Белки динитрофенилирование

В основе метода динитрофенилирования лежит реакция свободных ЫНг-групп белка или пептида с 2,4-динитрофторбензолом (ДНФБ) в щелочной среде, при которой образуются соответствующие динитрофенильные производные (ДНФ-производные). В реакцию с ДНФБ, кроме свободных а-ЫНг-групп, вступают также е-ННг-группа лизина, 5Н-группа цистеина, ОН-группы оксиаминокислот и имидазольный гетероцикл гистидина. ДНФ-производное белка или пептида подвергают полному кислотному гидролизу. Ы-концевые ДНФ-амино-кислоты экстрагируют из гидролизатов эфиром, отделяя их от свободных аминокислот и ДНФ-производных по другим функциональным группам аминокислот, которые растворимы в воде. Идентификацию [c.145]

Ряд методов определения Ы-концевых аминокислот основан на алкилировании или ацилировании пептида и последующем гидролизе. В гидролизате концевая аминокислота обнаруживается в виде алкильного или ацильного производного. Наиболее важным и детально разработанным методом является метод динитрофенилирования белка, предложенный в 1945 г. Зангером и использованный им при установлении строения инсулина. [c.510]

В другой работе [167], посвященной исследованию лизоцима, в котором ацильная группа мигрирует от N к О, сообщается, что после взаимодействия белка с ДНФБ при pH 5 в течение 8 час не было обнаружено ни ДНФ-серина, ни ДНФ-треонина. Однако при разрыве О-пептидильной связи можно получить ожидаемые результаты, используя периодат-ный метод определения концевых оксиаминокислотных остатков [97] или динитрофенилирование [247]. [c.221]

Несколько неожиданным является то, что ацетилирование или формилирование при pH 5 дает гораздо лучшие результаты, чем динитрофенилирование. Этот вывод основан на косвенных данных, так как ацетилсерин не может быть выделен, так как он, подобно ДНФ-серину, легко гидролизуется. Кроме того, белок, содержащий ДНФ-сериновый остаток, вследствие неу етойчивости ДНФ-групп [96] не удалось расщепить разбавленной щелочью подобно тому, как расщепляется белок, содержащий ацетилсериновую группу. Расхождение данных могло быть вызвано увеличением степени разложения ДНФ-серина при гидролизе, как это наблюдалось в случае других белков [42, 119]. [c.221]

Динитрофенилированием или дансилированием водной фазы после встряхивания с бензальдегидом можно определить С-концевую аминокислоту в виде соответствующего ДНФ- или ДНС-производного. Этот метод особенно удобен для белков, когда концентрация свободных аминокислот в водной фазе весьма мала. [c.291]

Штейерле и Хилле [632, 643] разделяли на колонке с нейлоновым порошком гидролизаты динитрофенилированных белков шерсти и определяли концентрацию каждой ДНФ-аминокислоты в элюате фотометрически при 366 нм. Их метод был использован и другими авторами [284, 285] также для изучения аминокислотного состава различных видов шерсти. [c.122]

По более усовершенствованной методике отщепившиеся аминокислоты превращают путем динитрофенилирования в соответствующие ДНФ-производные, а гидразиды аминокислот — в ди-ДНФ-производные. Например, 1 мкмоль белка гидролизуют примерно с 1 г безводного гидразина (99—100%) при 100° в течение [c.191]

В дальнейших исследованиях Сенгер разработал, а впоследствии довел до полного совершенства, метод, позволивший определять последовательность аминокислотных остатков в полипетидных цепях. При этом он исходил из следующих, сформулированных им на симпозиуме по аминокислотам и белкам в Колд Спринг Харборе в 1949 г. положений Методом динитрофенилирования можно определить природу концевых групп путем идентификации ДНФ-аминокислот (динитрофенил-амино-кислот.—Л. Ш.), полученных при гидролизе ДНФ-белка. Однако, если гидролизовать ДНФ-белок лишь частично, можно получить ДНФ-пептиды, исследование строения которых дает указания относительно природы аминокислот, расположенных в пептидных цепях вблизи концевых групп. ДНФ-пептиды довольно хорошо поддаются отделению от незамещенных пептидов и аминокислот путем экстракции органическим растворителем из подкисленного раствора и хроматографическим фракционированием на силикагеле. Смеси ДНФ-пептидов, полученные этим способом, гораздо менее сложны, чем продукты частичного гидролиза необработанного белка, так как отделяются только пептиды, содержащие М-концевые группы исходного белка. Для дальнейшего упрощения анализа последовательности аминокислот вместо инсулина были взяты очищенные фракции А и В, образующиеся при его окислении и содержащие только по одной концевой группе [37]. [c.133]

После получения из целой молекулы ринобуклеазы 23 пептидов относительно небольшого размера Мур, Хирс и Стейн приступили к решению, как они выразились, более легкой задачи , выяснению последовательности аминокислотных остатков в этих относительно небольших пептидах. Они пользовались уже достаточно хорошо разработанными химическими и ферментативными методами а) динитрофенилированием, по Ф. Сенгеру, для определения М-концевых аминокислотных остатков, б) гидрази-нолизом, по И. Акабори, в модификации Г. Браунитцера и Г. Шрамма [111] и в) фенилизотиоцианатным методом П. Эд-мана [149]. Внедрение последнего метода сыграло весьма важную роль в переходе аналитической химии белков на новый очень высокий методический уровень. [c.137]

П 96. Динитрофенилирование белков без денатурирования [c.779]

Полученные результаты указывают на присутствие приблизительно половины цистинового остатка на 11 аминокислот. То же самое соотношение было найдено Дейчем и Мортоном [31] при определении цистина непосредственно в виде более стабильной цистеиновой кислоты или в виде S-карбо-ксиметилцистеиновых производных. Поскольку свободные сульфгидрильные группы не обнаружены [5], молекула должна иметь около 8 дисульфидных мостиков на моль (28 800 г). Цистин и метионин фактически содержат всю серу белка (2,2% [5]). Количество лизина находится в полном соответствии с содержанием, найденным при гидролизе полностью динитрофенилированного гликопротеина [32]. Содержание триптофана обычно значительно меньше одного моля на 28 800 г белка, определенного как химически, так и спектрофотометрически [5, 28, 12], однако в литературе не было данных о получении препаратов, не содержащих триптофана. Содержание тирозина в различных [c.28]

В некотором отношении поведение овомукоида не является обычным для простого глобулярного белка с молекулярным весом 28 ООО, но присутствие в молекуле 25% углеводов усложняет любое сравнение с чистыми белками. Так, судя по величине константы диффузии, по поведению при фильтровании па геле сефадекса Г-100 [54] и времени прохождения через мембрану при диализе [55], молекула овомукоида занимает, по-видимому, до некоторой степени больший объем, чем типичный белок того же молекулярного веса. Эти факты вместе с ярко выраженной устойчивостью овомукоида к преципитации (даже полностью динитрофенилированное производное овомукоида растворимо в воде [15, 32]) могут навести на мысль о высокой гидратации молекулы. [c.33]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология