Фракционирование пептидов

Bio-Rex 70 (фирма Bio-Rad ) — крупнопористый слабый катионообменник на основе немодифицированного полиакрилата, предназначенный для фракционирования пептидов и небольших белков. Гидрофильный катионит, поэтому не опасен в отношении денатурации белка. М скл = 75 ООО. Имеет высокую емкость — около 3,3 мэкв/мл. [c.270]

Для фракционирования пептидов используют различные методы колоночной хроматографии и ТСХ. Ранее мы уже знакомились с разделением пептидов гель-фильтрацией и обратнофазовой гидрофобной хроматографией. Нередко, если пептидов много, хроматографические методы следуют один за другим. Например, сначала пептиды разделяют на группы по размерам гель-фильтрацией, а затем следует ХОФ или ионообменная хроматография. [c.299]

Область применения. Фракционирование пептидов при биохимических исследованиях. [c.196]

Область применения. Препаративное фракционирование пептидов, микроструктурный анализ белков и полипептидов. [c.199]

В. Фракционирование пептидов на сильных ионитах [c.403]

Фракционирование пептидов на смоле дауэкс 50-Х2 [c.404]

Фракционирование пептидов на фосфоцеллюлозе [c.411]

Уже упоминалось, что высокоэффективная жидкостная хроматография при высоком дав.лении (ЖХВД) по.лучила очень широкое распространение главным образом в качестве экспресс-метода технологического контроля производства низкомолекулярпых природных (и неприродных) соединений. В исследованиях белков и нуклеиновых кислот ЖХВД играет пока бо.лее скромную, но заметную роль (фракционирование пептидов, идентификация аминокислот прц секвеннровании белков и др.). Далее мы увидим, что для исследо- [c.91]

Несмотря на то что в течение длительного времени хроматография на бумаге оставалась наиболее распространенным методом фракционирования пептидов, известны лишь немногочисленные попытки перенести накопленный опыт в область колоночной хроматографии. По-видимому, это объясняется отсутствием подходящих носителей неподвижной фазы. В настоящее время в качестве таких материалов используют пористые гели и порошкообразную целлюлозу. Преимущество этих материалов состоит в том, что системы растворителей для разделения исследуемой смеси пептидов можно легко подобрать при помощи хроматографии на бумаге. Наиболее подходящими считают такие системы, в которых пептиды имеют разные значения Rf, но в области 0,5. [c.417]

В хроматографии пептидов пока еще нет универсального приема, как например в хроматографии аминокислот, позволяющего разделять любые смеси. Дело в том, что при фракционировании пептидов помимо трудностей, присущих хроматографии аминокислот, возникают дополнительные затруднения, связанные, во-первых, с размером молекул и, во-вторых, с близостью физико-химических свойств разделяемых компонентов. [c.181]

Фракционирование пептидов Препаративная хроматография с применением летучих буферных растворов Отделение пептидов и аминокислот от мочевины Автоматический колоночный анализ Обессоливание пептидов [c.316]

Решающим критерием наличия одного лишь вида белковых молекул является доказательство однозначной последовательности аминокислот в пептидных цепях. Поэтому большая часть книги посвящена описанию методов определения последовательности аминокислот, избирательного расщепления пептидных цепей, фракционирования пептидов, анализа аминокислот и других приемов. [c.7]

В другом варианте обратнофазовой гидрофобной хроматографии плазмы крови на колонке Li hrosorb RP-8 элюцию вели в среде, подкисленной до рП 3 монохлоруксусной кислотой, используя выпуклый градиент концентрации ацетонитрила (0—45%) в смеси с 0,05 М раствором ДДС-Na (1,4%о). Последний, по-видимому, блокирует заряды аминогрупп и обеспечивает гидрофобность аминокислот, т. е. играет роль ион-парного агента, как подробнее описано ниже для случая фракционирования пептидов. [c.194]

Недавно элюцию ацетонитрплом использовали для фракционирования пептидов на j,-Bondapak- i8 (тоже в течение часа) тремя последовательными линейными градиентами концентрации [c.201]

В заключение отметим вариант двумерного фракционирования нентидов комбинацией колоночной (в данном случае — ионообменной) хроматографии и ТСХ фракций с колонки на пластинках силикагеля [Aromatorio et al., 1980]. Это — частный пример из широкой области использования ТСХ как дополнительного инструмента для анализа результатов фракционирования пептидов различными рассмотренными ранее методами колоночной хроматографии, в том числе и ЖХВД. [c.490]

В. ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ ПЕПТИДОВ НА КОЛОНКЕ С ДАУЭКСОМ 50X2 В НЕЛЕТУЧИХ БУФЕРНЫХ РАСТВОРАХ [c.197]

Рис. 34.11. Фракционирование пептидов триптического гидролизата к-типа белка Бенс-Джонса Ад на амберлите ШС-50 в пиридинацетатном буфере [34].

Фракционирование пептидов на сульфоэтил-сефадексе (8Е-сефадекс) [c.414]

Слабосшитые и МП карбоксильные катиониты применяют для очистки и фракционирования пептидов, белков, ферментов, антибиотиков и других высокомолекулярных оснований. Смолу Bio-Rex 70 в u-, Ni- или d-форме применяли для разделения амфетаминов методом лигандной хроматографии (de Hernandez С. М., W а 1 t о п Н. F., Anal. hem., 1972, v. 44, No. 6, p. 890—894). [c.106]

Колоночная хроматография на иопообмеиных смолах применяется также и для фракционирования пептидов. После первых относительно малоуспешных работ по разделению пептидов на смоле Дауэкс 50X8 стали использовать для этих целей менее сшитую смолу Дауэкс 50X2, пористость которой лучше соответствовала размерам молекул пептидов. На этой смоле был проведен ряд успешных работ Хирса, Мура и Штейна [36, 37] по разделению ферментативных гидролизатов окисленной рибонуклеазы. Однако общим недостатком этих работ являлось использование солевых буферных растворов, что приводило к необходимости их последующего удаления из элюатов. Последнее осуществлялось или путем динитрофенилирования и экстракции полученных ДНФ-производных пептидов с помощью органических растворителей [38], или путем использования в качестве буферов растворов ацетата или формиата аммония, которые удалялись сублимированием или заменой натрия в элюатах на аммоний путем ионного обмена на сильно сшитой смоле в аммониевой форме с последующим удалением аммониевых солей путем сублимации [39]. [c.169]

Фракционирование пептидов на ионообменных смолах основано на целом ряде принципов, о которых уже говорилось выше (гл. I и II). Сюда входят и различия в электрохимических свойствах разделяемых фрагментов, и различное сродство неполярных радикалов к бензольным кольцам матрицы смолы, и изменение концентрации конкурирующих ионов в буферном растворе. Поэтому элюция пептидов со смолы достигается путем пропускания через колонку буферных растворов изменяющейся ионной силы и pH. Это изменение концентрации ионов и pH может осуществляться линейно или ступенчато. Элюируемые компоненты идентифицируют нингидриновой колориметрией, лиофилизуют (высушивают из замороженного состояния) и проверяют на гомогенность с помощью хроматографии на бумаге и методом пептидных карт. Негомогенные пики фракционируют дополнительно. В качестве примера можно привести разделение пептидов, полученных триптическим гидролизом окисленной (т. е. лишенной дисульфидных мостиков) рибонуклеазы (рис. 11). [c.84]

Хроматографию на анионитах для фракционирования пептидов стали применять сравнительно недавно. Рудлоф н Брауницер [35] описали метод, при котором в качестве набивки используется [c.88]

При фракционировании пептидов из окисленной рибонуклеазы (27—29] для элюирования были использованы те же растворы, что и для хроматографии аминокислот они содержали ВЯ1Л-35, но не содержали тиодигликоля. Жидкость, вытекающая из колонки диаметром 1 и 2 см, собирали фракциями соответственно по 2 и 10 мл из каждой фракции отбирали определенную часть для анализа нингидриновым методом. После щелочного гидролиза белка проводили анализы для предварительной характеристики размеров элюируемых пептидов, а также для того, чтобы убедиться, что не [c.89]