с резервуаром, заполненным 0,01 М фосфатным буферным раствором, pH 6,8. Скорость тока жидкости устанавливают равной 5 мл/мин. [c.115]

В настоящее время применяют ряд усовершенствованных методов разделения нуклеиновых кислот на фракции из суммарного препарата, полученного описанным методом. Это прежде всего хроматография на геле фосфата кальция, ионообменная хроматография (в качестве адсорбентов используют ДЭАЭ-целлюлозу, ДЭЛЭ-сефадекс и др.), ультрацентрифугирование в градиенте плотности сахарозы, хроматография по сродству на белковых носителях, фильтрация через гели агарозы и сефарозы, гель-электрофорез и др. [c.97]

Однако при ферментативных воздействиях всегда приходится учитывать, что препарат фермента может обладать неизвестной активностью, способной изменить выделяемый полисахарид. Удаление белка после ферментативной обработки достигается обычно одним из методов денатурирования. К ним относятся нагревание, действие щелочи , хлороформа с амиловым спиртом (особенно распространеньый метод ), трифтортрихлорэтана , трихлоруксусной кислоты фссфоЕольфрамовой кислоты и т. д. Кроме того, используется избирательная сорбция белков на геле фосфата кальция , бентоните или каолине . Зти же методы, конечно, могут применяться и для удаления неферменткых белков, загрязняющих растворы полисахаридов. [c.486]

Многие задачи по разделению веществ решаются с помощью сорбции части компонентов смеси на тех или иных сорбентах. В биохимии для этой цели часто используют гель фосфата кальция, известный также под названием гидроксиапа-тит. Для освобождения от низкомолекулярных соединений, содержащих ароматические кольца, применяют адсорбцию на активированном угле. Такие соединения взаимодействуют по механизму стекинга с полиароматической системой графита, составляющего основу активированного угля. [c.235]

Вопросам фракционирования белков, в частности ферментов, а также методам приготовления геля фосфата кальция на целлюлозе посвящен обзор [27]. Механизм разделения на ГА еще не выяснен до конца, что связано, по-видимому, со сложным поли-функцнональным характером взаимодействия белка с амфотер-ным носителем, а также недостатком данных относительно влияния молекулярного веса белка на процесс разделения. Возможно, этим объясняется тот факт, что хроматография на ГА еще не получила должного признания. [c.451]

Однако наиболее важным и самым распространенным методом выделения и анализа ферментов является хроматография. Об этом можно судить по множеству публикаций и специальных обзоров, посвященных различным аспектам хроматографии ферментов. (См. обзор по колоночной хроматографии [20 и табл. 36.1.) В последние годы получили дальнейшее развитие новые высоко избиратетгьные методы выделения, такие, как аффинная хроматография [21—26 и гл. 7, 14], хроматография на гидроксиапатите [27 и гл. 35], хроматография на геле фосфата кальция [28 и гл. 35], гель-хроматография в градиенте детергента как метод очистки мембраносвязанных ферментов [29, 30], гель-проникающая хроматография [31 и гл. 5, 12], электрохроматог-рафические методы [11], ионообменная хроматография [32, 33 и гл. 6, 13], субетрат-специфичное элюирование [34]. [c.9]

Интересным примером из этой области является выделение орнитин-карбамоилтрансферазы из На1оЬас1епит ааНпапит по схеме, включающей гель-фильтрацию, ультрацентрифугирование в градиенте сахарозы и хроматографию на гелях фосфата Кальция [57]. Это типичный фермент галофильных бактерий, обла- [c.16]

Рис. 36.5. Хроматография орнитин-карбамоилтрансферазы на геле фосфата кальция [57].

Лучший результат (6-кратное увеличение активности) был получен при хроматографировании на геле фосфата кальция (рис. 36.5), иногда в сочетании с гель-фильтрацией. Сорбент получали по модифицированной методике Тизелиусй [58, 59]. Фракции, содержаш,ие фермент, объединяли, диализовали в присутствии мочевины и меркаптоэтанола. Данные электрофореза [c.18]

Препарат диализовали против 0,005 М натрийфосфатного буферного раствора (pH 6,8) и хроматографировали на колонке (1,5X35 см) с гелем фосфата кальция. Фермент элюировали в линейном градиенте натрийфосфатного буферного раствора (300 мл 0,005 МЧ-300 мл 0,025 М pH 6,8). Фракции, содержавшие активный фермент, объединяли, концентрировали при помощи вакуумного Диализа, диализовали против более разбавленного натрийфосфатного буферного раствора и хроматографировали на СМ-сефадексе (рис. 36.13). [c.28]

Фрейденберг и сотр. [107] показали, что основной лакказный компонент гомогената из Psalliota можно отделить от пероксидазы и каталазы при помощи адсорбции на гелях фосфата кальция или гидроокиси алюминия. Кислород или кислород в присутствии сернокислой меди в отсутствие фермента приводит к образованию тех же продуктов, что и с ферментом, но более медленно. Однако эти же авторы сообщили, что основным конденсирующим ферментом ели является лакказа с незначительной примесью пероксидазы (но ср. Фрейденберг и сотр. [82]). [c.303]

Для одновременного выделения протеазы и стрептомицина культуральную жидкость, в которой (глубинным способом) выращивали Str. griseus, прежде всего осветляли гелем фосфата кальция. Далее, чтобы адсорбировать стрептомицин, ее пропускали через колонку карбоксильной смолы с высокой степенью сшивки. Для этой цели может быть использован амберлит IR -50, но лучше— специальная смола Какен С-1 (SP-7) . Здесь знак SP показывает молярное отношение (ХЮ) фенола/салициловой кислоты, применяемых для синтеза смол серии С-1 фирмой Какен. Чем выше значение величины SP, тем выше количество прошивок (перекрестных связей) в получающейся смоле. [c.208]

Неочищенный экстракт из С. pasteurianum может быть разделен путем адсорбции на геле фосфата кальция на две системы — систему, активирующую азот, и систему, поставляющую атомы водорода. Каждая из этих системв отдель- [c.596]

В лабораторной практике известно использование геля фосфата кальция для адсорбции и хроматографического разделения белрюв. [c.84]

Кейлин и Хортли применили гель фосфата кальция при очистке каталазы, Куниц — при получении кристаллической ниро-фосфатазы Штрауб применил гель фосфата кальция для выделения кристаллических пирофосфатазы и лактатдегидрогеназы. [c.84]

Гель фосфата кальция, приготовленный по методу Кейлина и Хартри [345] или по методу Кунитца [264], является ценным адсорбентом для многих белков [346, 347]. Одним из преимуществ этого материала является то, что при понижении рН он растворяется, поэтому при селективной адсорбции выделяемого белка на этом адсорбенте отпадает необходимость в подборе соответствующего элюирующего агента. Лактикодегидраза была адсорбирована из экстракта сердечной мышцы на геле фосфата кальция, элюирована буферным раствором, очищена осаждением вначале ацетоном, а затем раствором сернокислого аммония и, наконец, выделена из раствора последнего в кристаллическом состоянии [346]. Были применены и другие неорганические вещества, например гели гидроокисей и сульфиды металлов [348, 349]. Протромбин адсорбировали на гидроокиси магния и выделяли при разложении последней действием ССЬ [231]. [c.75]

Белки яичного белка фракционируют осаждением этанолом (различные концентрации), изменением ионной силы (/), изменением величины рИ и температуры методом, аналогичным методу Кона для белков плазмы [16]. Конечную надосадочную жидкость (pH 4,6, температура —15°, I = 0,04, фракция, полученная при 0,11 М насыщении этанолом), содержащую овомукоид, концентрируют, диализуют и сушат вымораживанием. Полученный белок авторы не анализировали, и впоследствии было показано, что он содержит примесь гликопротеина (13,6% гексоз, 13,8% гексозамина и 3% сиаловой кислоты), который но обладает ингибирующей активностью по отношению к трипсину [17]. Этот гликопротеин был выделен методом хроматографии на геле фосфата кальция он оказался сходен с овомукоидом по изоэлектрической точке, константе седиментации и растворимости и, вероятно, мог присутствовать в препаратах овомукоида, по.лучепных другими методами. [c.25]

По-видимому, наиболее активным препаратом внутреннего фактора, -полученным до настоящего времени, является препарат, описанный Броме-ром и Дэвиссоном [133]. Для получения препарата авторы обрабатывали водный экстракт слизистой пилорической части желудка свиньи панкреатином, а затем хроматографировали на колонках с амберлитом ХЕ-64 и с гелем фосфата кальция. К препарату добавляли избыток витамина В12 и затем фракционировали в ультрацентрифуге в результате удалось выделить комплекс витамина В з с внутренним фактором, который был клинически активен в дозе 0,05 мг. Препарат был гомогенен в ультрацентрифуге и имел коэффициент седиментации 5,4 8. Принимая во внимание содержание витамина В12 в комплексе (25 мкг мг) и исходя из предположения, что один моль внутреннего фактора связывает один моль витамина В12, был рассчитан молекулярный вес препарата, который оказался равным 53 ООО. Следует отметить, что эта величина не соответствует коэффициенту седиментации 5,4 8, что, вероятно, обусловлено или необычно большой плотностью этого комплекса или агрегацией. При электрофорезе препарата был получен один главный компонент, составлявший 92% препарата. Очищенный препарат содержал 6,8% редуцирующих сахаров и менее 0,6% группового вещества А крови. Последняя цифра согласуется с данными Элленбогена и Вильямса [131], которые наблюдали понижение содержания группового вещества А крови по мере очистки внутреннего фактора. [c.251]

Большое значение имеет также коллоидное состояние фильтруемой суспензии. Улучшению процесса фильтрации способствует регулирование pH, добавление флокулянтов или введение 0,1% хлорида кальция, который в присутствии ионов РО4 образует гель фосфата кальция, улучшающий фильтруемость. Однако при решении вопроса о любого рода добавках в фильтруемую суспензию основным моментом является сохраняемость активности фермента, так как известны случаи, когда добавки 4—5% фильтроперлита вызывали потерю ферментативной активности на 52— 58%. [c.128]

Приготовление геля фосфата кальция. 150 мл раствора хлорида кальция (132 г СаСЬ-бНаО в 1 л) разбавляют водой до 1600 мл и встряхивают со 150 мл раствора трехзамещенного фосфата натрия (152 г МазР04-12Н20 в 1 л). Реакцию среды доводят до pH 7,4 разбавленной уксусной кислотой и образовавшийся осадок 4 раза промывают 20 л воды. Собранный центрифугированием осадок суспендируют в 1 л воды и оставляют стоять в течение месяца в темноте. Осадок геля, полученный центрифугированием, дважды промывают 0,5 л 0,1 М калий-фосфатного буфера (pH 6,4) и хранят в этом буферном растворе при 4°С. [c.83]

Все до сих пор рассмотренные в этой главе адсорбенты, за исключением некоторых упомянутых синтетических полимеров, построены на основе биологических матриц. Существует также ряд неорганических веществ, использовавшихся для адсорбции белков, — в основном оксиды, нерастворимые гидрооксиды и фосфаты. Главное место среди них занимает гидроксифосфат кальция, который в кристаллическом состоянии известен как гидроксилапатит. Использование гидроксилапатита и студнеобразной формы геля фосфата кальция будет описано ниже в заключительной части этой главы, посвященной адсорбции в объеме . Тем не менее краткое описание этих адсорбентов даст лредставление о пригодности неорганических материалов для адсорбции белков. Одно из отличительных преимуществ таких материалов, особенно при крупномасштабном или промышленном применении, — это их дешевизна часто не стоит труда очищать их после однократного использования. [c.178]

Уже в течение нескольких десятилетий известно, что гидратированные гели фосфата кальция можно успешно использовать для избирательной адсорбции белков и их последующей элюции высокими концентрациями солей. Первоначальный и до сих пор широко применяемый способ получения адсорбента состоял в том, что хлористый кальций смешивали с трехоснов- [c.180]

К типичным материалам, используемым для адсорбции белков в объеме>, относятся гель фосфата кальцйя, ионообменники (особенно фосфоцеллюлоза), аффинные адсорбенты, адсорбенты, модифицированные красителями, гидрофобные адсорбенты и иммуноадсорбенты. [c.196]

В опытах Ройзмана и Роана [693] было показано, что варианты вируса герпеса, отличающиеся по характеру цитопатогенных изменений клеток, различались также и по степени элюции с геля фосфата кальция. Мелкобляшеч-ный вариант, вызывающий образование округленных клеток, элюировался 0,55 М фосфатным буфером, а крупно-бляшечпый вариант, вызывающий изменения клеток по типу синцития, максимально элюировался 0,60 М раствором фосфатного буфера. [c.101]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология