Хроматографическая колонка от скорости элюции

Рис. 1.10. Зависимость времени (t, в с-10-3) хроматографического анализа трудноразделяемой смеси (Д /А = 0,03) от скорости элюции (I/, в см/с) (сплошные линии) и зависимость скорости элю-цпи от давления (ДР, в Па- Ю ) на входе в колонку (D = 10 9 м с, R = 4-10 )

Скорость элюции, используемая в ионнообменной хроматографии на колонках низкого давления, варьирует в широких пределах от 50—100 мл/см -ч при фракционировании аминокислот, нуклеотидов и других низкомолекулярных соединений до 2—5 мл/см -ч для крупных белков. Ее приходится подбирать эмпирически. Признаком существенного превышения оптимальной скорости элюции служит асимметрия хроматографических пиков — растягивание их заднего фронта. [c.294]

Приготовленная таким образом хроматографическая колонка (250 X 2,1 мм) с микросферическим силикагелем с диаметром пор 5—6 мкм позволяла полностью разделить ПС-стан-дарты с М = 2 10 , 5,1 10 и 4,1 10 за 45 с при давлении 10 МПа и скорости элюции 1 см /мин (рис. IV.17). [c.157]

В проведенном теоретическом рассмотрении было сделано предположение, что исходная зона имеет очень малую (точнее, бесконечно малую) ширину. На самом деле это не так начальная зона имеет форму прямоугольника, который, очевидно, не может скачком превратиться в колоколообразную кривую распределения Гаусса. Вначале расширение зоны идет за счет размывания ее переднего и заднего фронтов (рис. 8). Можно доказать, что профиль каждого фронта может быть описан соответствующей половиной кривой Гаусса. Практически в большинстве случаев аналитического фракционирования хроматографические пики за время прохождения по колонке, расплываясь, успевают принять колоколообразную форму распределения Гаусса, поэтому сделанные выше качественные выводы относительно выбора скорости элюции и диаметра гранул сохраняют свою силу и для реального хроматографического процесса. [c.31]

Через колонку с исследуемым сорбентом элюируют раствор полимера, надежно охарактеризованного по размерам макромолекул (это — так называемые полимерные стандарты). При этом систему полимер — сорбент-растворитель подбирают таким образом, чтобы полностью исключить какое-либо адсорбционное взаимодействие элюируемых макромолекул с матрицей сорбента. Подбором размера зерен сорбента и скорости элюции хроматографический режим можно сделать равновесным. [c.229]

Рассматривая величины Т]. р. Кй, Ур, Уо, входящие в уравне- ние (111.66), как постоянные параметры, и варьируя значения Р, (1р, Ь ТА связанную с ними скорость элюции [/, можно найти такую их комбинацию, которая приведет либо к минимальному времени анализа, либо к минимальной длине хроматографических колонок. [c.133]

При заданном числе теоретических тарелок N длина хроматографической колонки Ь и время необходимое для анализа, являются различными функциями скорости элюции в зависимости от того, меняется ли она вследствие вариации давления Р на входе в колонку (рис. П1.33 —111.36) или размера зерен сорбента р. [c.133]

Выбрав систему разделительных колонок, можно повысить разрешение, уменьшая скорость элюции (см. рис. IV.2), а также подобрать чувствительность детектирования так, чтобы максимальная высота пика составляла 50—70% шкалы регистрирующего прибора. При скоростной хроматографии с использованием л-стирогелЯ или микросферических силикагелей время ГПХ-анализа полимера, включая пробный анализ, оптимизацию и окончательный анализ, занимает не более 1,5 ч. Очевидно, что для быстрого проведения анализа необходимо располагать калибровочными зависимостями для всех используемых в анализе хроматографических колонок и систем колонок. [c.149]

Обессоливание и смена буфера с помощью гель-фильтрации широко используются в ходе очистки белков и пептидов для освобождения от сульфата аммония или в качестве промежуточной операции, подготавливающей препарат к последующему этапу хроматографии (ионообменной, аффинной или других видов). Если объем раствора белка изл еряется миллилитрами, то рутинную операцию его очистки нередко ведут вслепую . Однажды откалибровав небольшую колонку с сефадексом С-25, последующий отбор фракций, содержащих высокомолекулярные компоненты, производят по объему элюата, нередко просто путем отсчета капель. Соотношение объемов исходного раствора и колонки в этом случае может составлять примерно 1 10. В препаративных вариантах обессоливания, когда желательно максимально использовать объем колонки и избежать разбавления препарата, 5то соотношение можио увеличить до 1 3, контролируя выход хроматографических зон по УсГ-поглощению. Скорость элюции в таких опытах может быть значительной, порядка 20мл/см -ч (скорость продвижения фронта зоны очищаемого вещества по колонке — 20 см/ч). [c.137]

Рис. IV.25. Изменение вида хроматограммы полиамидокислоты ПМ при введении в растворитель (ДМФА) небольших добавок соляной кислоты (хроматографическая система из 4-х колонок с макропористыми стеклами с диаметром нор 320 и 50 нм скорость элюции 70 смз/ч)

Количественной характеристикой поведения компонента в хроматографической системе может служить время пребывания его в системе от момента начала элюции до момента выхода из колонки, называемое временем удерживания. Эта величина для некоторого вещества зависит как от химической природы используемой системы, так и от размеров колонки и скорости тока элюента. В то же время в стандартизированных условиях оно является количественной характеристикой компонента и может использоваться для его обнаружения в анализируемой смеси. [c.342]

Но за время очевидно, пз колонки выходит вся жидкость, которая исходно находилась между гранулами, т. е. свободный ( мертвый ) объем колонки У . Далее при иеизменной скорости элюции и к моменту д, когда хроматографическая зона достигнет конца колонки, из последней успеет выйти объем жидкости Уд, который можно назвать объелюм элюцииь зоны. Из соотноитения (8) следует, что и объем элюции будет в (1 + А) раз больше, чем свободный объем [c.28]

Различие степени доступности объема неподвижной фазы для молекул различных компонентов исходной смеси веществ является фактором, определяющим возможность их фракционирования. Очевидно, что оно будет происходить по размерам молекул. Если в составе смеси имеются очень крупные молекулы, вовсе не проникающие внутрь гранул, то они будут выходить из колонки или достигать края хроматографической пластины вместе с передним фронтом подвижной фазы ( фронтом элюции ). В то же время мелкие молекулы, свободно диффундирующие внутрь гранул, часть времени будут находиться в неподвижной фазе. Статистически эта часть времени одинакова для всех молекул такого размера и зависит от соотношения объемов жидкости в неподвижной и подвижной фазах. Таким образом, все мелкие молекулы достигнут конца хроматографического пути более или менее одновременно и заведомо позднее, чем крупные. Молекулы промежуточных размеров, для которых из-за разброса значений эффективных диаметров пор внутри гранул неподвижной фазы доступна только часть ее объема, должны, очевидно, перемещаться вдоль колонки или пластины с промежуточной скоростью. [c.7]

Все описанные выше варианты хроматографических методов доступны и для техники ВЖХ. Эта техника получила название высокоэффективная благодаря достигнутым высоким скоростям и хорошему разрешению разделений. Данные преимущества обусловлены высоким числом теоретических тарелок М), характерным для ВЖХ-колонок. Величина М характеризует ширину пика, которую можно получить при элюции с колонки модельного вещества. Очевидно, N определяет разрешение, ко- [c.135]

В большинстве случаев перед хроматографическим процессом стоит задача надежного разделенпя двух илп более заранее известных компонентов исходной смеси. Еслп хроматографическая система j e определена, то в распоряжении экспериментатора етце остается возможность выбора целого ряда физических параметров процесса с целью оптимизации условий разрешения зон (пиков) в этой снстеме. Краткое знакомство с основами теории хроматографии имело целью дать обоснования для такого выбора. Теперь можно подвести итоги. Последовательно рассмотрим следующий ряд параметров геометрия колонки, размер гранул, набивка колонки, скорость элюции, физические свойства элюента (вязкость, температура) и, наконец, загрузка колонки. Рассмотрение будем вести с позиции улучшенпя разрешения и одновременно уменьшения продолжительности хроматографического процесса. Но сначала надо привести еще одну зависимость — скорости ЭоЛюции и от разности давлений иа входе и выходе колонкп Д/ ( перепад давления ) и от размера гранул. Ее описывает уравнение Дарси [c.36]

Погрешности ДЛ/у1МЛМ 1 М и АМд /М при1суш и самому методу ГПХ и качеству интерпретации его данных. Они существенно зависят от эффективности используемой хроматографической системы, уменьшаясь вместе с ее ростом, т. е . с увеличением угла наклона калибровочной зависимости С , уменьшением площади поперечных сечений колонок,скорости элюции и дисперсии, что связано, в частности, с более высоким качеством упаковки хроматографических колонок. [c.228]

Каждая отдельная дисперсия вносит свой вклад в суммарную дисперсию, т. е. в расширение хроматографической зоны. Приведенные выражения позволяют понять характер влияния выбора параметров хроматографического процесса на ширину зоны, т. е. содержат в себе очень важную практическую информацию. Наг рпмер, легко видеть, что с увеличением диаметра гранул зона расширяется как за счет неоднородности тока жидкости, так и особенно за счет неравновесности распределения молекул вещества по объемам подвижной и неподвижной фаз. Эта неравновесность будет сказываться тем меньше, чем больше значения коэффициентов диффузии и Оа, т. е. чем легче диффундирует вещество. С другой стороны, облегчение диффузии (увеличение и О ) влечет за собой раси]и-рение зоны за счет продольной диффузии (особенно в подвижной фазе). Скорость элюции и) также влияет двояким образом. С ее увеличением вклад продольной диффузии в расширение зоны умень-шается, зато сильнее сказываются все неравновесности распределения. Наконец, все факторы без исключения увеличивают дисперсию зоны пропорционально длине колонки L. Отсюда следует, что движение хроматографической зоны вдоль колонки в неидеальных условиях связано с непрерывным расширением зоны. Это должно нас насторожить в отношении целесообразности увеличения длины колонки. [c.29]

Из формулы (21) следует, что улучшать разрешение эффективнее не за счет длины колонки, а за счет выбора хроматографической системы, обеспечивающей более выраженное различие сродства двух веществ к неподвижной фазе. Следует подчеркнуть, что если хроматографическая система разделения близких зон отработана на малой колонке, то при переносе ее на колонку большего размера следует увеличивать объем только за счет ее диаметра, оставив подобранную длину колонкп неизменной. Скорость элюции (мл/ч) следует повысить ироиорционально увеличению площади сечентш колонки, с тем чтобы линейная скорость течения подвижной фазы (илп, что то же самое, расход элюента в расчете на 1 см площади сечепия колонки) оставалась неизменной. [c.35]

Длина колонок, заполненных мелкозернистыми обменниками типа Aminex , и колонок высокого давлеиия не превышает 40 см, а обычные их размеры лежат в пределах 15 — 25 см. Как уже указывалось, объем колонкп определяется при изократической элюции объемом исходного препарата (соотношение объемов — от 1 100 до 1 20), а при градиентной — соотношением количества веш ества и эффективной емкости колонки (загрузка па 5 — 10%). По выбранным длине и объему колонки подсчитывают ее диаметр. Однако в интересах обеспечения хорошей формы хроматографических зон отношение диаметра колонки к ее длине не должно превышать определенного предела. Для непрерывного градиента оно не должно быть больше 1 5, для изократической элюции — 1 20, в аналитических опытах — порядка 1 50, а в особо тонких случаях разделения это отношение снижают до 1 100 и даже 1 200. Здесь уместно напомнить обоснованное в гл. 1 правило при перепесонии условий хроматографического процесса, отработанных на маленькой колонке, на большую по объему (препаративную) колонку длина ее должна остаться без изменений (как и скорость элюции в расчете на 1 см сечения). Плош адь колонки увеличивают пропорционально повышению количества препарата, а расход элюента (мл/г) — пропорционально площади. Эту ситуацию можно себе представить как слияние нескольких аналитических колонок, работающих параллельно. [c.294]

При необходимости время задержки испытуемого вещества можно изменить, изменяя соотношение растворителей в подвижной фазе. Вообще, увеличение относительного количества более полярного растворителя приводит к укорочению времени задержки на колонке с нормальной фазой (например, колонка из силикагеля) и к удлинению времени задержки на колонке с обращенной фазой (фаза, химически связанная с октадецилсиланом). Для улучшения хроматограммы можно изменять и другие хроматографические параметры, такие как скорость элюции, длина колонки, pH, ионная сила и температура. [c.422]

Рис. 1.8. Зависимость времени хроматографического анализа (I, в легкоразделяемой смеси (ДЛГ/ЛГ = 0,1) от скорости элюции (и, (сплошные линии) и зависимость скорости элюции от давления (Ь.Р, на входе в колонку (пунктирные линии) (Д=10 9м7с Rf =

Однако такой подход не дает полной картины хроматографического процесса изомеризующихся систем и требует проведения длительных экспериментов с малыми скоростями элюции и достаточно длинными хроматографическими колонками. В то же время, как было показано в гл. I, исчерпывающие сведения о хроматографическом поведении элюируемых молекул могут быть получены в результате анализа выражений для статистических моментов, найденных для системы дифференциальных уравнений, описывающих хроматографический процесс. В частности, для системы уравнений (IV.30) с условиями (IV.33, IV.34) можно получить точные аналитические выражения для статистических моментов, характеризующие распределение вещества вдоль хроматографической колонки в любой фиксированный момент времени независимо от длительности эксперимента. Они получаются применением к уравнениям системы (IV.30) интегральных преобразований [95] [c.172]

В стеклянной трубке диаметром 1.5 см готовят хроматографическую колонку из 8 г окиси алюминия жидкой фазой является петролейный эфир. Сверху помещают слой приблизительно 5 мм высоты сернокислого натрия и добавляют его к петролейному раствору, если последний соде ржит капельки воды. Переносят экстракт на колонку и ведут элюцию 100 мл петролейного эфира со скоростью не более 2 мл в минуту. Собирают элюат в коническую колбу (объемом 150 мл), соединенную с дистилляционным сосудом на шлифе. [c.56]

Таким образом, мы приходим к важному заключению о том, что хроматографическая зона мигрирует вдоль колонки со скоростью, в (1 -f К) раз меньшей, че.м скорость элюцпи. Выше было показано качественно, что с увеличением К движение зоны замедляется, а на частных примерах даже обнаружилось, что оно замедляется в (1 + -Ь К) раз по сравнению со скоростью движения фронта элюента. Оказывается, что это соотношение можно получить строго для реальных условий хроматографии. Отношение скоростей дгиграць и зоны и элюции обозначают символом R и называют факторам задержки (чем меньше R, тем сильнее выражена задержка) [c.27]

Однако ситуация коренным образом меняется, если компоненты исходной смеси разбиваются на группы, существенно различаю-пцгеся между собой по степени, сродства к неподвижной фазе (А), а следовательно, п по скорости миграции. Очевидно, что такие ком- поненты будут выходпть пз колонки соответствующими группами, разделенными значительными объемами пустого элюента. Это пе-оправданно затягивает хроматографический процесс и ведет к ухудшению разрешения внутри позади идущих групп в результате диффузии. Но этим не исчерпываются неблагоприятные последствия описываемой ситуации. Очевидно, что она не позволяет выбрать состав элюента п другие параметры элюции такнм образом, чтобы они оказались оптимальными для различных групп кодшонентов, как это видно из рис, 12. В случае А условия элюцпи оптимальны для комиоиентов группы 2, и они хорошо разрешаются, но для компонентов группы 1 элюент оказывается слишком сильным среднее для этой группы значение К будет мало, Я —- соответственно велико, а разрешение Я, согласно (21), окажется малым. Компоненты группы 1 покинут колонку, не успев отделиться друг от друга. В случае В условия элюции оптимальны для группы 1, зато компоненты группы 2 будут выходить замедленно, в виде очень расплывшихся пиков их разрешение тоже окажется неудовлетворительным. [c.41]

Начнем с вопроса о длине колонки. В гл. 1 было показано, что в случае изократической элюции разрешение пиков улучшается с увеличением длины колонки. Для градиентной элюции это не совсем так. Хроматографические зоны продвигаются по колонке намного медленнее, чем течет элюент. В случае градиентной элюции в какой-то момент времени ушедшую вперед зону может догнать концентрация соли, отвечающая практически полной десорбции мигрирующего в ней вещества. С этого момента такая зона будет двигаться вместе с элюентом. Когда это произойдете последней, исходно наиболее прочно сорбированной зоной, все зоны, еще остающиеся в колонке, будут продвигаться с одинаковой скоростью, не расходясь, а даже сближаясь друг с другом за счет продольной диффузии веществ. Поэтому градиентную элюцию чаще всего ведут па срав- [c.293]

Но именно с такой скоростью двигалась бы хроматографическая зона, если бы процесс был равновесным, без влияния каких-либо кинетических факторов. Таким образом, равновесная теория, изложенная в 2 настоящей главы, оказывается достаточной для предсказания движения центра хроматографической зоны. Из (4. 78), как и из равновесной теории, следует, что зоны различных компонентов элюируемой смеси будут появляться на выходе из колонки в разные моменты времени, если индивидуа.пьные сорбционные константы к этих компонентов различаются по величине. Однако равновесная теория не в состоянии описать процесс размывания сорбционных зон в ходе элюции в равновесных условиях каждая зона двигалась бы, сохраняя свою первоначальную форму, и концентрация любого из компонентов на выходе из колонки оставалась бы равной исходной концентрации с , в то время как в действительности всегда меньше этой величины. Значение можно найти, если подставить условие (4. 76) [c.323]

Смотреть страницы где упоминается термин Хроматографическая колонка от скорости элюции: [c.40] [c.132] [c.135] [c.161] [c.162] [c.293] [c.49] [c.99] [c.160] [c.161] [c.127] [c.27] [c.33] [c.34] [c.37] [c.138] [c.176] [c.200] [c.203] [c.199]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология