Хроматография биоспецифическая аффинная

На заключительных этапах очистки часто используют аффинную хроматографию (биоспецифическая хроматография, хроматография по сродству), которая основана на способности ферментов избирательно связывать те или иные лиганды — субстраты. [c.80]

В 1968 г. был предложен высокоэффективный метод очистки белков -аффинная хроматография, или биоспецифическая хроматография по сродству, которая особенно часто используется при выделении и очистке ферментов. [c.24]

В дальнейшем шиффовы основания могут быть восстановлены. Возможность внутреннего вращения в звеньях сшивки обеспечивает доступность реакционно-активной части фермента по отношению к субстрату, на который данный фермент воздействует в высокоизбирательных реакциях биокатализа или в упомянутой в разделе 5.1 биоспецифической (аффинной) хроматографии ферментов. [c.109]

Ковалентное присоединение белка или пептида к полимеру с целью получения так называемых иммобилизованных препаратов (например, иммобилизованных ферментов) или создания высокоселективных носителей для биоспецифической (аффинной) хроматографии. [c.160]

Теории межмолекулярных сил рассмотрены в предыдущей книге этой серии [1]. Здесь мы остановимся только на некоторых полезных для практики качественных представлениях. Хотя все взаимодействия — межмолекулярные и химические— имеют общую квантовомеханическую основу, их удобно условно разделить на отдельные виды (табл. 3.1). В разных вариантах хроматографии, а именно в газовой и в молекулярной жидкостной (столбцы 1—5 в таблице), в хроматографии с образованием комплексных соединений (лигандной, столбцы 6—9), в ионообменной (столбцы 10 и 11) ив биоспецифической (аффинной, столбцы 12—14) хроматографии используются разные виды физических и химических взаимодействий (отмечены крестиками). Простейший случай — это неспецифическое дисперсионное притяжение (строка I и столбец 1). Неспецифическое взаимодействие может также включать комбинацию (столбец 2) дисперсионного (строка I) и индукционного (строка И) притяжения, если в структуре компонента либо неподвижной фазы имеются ионы, жесткие диполи, квадруполи и т. д. [c.25]

Биоспецифическая (аффинная) хроматография 249 [c.249]

Адсорбционную хроматографию на угле, крахмале и других классических сорбентах вообще не применяют для разделения пептидов. Этот метод представлен здесь аффинной хроматографией, основанной на биоспецифической сорбции. Правда, аффинную хроматографию в основном применяют при выделении белков, однако метод может оказаться полезным при изучении физиологически активных пептидов. [c.390]

Инертный носитель может быть полиуретаном или полимером другого типа либо природным полимером (например, коллаген, легко выделяемый из шкур животных). Подвижный мостик присоединен к функциональной группе на полимерном геле. Длина мостика — важный параметр, так как свободный конец должен быть способен образовать ковалентную связь с функциональной группой фермента, не влияя на ферментативную активность. Такой фермент, пришитый к матрице, обычно называют иммобилизованным, ферментом [122—125]. В отличие от широко распространенного метода аффинной хроматографии в данном случае фермент, а не субстрат ковалентно сшпт с твердым носителем. Однако принцип биоспецифического узнавания тот же. [c.257]

Как и во всякой новой области, терминология в аффинной хроматографии еще четко не определилась. Это касается даже самого названия метода. В литературе наряду с термином аффинная хроматография часто встречается термин биоспецифическая хроматография . Тем более отсутствует согласование в других [c.5]

Биоспецифическое элюирование конкурентными ингибиторами применяется при выделении химотрипсина и трипсина нз панкреатических экстрактов с помощью аффинной хроматографии на ага- [c.267]

Неспецифическая сорбция уже обсуждалась на ряде примеров (разд. 5.1, 5.8, 7.1 и 8.3). С одной стороны, она мешает аффинной хроматографии, основанной на образовании биоспецифического [c.276]

Аффинная хроматография основана на биоспецифическом взаимодействии компонентов с аффинным лигандом. [c.29]

Чтобы не путать с предыдущим разделом, этот раздел, в котором описано то, что обычно понимается под названием аф- финная хроматография , озаглавлен Аффинная адсорбционная хроматография . В этом случае биоспецифический отбор происходит на стадии адсорбции, так как выделяемый белок обладает специфическим сродством к адсорбенту благодаря его способности связывать лиганд (рис. 4.32). Нет четкого разделения между действительно специфическими аффинными адсорбентами, которые кроме белков, имеющих центры связывания для иммобилизованного лиганда, связывают мало других белков, и адсорбентами общего типа, которые хотя и проявляют специфичность к определенным классам белков, связывают также и многие другие. Описание адсорбентов второго типа можно начать сокращенных адсорбентов, обладающих значительной избирательностью к ферментам, имеющим нуклеотидсвязывающие центры, а затем перейти к таким адсорбентам, как фосфоцеллюлоза, которая, будучи в основном ионообменником, часто используется в качестве псевдоаффинного носителя для белков, связывающих нуклеиновые кислоты [70], и ферментов, взаимодействующих с фосфорилированными сахарами [62, 63]. Хотя [c.146]

Оборудование и биоспецифические адсорбенты для аффинной хроматографии [c.165]

Методика зонального элюирования в аналитической аффинной хроматографии была разработана фактически параллельно с методикой постоянного элюирования/фронтального анализа (гл. 6). Благодаря прежде всего экспериментальной простоте, зональный метод нашел широкое применение для биохимического анализа биомолекулярных взаимодействий, при которых одно из реагирующих веществ может быть иммобилизовано с сохранением способности биоспецифического связывания. Поскольку метод может быть использован для анализа очень небольших количеств подвижного компонента, он имеет важное значение [c.218]

Ниже приведено описание общей методики аффинной хроматографии взаимодействующего растворенного компонента на матрице с иммобилизованным биоспецифическим лигандом при зональном элюировании. [c.218]

В приведенных ниже примерах аффинную хроматографию на ДНК, иммобилизованной на целлюлозе путем высушивания или с дополнительной пришивкой УФ-облучением, использовали для очистки ДНК-узнающих белков. При этом не предпринималось Гникаких усилий по отбору для иммобилизации каких-либо определенных участков ДНК белки сами находили в гетерогенной популяции молекул ДНК участки своего биоспецифического связывания. [c.424]

Для выделения ряда лектинов использованы продажные препараты полисахаридов, такие, как сефадекс и сефароза. На рис. 6.7 представлены результаты биоспецифической аффинной хроматографии фитоагглютининов из неочищенного экстракта семян кроталярии ( rotalaria jun ea) на E D —сефарозе после [c.117]

Есть еще одна особенность аффинной хроматографии, которую следует отметить с самого начала. Способ связывания биологически активного лиганда с матрицей обязан не только обеспечивать сохранение его активности, по п не создавать стерических препятствий для взаимодействия сорбируемого вещества с лигандом. Когда в качестве лиганда выступает биополимер (белковый антиген или субстрат, нуклеиновая кислота) и его участок биоспецифического взаимодействия оказывается достаточно удаленным от точки закреплетшя па матрице, то эта проблема не возникает. [c.341]

Среди других методов биоспецифической хроматографии следует отметить способ аффинной хроматографии целлобиогидролаз I и II T.reesei, основанный на различном сродстве этих [c.126]

Хроматография — совокупность методов и процессов разделения, анализа и физико-химических исследований смесей растворенных веществ, где используются разделяющая среда (неподвижная фаза) и какой-либо растворитель (подвижная фаза). Основана на различии в скоростях перемещения концентрационных зон исследуемых компонентов в потоке подвижной фазы относительно слоя неподвижной фазы. Обязательным и необходимым условием хроматографического разделения компонентов смесей является различие в равновесном и кинетическом распределениях этих компонентов между фазами, адсорбционная X. — вид хроматофафии, основанный на различной избирательной сорбируемости разделяемых веществ адсорбентом аффинная X. (биоаффинная X., биоспецифическая X., хроматография по сродству) — метод хроматографии, основанный на специфическом взаимодействии разделяемых биологически активных соединений с лигандами, ковалентно связанными с нерастворимыми носителями [c.343]

В справочнике с наибольшей полнотой приведены вырабаты-, ваемые промышленностью многих стран мира неорганические и органические сорбенты, носители, жидкие фазы и другие материалы для всех видов хроматографии — всего приблизительно 6000 марок и сортов. Даются состав, химические и физические свойства, основные количественные характеристики материалов, а также рекомендации по применению (с ссылками на специальную литературу). Описаны новые классы материалов для хроматографии поверхностно-пористые сорбенты и носители, сорбенты с привитыми фазами (типа щеток ), биоспецифические сорбенты для аффинной хроматографии. [c.2]

Применение поперечносшитых агарозных гелей в общем аналогично применению таких же гелей с водородными мостиками (см. разд. 29). Преимущества сшитых гелей, наиболее полно выявляются при использовании их для получения биоспецифических сорбентов для аффинной хроматографии (см. носители Affi-Gel, разд. 120). [c.62]

Однако термин аффинная хроматография вызывал (и все еще продолжает вызывать) много возражений. Делались попытки заменить его более точным например, биоспецифическая адсорбция или биоаффинная хроматография [29, 31], в особенности когда было найдено, что ряд сорбентов, в особенности такие, ко торые связываются с синтетическими ингибиторами своей гидро фобной углеводородной цепью, могут сорбировать макромолекуль в результате преимущественно гидрофобных взаимодействий [28] Использование комплексообразования биологических макромоле кул, основанного на гидрофобных взаимодействиях, положило на чало гидрофобной хроматографии [38]. Однако во многих слу чаях провести четкую границу между биоспецифическим комплексом и комплексом, образующимся в результате действия неспецифических гидрофобных взаимодействий, не так просто, как могло бы показаться на первый взгляд. Часто одно и то же вещество, привязанное к носителю, с одной группой макромолекул может образовывать биоспецифические комплексы, в то время как с другой оно может давать комплексы исключительно благодаря неспецифическим гидрофобным взаимодействиям, а в образовании [c.9]

Аффинная хроматография (или, более точно, биоаффинная или биоспецифическая по сродству хроматография) основана на исключительной способности биологически активных веществ связывать специфически и обратимо другие вещества, называемые в общем случае лигандами или аффинными лигандами [16], или упрощенно аффинантами [19]. [c.15]

Однако из упоминаемых выше экспериментов все же не следует, что только расстояние аффинанта от матрицы — решающий фактор, определяющий силу связывания. Изучая гидрофобные пространственные группы О Карра и др. [25—27] показали, что во многих случаях сорбция более зависит от гидрофобного связывания выделяемого вещества гидрофобной цепью, чем от образования биоспецифического комплекса. В качестве одного из наиболее часто цитируемого в статьях о влиянии пространственных групп примера, относящегося к аффинной хроматографии р-галак-тозидазы на носителях [31], можно рассмотреть следующие сорбенты [c.71]

Другим методом аффинной хроматографии, использующим образование специфического комплекса макромолекулы выделяемого вещества с аффинным лигандом, является биоспецифическое элюирование с неспецифических сорбентов этот метод известен как аффинное элюирование и в некоторых случаях как специфическое элюирование субстратом [54]. В основе метода лежит неспецифичеакое связывание, например, слмеси ферментов полимером, который несет на себе функциональные группы, взаимодействующие с ферментами. Требуемый фермент затем специфически элюируют растворол субстрата, ингибитора или какого-либо другого аффинного лиганда. [c.160]

Эти адсорбенты применяются в различных видах хроматографии. Гидроксильные группы этого пористого сополимера можно легка заменить на другие функциональные группы, которые могут послужить, в частности, сшивкой для иммобилизации ингибиторов ферментов в аффинной (биоспецифической) хроматографии [101—102а] (см. разд. 11.10). На схеме (г) приведены реакции, используемые для модифицирования поверхности этого полимера эти реакции применяют для связывания ингибитора в биоспецифической хроматографии [c.60]

Такой вид хроматографии ферментов часто называют аффинной хроматографией . В этом названии подчеркивается, что метод основан на сродстве (а1 1п11у) фермента субстрата соответствующему ферменту, иммобилизованному на адсорбенте. Однако все виды хроматографии основаны в той или иной мере на взаимодействии веществ с сорбентом, т. е. на сродстве между ними. Более точным, отражающим существо метода, является термин биоспецифическая хроматография . [c.249]

Д. X. Кемпбел, Е. Люшер, Л. С. Лерман Формулирование принципов аффинной (биоспецифической) хроматографии [12]. Химической сшивкой белка и диазотиро-ванной п-аминобензилцеллюлозы осу- [c.8]

Особое место занимают методы жидкостной хроматографии, используемые для разделения и анализа высокомолекулярных соединений, синтетических и природных полимеров (эксклю-зионная, или гель-хроматография), очистки, селективного анализа белков ферментов (аффинная, или биоспецифическая, хроматография). [c.13]

Применение аффинной хроматографии в качестве метода изучения взаимодействий находится еще на ранней стадии развития, несмотря на то что количественная аффинная хроматография была введена уже десять лет назад [1—3]. Действительно, количество исследований, касающихся методологических аспектов аффинной хроматографии, примерно равно количеству сообщений по применению этого метода в конкретных экспериментальных системах. Большинство этих исследований способствовало применению аффинной хроматографии для оценки равновесия с участием ферментов и модификаторов, ингибиторов или субстратов [1—12], но метод был также использован и для характеристики взаимодействий белок — лекарственный препарат [13], система антиген — антитело [14] и, в меньшей степени, белок-белковых взаимодействий [15, 16]. По существу метод заключается в иммобилизации биоспецифической реагирующей группы X на инертной хроматографической матрице (например, часто на сефарозе) и определении средневзвешенных величин объема элюирования Уа распределяющегося растворенного вещества А в ряде хроматографических экспериментов, в которых растворенное вещество мигрирует в присутствии различных концентраций лиганда 5, также специфически взаимодействующего с А и/или X, В некоторых примерах различные изменения значения Уа отражали конкуренцию между растворенными и иммобилизованными реагентами за одно и то же положение в А [2—5, 7—14] в других изменения в величинахГд были обусловлены наличием взаимодействия иммобилизованного реагента X с бинарным А5-комплексом, образованным растворенным веществом и растворимым лигандом [1, 6]. Цель количественной аффинной хром ографии — объяснить возникновение изменений в величинах Га в предложении существования тех или иных равновесий. Поскольку положение равновесия зависит от концентрации (в соответствии с законом действия масс), точное определение состава смеси реагентов, к которой относится Га, обеспечивает применение фронтальной хроматографии [3, 4]. [c.192]