График селективности

Рис. 1—19. График селективности различных растворителей при экстракции уксусной кислоты из воды 1 — изопропиловый эфир

Для хроматографического фракционирования смеси молекул, не сильно различающихся по своим массам, следует ориентироваться на линейный участок графика селективности, так чтобы для крайних значений молекулярных масс разделяемой смеси веществ значения оставались в интервале 0,2—0,8. То же самое относится и к определению самих молекулярных масс методом гель-фильт-рации. Впрочем, если это определение ведут в денатурирующем буфере (6 М раствор гуанидинхлорида), то надо учесть, что благодаря рыхлой упаковке денатурированных биополимеров вся область фракционирования смещается в сторону меньших значений молекулярных масс, чем те, которые приведены в таблицах для нативных глобулярных белков. Коррекцию на деформацию (и изменение размеров) белков следует вводить и в случае использования детергентов, применяемых для улучшения растворимости. Детергенты разворачивают белковые глобулы, увеличивая их эффективные размеры, и, кроме того, связываются с белками, что приводит иногда к заметному увеличению массы. [c.134]

На рис. 18 представлен типичный график селективности различных растворителей при экстракции уксусной кислоты из водных растворов. [c.41]

Графики селективности могут быть непосредственно построены переносом ряда точек пересечения конод с пограничной кривой, отвечающих соотнощению (I, 74). [c.42]

Форма полученной кривой на графике селективность — степень превращения позволяет выбрать модель реактора для достижения максимального выхода, как описано ранее (см. стр. 306). [c.383]

Рнс. 59. Графики селективности сефадексов [c.113]

На рис. 1—19 представлен типичный график селективности различных растворителей при экстракции уксусной кислоты из воды для систем, аналогичных системам, представленным на рис. 1—18. [c.35]

Кстати, отсюда следует, что хуже всех разделяются самые крупные молекулы, которые едва входят внутрь гранул (K v = 0,1 -i- 0,2). Выгоднее, таким образом, выбрать норпстость матрицы (но графикам селективности) так, чтобы разделение наиболее важных компонентов смеси происходило при значениях Kav в диапазоне 0,6—0,8. Конечно, в этом случае интересующие экспериментатора компоненты смеси будут двигаться вдоль колонки медленнее что будет способствовать расширению их пиков за счет продольной диффузии, но в отличпе от других хроматографических методов такое замедление скажется не очень сильно, ибо полный объем элюции, как уже отмечалось, невелик. Неоднородность размеров гранул также особо неблагоприятно сказывается в методе гель-фильтрации, поскольку явления диффузии здесь играют главную роль. [c.113]

Эти области даны в максимально широких границах меньшая цифра соответствует молекулам, для которых доступен весь объем внутри гранул [К = 1), большая — молекулам, практически не проникающим в гранулы [Ка = 0). Верхнюю границу называют иногда пределом исключения молекул из гранул ( ехс1и.Лоп limit ) Указанные выше области фракционирования заметно шире, чем линейные участки соответствующих графиков селективности на рис. 54. Отметим еще, что значения пределов исключения, да и всей ширины [c.115]

Выше приведены также значения удельных объемов упакованных в колонку набухших гранул сефадекса. Эти данные удобно использовать при подготовке материала для заполнения колонки. Следует отметить, что пределы исключения для сефадексов категории Superfine значительно ниже, чем у обычных сефадексов того же тппа. Соответственно несколько иначе расположены и прямые на их графиках селективности (рис. 60). [c.116]

Рис. 61. Графики селективности сефа-крилов для глобулярных (а) и денатурированных (б) белков

На рис. 61 представлены графики селективности сефакрилов для двух вариантов фракционирования белков нативных (глобулярных) и денатурированных, имеющих форму статистических клубков (в 6 М растворе гуанидинхлорида). Как и в случае сефадексов, линейные участки графиков лежат в более узком интервале молекулярных масс, чем вся область фракционирования. Кроме того, весьма существенно отличаются друг от друга графики для нативных и денатурированных белков. Например, легко видеть, что нативный белок с М = 100 ОООна сефакриле S-400 должен иметь K v = 0,75, а в денатурированном виде на том же S-400 он будет двигаться в соответствии с Kav = 0,42, т. е. значительно быстрее. Этого и следовало ожидать из-за различия в плотности упаковки нативных и денатурированных белков. [c.118]

Как видно из нриведеппых данных, процентное содержание агарозы в гелях отражено в маркировке этих матриц. Диаметры здесь даны для набухших гранул. На рис. 62 представлены графики селективности матриц сефарозы. [c.119]

Как видно из приведенных данных, диапазоны пористости и соответственно области фракцпонпрованпя для этих биогелей примерно такие же, как у сефадексов. Первые четыре типа выпускаются в виде гранул четырех диапазонов размеров 150—300 мкм (50— 100 МЕШ), 80—150 мкм (100-200 МЕШ), 40—80 мкм (200-400 МЕШ) и менее 40 мкм (—400 МЕШ). Остальные типы представлены тремя диапазонами размеров (за вычетом 200—400 МЕШ). Биогели серии Р поставляются в сухом виде, поэтому выше указаны также объемы упаковапной набухшей матрицы. На рис. 64 в тех же координатах, что п на предыдущем рисунке, представлено семейство графиков селективности для бпогелеи типа Р. Матрицы этого тппа имеют некоторые преимущества перед сефадексами. Во-первых, [c.121]

Фирма LKB поставляет иять типов ультрогелей серии АсА. Их состав и эффективные области фракционирования (т. е. линейные участки графиков селективности) таковы [c.123]

Рис. 65. График селективности для колонки тппа 1-125 фирмы Waters

Рис. 66. Графики селективности для трех продажных силикагелевых колонок (0,75 X 30 см) с матрицами типа Spherogel TSK SW фирмы Весктап

Если для данного, не слишком широкого интервала молекулярных масс можно выбирать из нескольких матриц, графики селективности которых перекрывают этот интервал, то предпочтительно выбрать ту из них, для которой интервал Kav будет лежать ближе к пределу исключения (область малых значений /Tav)- Фракционирование займет меньше времени, а разрешение пиков от этого выиграет кроме того, улучшатся условия для сохранения биологической активности. Ультрогели серии АсА, а также сефадексы и биогели серии Р средней и крупной пористости могут в этом плане оказаться наиболее подходящими матрицами, так как пределы исключения для них ниже, чем у других сефадексов и гелей агарозы. [c.134]

Гель-фпльтрацию широко используют для определения молекулярных масс биополимеров, особенно белков. Чем меньше белок, тем больше объем элюции его с колонки (Fr) это, как мы видели,— основной закон гель-фильтрации. Графики селективности ясно указывают иа наличие линейной связи между логарифмом молекулярной массы белка (log М) и величиной Ка (или К ) в определенном интервале значений М для каждого типа геля. Казалось бы, задача этим решается. Достаточно определить в эксперименте значение для данного белка — и с помощью фирменного графика селективности можно будет найти log М, а следовательно, и М. Если довольствоваться весьма приближенным результатом, то можно так и поступить. Однако при более пристальном изучении этой проблемы с целью получить относптельно точные значения М она оказывается значительно слояшее. Прежде всего, фирменные графики селективности носят ориентировочный характер, и для разных партий одного и того же геля истинные зависимости log М от Кдч отличаются друг от друга. Это можно обойти, если построить самому такой график (калибровочную прямую) с помошью набора белков известной массы. Но тут-то и возникает главная трудность. Какие белки выбрать для такого построения Ответа на этот вопрос поищем сначала для случая нативньсх белков. [c.145]

ОТ 2900 до 76 ООО. С их помощью строили градуировочную кривую (график селективности) для колонки биогеля А-5т (1,5 х 85 см) при скорости элюции 3 мл/см -ч. Объем препарата — 0,15 мл (0,1% Vt). В одно разделение пускали 4-5 белков, по 10 мг каждого. Для определения Vg ж Vt к белкам добавляли голубой декстран до 0,6% и ДНФ-аланин до 0,1% (или С-глпцин). На рис. 78 показана полученная авторами зависимость. В диапазоне 7000—40 ООО Дальтон она оказалась практически линейной. [c.153]

Строим график Ni — РуХу, откладывая найденные экспериментально мольные доли всех веществ против вычисленных значений РуХу (рис. 94). Для построения графика селективности по моиохлорпроизводному вычисляем Фв НСН2С1/ Д И откладываем эти данные против РуХу на том же рисунке. В данном случав [c.375]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология