Сефакрилы

Молекулярно-ситовая хроматография. При данном виде хроматографии используется способность материалов с контролируемой пористостью сортировать и разделять компоненты смеси в соответствии с размерами и формой их молекул. Для осуществления процесса гель-хроматографии используются гели поперечно-емкостного декстрана (сефадексы и сефакрилы), поперечно-сшитые полиакриламидные гранулы (биогели), агарозные гели с выраженными в них цепями акриламидного полимера (ультрагели) и более жесткие поперечно-сшитые агарозы (СЬ-агарозы и сефакрилы-8), с помощью которых можно быстро разделить макромолекулы в соответствии с их размером. Степень удерживания растворенного вещества на колонке зависит от его способности проникать в поры геля. Поэтому при гель-фильтрации сначала выходят высокомолекулярные вещества, а затем вешества в порядке убывания их моле- [c.55]

Ниже указаны области фракционирования продажных сефакрилов — как для глобулярных белков, так и для декстранов [c.118]

Последнее оказалось необходимым из-за того, что сефакрилы S-500 и S-1000, предназначенные для фракционирования нуклеиновых кислот и полисахаридов, пмеют столь крупные поры, что прокалибровать их по молекулярным массам белков не представляется возможным. [c.118]

Выпускается пять типов сефакрилов (от S-200 до S-1000 все — Superfine ), различающихся по пористости, но с одинаковым разбросом диаметров сферических гранул 40—105 мкм. Это соответст- [c.117]

Сефакрилы. Структура, а также химические и адсорбционные свойства материала этих матриц (декстран, сшитый метиленбисакри-ламидом) были описаны выше. Главным его достоинством — по сравнению с сефадексом — является жесткость, благодаря чему гель-фильтрацию на сефакрплах, в том числе на крупнопористых, можно вести при относительно больших скоростях элюции. [c.117]

На рис. 61 представлены графики селективности сефакрилов для двух вариантов фракционирования белков нативных (глобулярных) и денатурированных, имеющих форму статистических клубков (в 6 М растворе гуанидинхлорида). Как и в случае сефадексов, линейные участки графиков лежат в более узком интервале молекулярных масс, чем вся область фракционирования. Кроме того, весьма существенно отличаются друг от друга графики для нативных и денатурированных белков. Например, легко видеть, что нативный белок с М = 100 ОООна сефакриле S-400 должен иметь K v = 0,75, а в денатурированном виде на том же S-400 он будет двигаться в соответствии с Kav = 0,42, т. е. значительно быстрее. Этого и следовало ожидать из-за различия в плотности упаковки нативных и денатурированных белков. [c.118]

Жесткость сефакрилов, в том числе и наиболее крупнопористых, позволяет использовать их в водных буферах со скоростями элюции порядка 40 мл/см -ч и не слишком сильно снижать пх при работе с вязкими элюептами. Так, сефакрил S-400 не сжимается прп элюции колонки 6 М раствором гуанидинхлорида со скоростью 20 мл/см -ч, а сефакрил S-1000 позволяет с такой же скоростью вести элюцию чистым формамидом. Разумеется, столь высокие скорости [c.118]

Сефакрилы используют для очистки плазмид, рибосом п даже целых вирусов, для фракционирования рестрпктазных фрагментов ДНК и др. Соответствующие пртгеры приведены ниже. [c.119]

Уже упоминалось, что ввиду сжимаемости многих матриц для гель-фильтрацип перепад давлений, приходящийся на колонку, и максимальную скорость. элюцпи (эти величины взаимосвязаны) в ряде случаев следует ограничивать. Подчеркнем, что эти ограничения необходимы не только уже в ходе хроматографического процесса, но п во время заполнения колонки. Как будет показано ниже, наиболее мягкие матрицы не выдерживают даже гидравлического напора, обусловленного высотой самой колонкп. Разность уровней в этом случае надо уменьшать с помощью защитной петлп на ее выходе. Для сефадексов от 0-10 до 0-75, сефароз СЬ-6В и СЬ-4В, биогелей Р-2 — Р-10, А-0,5т и А-1,5т, а также всех сефакрилов эта проблема не возникает, поскольку они обладают достаточной [c.128]

Наиболее широкое распространение среди носителей для гель-хроматографии белков получили сорбенты, приготовленные на основе декстрана (сефадексы, сефакрилы, молселекты), полиакриламида (биогели Р, акрилексы) и агарозы (сефарозы, биогели А) и др. Набухая в воде, они образуют гели. [c.106]

Гель-фильтрация особенно широко используется для удаления глютенинов, альбуминов и глобулинов, которые можно извлекать одновременно с глиадинами. Однако 7-глиадин очищали [94] гель-фильтрацией в 70 %-ном этаноле и 10 мМ трисе на носителе сефакриле G 200 в сочетании с препаративным электрофорезом в полиакриламидном геле с кислым pH. [c.183]

Осаждение этанолом, хроматография на ДЕЛЕ- и ЗР-сефадексе, гель-фильтрация на Сефакриле 3-200 и изоэлектрофокусирование [c.124]

Осаждение сульфатом аммония, гель-фильтрация на Сефакриле 8-200 [c.124]

Фракционное осаждение сульфатом аммония, аффинная хроматография на порошковой целлюлозе, хроматография на ДЕАЕ-сефадексе, сефакриле 3-200 [c.124]

Наносят материал на колонку с ДЭАЭ-целлюлозой объемом 50 мл (например, Whatman DE-52) в том же буфере и собирают несвязавшуюся фракцию. Она должна содержать около 180 мг белка, представляющего собой в основном IgG. Препарат можно подвергнуть дальнейшей очистке с помощью гель-фильтрации на колонке с сефакрилом S300 в буфере трис/150 мМ Na l. [c.169]

Нанесите гибридный белок, элюированный с колонки с JVl-сефарозой, на колонку с сефакрилом S-200 и элюируйте его уравновещивающим буфером, состав которого указан в п. 12, [c.111]

Аполкпопротеин Е — эукариотический полипептид, синтезируемый в клетках Е. oli, где он находится в нерастворимом состоянии, но его очищают с помощью аффинной хроматографии в присутствии денатурирующих агентов [32] (табл. 4.20). Для этого используют хроматографию на гепарин-сефарозе с 2 М мочевиной. В этих условиях эукариотический белок, чтобы узнавать лиганд, должен частично принять нативную конформацию. Далее используются еще две стадии очистки, одна из которых — это гель-фильтрация на сефакриле S-300 в присутствии 6 М гуанидинхлорида. Затем после диализа, при котором белок ренатурирует, осуществляется конечная стадия очистки с исполь- [c.124]

Уравновесьте колонку с сефакрилом S-300 (2,5x30 см) буфером для гель-фильтрации, содержащем 4 М гуанидинхлорид. [c.126]

Нанесите растворенный белок на колонку с сефакрилом S-300 и элюируйте его буфером для гель-фильтрации, содержащем 4 М гуанидин-хлорид, [c.126]

Центрифугируйте этот раствор при 13 ОООй перед нанесением его на колонку размером 2,5x50 см с сефакрилом 5-300, уравновешенную буфером для нанесения образцов . [c.159]

С тем, чтобы воспрепятствовать агрегации олигомеров. Однако в случае сефарозы эффективность разделения зависит от концентрации солей и pH [104]. Хроматографию на сефакриле рекомендуется вести при ионной силе >0,5 или при pH 5,5, поскольку этот гель проявляет слабые ионообменные свойства [19]. [c.23]

Отделяют конъюгат и несвязавшийся фермент на колонке с сефакрилом S-200 (1,6X95 см), используя для элюции PBS. Первый белковый пик с ферментной активностью содержит конъюгат с мол. массой около 200 000. [c.49]

Приготавливают при комнатной температуре, колонку диаметром 2,5 см с сефакрилом S300 (сверхмелким, Pharma ia) в физиологическом растворе, содержащем трис-НС1 буфер, из расчета 100 мл геля на 2 мл сыворотки или эуглобу [c.107]

Неочищенные мембраны Дезоксихолатный экстракт После нанесения на колонку иммобилизованных антител к MR ОХ-45 Элюат с колонки После хроматографии иа сефакриле S300 [c.192]

При таком огромном выборе разнообразных материалов начинающий нуждается в совете относительно того, что покупать. Если есть уверенность, что интересующий исследователя фермент не имеет необычно низкой (-<15 000) или необычно высокой (>10 ) молекулярной массы, то можно обойтись двумя-тре-мя видами материалов. Так как поперечно-сшитые декстраны или агарозные гели превосходны практически во всех отношениях, то достаточно будет либо двух сефакрилов — S-200 и [c.201]

На заключительной стадии очистки проводят гель-фильтрацию на колонке с сефакрилом 5300. Антигенная активность выходит из колонки в виде симметричного пика, совпадающего с главным пиком белка (рис. 5.8). [c.193]

К реакционной смеси добавляют Vio объема 50X стоп-буфера (10Х ТЭ-буфер-1-2% ДСН) и наносят материал на колонку с сефакрилом S-500 (0,7X40 см), уравновешенную 1ХТЭ-бу-фером-Ь2% ДСН. Собирают фракции объемом по 20 капель и определяют радиоактивность в каждой фракции по Черенкову. Во фракциях вышедшего со свободным объемом пика определяют содержание ДНК с помощью электрофореза в агарозном геле и радиоавтографии. Для электрофореза в 1,5%-ном агарозном геле отбирают 5—10 мкл ДНК каждой третьей фракции. [c.67]

Электрофоретическое и хроматографическое разделение нуклеиновых кислот. Для дополнительной очистки плазмидной ДНК иногда применяют гель-фильтрацию на Сефакриле S1000 (крупнопористый синтетический аналог сефадекса) [66], а также электрофорез в агарозном геле. Следует отметить, что электрофорез в агарозном, полиакриламидном или смешанном агарознополиакриламидном гелях используют для определения размеров и выделения небольших фрагментов дцДНК, образующихся при [c.41]

Иногда сорбция носит ионообменный характер, и в таком) случае ее можно избежать, применив буферные растворы с высокой ионной силой. Сорбция может быть также обусловлена гидрофобными взаимодействиями, и тогда высокая ионная сила будет только помехой. Сефакрилы, в которых поперечные сшивки образованы алифатическими цепями, особенно склонны проявлять сорбционные свойства при высоких концентрациях солей и низких значениях pH. Поэтому фирмы-изготовителн рекомендуют использовать буферные растворы с значениями pH близкими к нейтральному. [c.201]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология