Биоспецифическая хроматография

На заключительных этапах очистки часто используют аффинную хроматографию (биоспецифическая хроматография, хроматография по сродству), которая основана на способности ферментов избирательно связывать те или иные лиганды — субстраты. [c.80]

В 1968 г. был предложен высокоэффективный метод очистки белков -аффинная хроматография, или биоспецифическая хроматография по сродству, которая особенно часто используется при выделении и очистке ферментов. [c.24]

Как и во всякой новой области, терминология в аффинной хроматографии еще четко не определилась. Это касается даже самого названия метода. В литературе наряду с термином аффинная хроматография часто встречается термин биоспецифическая хроматография . Тем более отсутствует согласование в других [c.5]

Принцип биоспецифической хроматографии известен уже более 20 лет. Кэмпбелл с сотр. [150] впервые использовал его еще в 1951 г. [c.249]

В настоящее время биоспецифическая хроматография применяется в основном для препаративного выделения или очистки [c.249]

Наиболее удобно проводить биоспецифическую хроматографию в том случае, когда ингибитор, избирательно извлекающий данный фермент, фиксируют, т. е. иммобилизуют, ковалентной химической связью [154] или адсорбционно [155] на нерастворимом и заметно не набухающем адсорбенте-носителе. Чаще всего используется вариант с ковалентной фиксацией фермента-лиганда на адсорбенте-носителе. [c.250]

Биоспецифическая хроматография выдвигает ряд специальных требований к этим адсорбентам-носителям. Основное требование — это обеспечение специфичности сорбции фермента данного вида. Иммобилизованный фермент биоспецифического сорбента должен обладать избирательностью действия, т. е. связывать только один определенный фермент. Адсорбент-носитель должен иметь на своей [c.250]

Получение сорбента для биоспецифической хроматографии требует правильного выбора фермента-лиганда, адсорбента-носителя и способа присоединения этого фермента-лиганда к адсорбенту-носи-телю, т. е. способа иммобилизации. При присоединении фермента-лиганда к адсорбенту-носителю не должно создаваться стерических препятствий для взаимодействия молекулы фермента-субстрата с активными участками фермента-лиганда. Поэтому необходимо обеспечивать не только доступность поверхностных функциональных групп для привязки фермеита-лиганда, но и достаточную подвижность привязанного лиганда. Для этого лиганд часто присоединяют к адсорбенту-носителю посредством промежуточной молекулярной пени соответствующей длины, выполняющей роль вставки , или ножки , удаляющей лиганд от поверхности адсорбента. Для обеспечения подвижности лиганда в растворе эта вставка должна обладать достаточной конформационной подвижностью, т. е. некоторым числом свободно вращающихся звеньев. [c.251]

Макропористые неорганические и жесткие органические адсор-бенты-носители для иммобилизации ферментов, как биокатализаторов, и для биоспецифической хроматографии описаны в обзоре [162]. [c.251]

ХРОМАТОГРАФИЯ ПО СРОДСТВУ (БИОСПЕЦИФИЧЕСКАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ) [c.215]

Биоспецифическая хроматография применяется для очистки ферментов, так как она позволяв извлекать ферменты из сложных смесей в одну стадию с высокой степенью очистки и с большим выходом. В последнее время в качестве адсорбентов-носителей в биоспецифической хроматографии находят применение как макропористые неорганические адсорбенты (силикагели, силохромы, пористые стекла), так и макропористые органические сшитые сополимеры, например макропористые сополимеры глицидилме-такрилата с этилендиметакрилатом типа сферой (см. лекцию 6) со сферическими зернами разных размеров. Эти адсорбенты-носители обладают разной удельной поверхностью и крупными порами разных размеров. На рис. 18.10 представлен пример биоспецифической хроматографии химотрипсина на сфероне с иммобилизованным химической прививкой белком — ингибитором трипсина (являющегося также ингибитором химотрипсина). Из колонны, заполненной обычным макропористым сфероном без иммобилизованного ингибитора, химотрипсин выходит вместе с остальными белками, а из колонны, заполненной сфероном с привитым ингибитором, сопутствующие белки выходят приблизительно за то же время, а химотрипсин прочно удерживается. Это позволяет отделить [c.342]

Среди других методов биоспецифической хроматографии следует отметить способ аффинной хроматографии целлобиогидролаз I и II T.reesei, основанный на различном сродстве этих [c.126]

Главное действие некоторых гормонов направлено на плазматическую мембрану клеток-мишеней. Под термином рецептор обычно понимают компоненты плазматических мембран, которые вовлечены во взаимодействие с данным гормоном. Они, ио-види-MOiMy, локализованы исключительно на поверхности мембранных клеток. Для того чтобы выяснить действие гормонов на молекулярном уровне, необходимо очистить и идентифицировать эти специфические мембранные рецепторные структуры, количество которых в тканях очень мало по сравнению с другим присутствующим материалом. Например, концентрация рецептора глюкагона в мембранах клеток печени очень низка и составляет 2,6 пмоль в 1 мг белка [30]. При столь малых количествах взаимодействие с иммобилизованными гормонами должно быть очень эффективным, чтобы обеспечить прочное связывание крупных мембранных фрагментов. Взаимодействие гормонов с их комплементарными рецепторами специфично и характеризуется высоким сродством. Константа диссоциации для глюкагона равна 10 —10 ° моль/л, для инсулина—5-10 " моль/л, а для норэпи-нефрина—10 —10 моль/л [35]. Очень трудно выделять такие малые количества стандартными методами. Использование биоспецифической хроматографии а высокоэффективных иммобилизованных рецепторах позволяет избирательно концентрировать [c.122]

Однако -нитрофенильную группу удалось заместить только на L-фенилаланин-п-нитроанилид или -лейцин-п-нитроанилид. Амидные связи в боковой цепи, которые образуются за счет специфической -аминокислоты, могут быть разрушены с помош,ью химо-трипсина как in vivo, так и in vitro. Платэ и Валуев [136] описали синтез афинных адсорбентов для биоспецифической хроматографии. Химическими методами осуществляется иммобилизация полимерных носителей путем связывания специфических лигандов с матрицей. После активации бромцианом протеин может быть связан с имидокарбонильной группой [c.101]

Эти адсорбенты применяются в различных видах хроматографии. Гидроксильные группы этого пористого сополимера можно легка заменить на другие функциональные группы, которые могут послужить, в частности, сшивкой для иммобилизации ингибиторов ферментов в аффинной (биоспецифической) хроматографии [101—102а] (см. разд. 11.10). На схеме (г) приведены реакции, используемые для модифицирования поверхности этого полимера эти реакции применяют для связывания ингибитора в биоспецифической хроматографии [c.60]

Такой вид хроматографии ферментов часто называют аффинной хроматографией . В этом названии подчеркивается, что метод основан на сродстве (а1 1п11у) фермента субстрата соответствующему ферменту, иммобилизованному на адсорбенте. Однако все виды хроматографии основаны в той или иной мере на взаимодействии веществ с сорбентом, т. е. на сродстве между ними. Более точным, отражающим существо метода, является термин биоспецифическая хроматография . [c.249]

Биоспецифической хроматографии посвящен ряд обзоров [151 — 153]. Здесь мы приведем лищь примеры, поясняющие применение этого крайне важного и интересного в практическом и теоретическом отношении метода. [c.250]

В биоспецифической хроматографии широко использовались набухающие полимерные органические сорбенты-носители типа сефа-дексов [156], сефарозы [157] и биогелей [158]. Эти полимеры содержат гидроксильные группы, которые обеспечивают их гидрофильность [c.251]

Д. X. Кемпбел, Е. Люшер, Л. С. Лерман Формулирование принципов аффинной (биоспецифической) хроматографии [12]. Химической сшивкой белка и диазотиро-ванной п-аминобензилцеллюлозы осу- [c.8]

Особое место занимают методы жидкостной хроматографии, используемые для разделения и анализа высокомолекулярных соединений, синтетических и природных полимеров (эксклю-зионная, или гель-хроматография), очистки, селективного анализа белков ферментов (аффинная, или биоспецифическая, хроматография). [c.13]

Ниже описаны два метода выделения ТКСТИ. Один из них разработан на основе классических методов хроматографии в сочетании с экстракцией ингибитора 2,5% раствором трихлоруксусной кислоты, другой — на основе биоспецифической хроматографии в колонке с трипсином, ковалентно связанным с сефарозои 4Б. [c.192]

Выделение и очистка ТКСТИ из сыворотки крови кролика при помощи биоспецифической хроматографии на трипсин-сефарозе4Б [c.202]

Метод хроматографии по сродству продолжает бурно развиваться и его возможности далеко не. исчерпываются приведенными здесь примерами. Принцип биоспецифической хроматографии уже начали использовать для выделения таких сложных образований, как полирибо-сомные комплексы, функциональные Мембранные структуры и мультиферментные комплексы. [c.222]

Третий уровень селективности заключается в распознавании ФАП единичных типов клеток и в специфическом взаимодействии с ними. Процесс распознавания может иметь место на уровне клеточной мембраны, после чего ФАП либо действует на поверхности клетки, либо проникает в нее посредством одного из видов эндоцитоза. Для специфического распознавания полимер-носитель должен содержать лиганды ( векторы ), взаимодействующие с элементами поверхности клеток нужного вида. Сам процесс очень напоминает биоспецифическую хроматографию, осуществляемую in vivo. [c.51]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология