Биогели

Рис. 73. Двухступенчатая очистка одного из негистоновых щелочных белков хроматина тимуса ( белок АК ) методом гель-фильтрации на биогеле Р-60

Биогели серии А. Американская фирма Bio-Rad выпускает агарозные матрицы для гель-фильтрации под торговым наименованием Bio-Gel А . Нет нужды останавливаться на свойствах этих матриц — они аналогичны тем, что были описаны для сефарозы. Ниже представлены параметры шести тппов этих матриц. [c.120]

Рис. 78. Калибровочный график для колонки с биогелем А-5т (см. текст)

Биогели серии Р. Кроме агарозных, фпрма Bio-Rad выпускает сферичеекпе матрицы на основе полиакриламидного геля под общим торговым наименованием Bio-Gel Р . Пористость геля, как и при электрофорезе, определяется концонтрацпей в нем акриламида. Основные параметры этих биогелей таковы [c.121]

Биогель Р-2 Полиакриламид - водная 200-2000 [c.180]

Для гель-хроматографии применяют в зависимости от целей гидрофильные и гидрофобные сорбенты. В качестве гидрофильных сорбентов применяют декстрановые гели (сефадексы и мол-селекты), полиакриламидные гели (биогели), оксиалкилметак-рилатные гели (сфероны) и т. д. Сефадексы получают из декстрана [c.237]

Матрицам на основе акриламида (биогелп серии Р ) в меньшей степени, чем софадексам, свойственна ионная сорбция (можно элюировать и водой), но гидрофобную сорбщш они проявляют заметно. Так, на биогеле Р2 для урацила и цитозина мояшо получить К 1,8, а для адепина и гуанина — Kd 3,1. Агароза обнаруживает склонность как к гидрофобной сорбции, так и к ионной (за счет остатков сульфокислоты). [c.114]

Если для данного, не слишком широкого интервала молекулярных масс можно выбирать из нескольких матриц, графики селективности которых перекрывают этот интервал, то предпочтительно выбрать ту из них, для которой интервал Kav будет лежать ближе к пределу исключения (область малых значений /Tav)- Фракционирование займет меньше времени, а разрешение пиков от этого выиграет кроме того, улучшатся условия для сохранения биологической активности. Ультрогели серии АсА, а также сефадексы и биогели серии Р средней и крупной пористости могут в этом плане оказаться наиболее подходящими матрицами, так как пределы исключения для них ниже, чем у других сефадексов и гелей агарозы. [c.134]

Как видно из приведенных данных, диапазоны пористости и соответственно области фракцпонпрованпя для этих биогелей примерно такие же, как у сефадексов. Первые четыре типа выпускаются в виде гранул четырех диапазонов размеров 150—300 мкм (50— 100 МЕШ), 80—150 мкм (100-200 МЕШ), 40—80 мкм (200-400 МЕШ) и менее 40 мкм (—400 МЕШ). Остальные типы представлены тремя диапазонами размеров (за вычетом 200—400 МЕШ). Биогели серии Р поставляются в сухом виде, поэтому выше указаны также объемы упаковапной набухшей матрицы. На рис. 64 в тех же координатах, что п на предыдущем рисунке, представлено семейство графиков селективности для бпогелеи типа Р. Матрицы этого тппа имеют некоторые преимущества перед сефадексами. Во-первых, [c.121]

Уже упоминалось, что ввиду сжимаемости многих матриц для гель-фильтрацип перепад давлений, приходящийся на колонку, и максимальную скорость. элюцпи (эти величины взаимосвязаны) в ряде случаев следует ограничивать. Подчеркнем, что эти ограничения необходимы не только уже в ходе хроматографического процесса, но п во время заполнения колонки. Как будет показано ниже, наиболее мягкие матрицы не выдерживают даже гидравлического напора, обусловленного высотой самой колонкп. Разность уровней в этом случае надо уменьшать с помощью защитной петлп на ее выходе. Для сефадексов от 0-10 до 0-75, сефароз СЬ-6В и СЬ-4В, биогелей Р-2 — Р-10, А-0,5т и А-1,5т, а также всех сефакрилов эта проблема не возникает, поскольку они обладают достаточной [c.128]

Использование гель-фильтрации для освобождения от радиоактивных предшественников неоднократно цитировалось при описании методов введения радиоактивной метки в белки и нуклеиновые кислоты [Остерман, 1983]. Нередко обессоливание используют и на заключительном этапе очистки для освобождения не только от соли, но и от прочих низкомолекулярных примесей. Например, в одной из работ по выделению РНК-полимеразы очисткой белка на биогеле А-1,5т завершалась целая серия операций, включавшая различные варианты переосаждений белка и ионообмениой хроматографии [Vaisius, Horgen, 1979]. [c.138]

Наиболее широкое распространение среди носителей для гель-хроматографии белков получили сорбенты, приготовленные на основе декстрана (сефадексы, сефакрилы, молселекты), полиакриламида (биогели Р, акрилексы) и агарозы (сефарозы, биогели А) и др. Набухая в воде, они образуют гели. [c.106]

Рис. 69. Зависимость сксрости течения элюента через колонку от гидравлического напора для биогелей серий А (а) и Р (б)

Этот выбор диктуется характером задачи, которая решается гель-фпльтрацией, и свойствами разделяемых молекул, в первую очередь их массами. Для обессоливаиия раствора макромолекул естественно использовать жесткие, достаточно мелконористые матрицы с крупными гранулами (последнее — для увеличения скорости течения), например сефадекс С-25 или биогель Р-б. Для обессоливания более мелких молекул можно воспользоваться сефадексами С-10 и С-15 или биогелями Р-2 и Р-4. Названные матрицы удобны и для смены буфера, в котором первоначально находится препарат, на тот, которым уравновешена колонка и производится элюция, или для освобождения биополимеров от радиоактивных низкомолекулярных предшественников. Близка к описанным н задача рассортировки смеси на две группы веществ — высокомолекулярных и низкомолекулярных (например, отделение белков от пептидов или нуклеиновых кислот от белков). Здесь, очевидно, следует вы- [c.133]

ОТ 2900 до 76 ООО. С их помощью строили градуировочную кривую (график селективности) для колонки биогеля А-5т (1,5 х 85 см) при скорости элюции 3 мл/см -ч. Объем препарата — 0,15 мл (0,1% Vt). В одно разделение пускали 4-5 белков, по 10 мг каждого. Для определения Vg ж Vt к белкам добавляли голубой декстран до 0,6% и ДНФ-аланин до 0,1% (или С-глпцин). На рис. 78 показана полученная авторами зависимость. В диапазоне 7000—40 ООО Дальтон она оказалась практически линейной. [c.153]

Остается напомнить, что для аналитического фракционирования следует использовать гранулы наименьших возможных размеров (категорий Fine и Superfine ) для сефадексов, 200—400 МЕШ и —400 МЕШ для биогелей серии Р. [c.134]

Обессоливание, смену буфера и очистку нуклелновых кислот (ПК) от радиоактивных предшественников производят также, как для белков. Выбор пористости геля диктуется молекулярными размерами примесей, от которых очищ ают раствор ПК. Как и для белков, здесь можно использовать мелкопористые и достаточно жесткие гели типа сефадекс G-25, биогель Р-6 и сходные с ними. [c.143]

Наконец, отметим возможность быстрой и эффективной очистки гель-фильтрацией целых вирусов и фагов. Например, в недавней работе из 1 л суспензии Е. соИ, зараженных фагом X, после обработки бактериального лизата ДНКазой, РНКазой и концентрирования фагов переосаждением полиэтиленг иколем ПЭГ-6000 за одну операцию гель-фильтрации на колонке биогеля А-5т объемом 125 мл удавалось полностью очистить до 65% инфекционного материала [Sain, Erdei, 1981]. [c.145]

Этот же принцип недавно был использован для разделения 40S и 60S субъединиц рибосом на колонках сефарозы 4В или биогеля А-15ш в солевом растворе неизменной концентрации (0,5 М KG1) с помощью изменения температуры. При 4° и указанной концентрации КС1 40S субъединицы очень слабо задерживаются агарозой и выходят четким пиком. Объем элюции лежит примерно посередине между свободным и полным объемами колонки. Затем при той же температуре вымывается пуромицин, использованный для диссоциации рибосом. Для снятия с колонки 60S субъединиц оказывается достаточным повысить температуру элюента до 35° — субъединицы выходят четким пиком [К. Man hester, J. Man hester, 1980]. [c.179]

Наиболее распространены гелевые фильтры на основе декст-рана биогель, сефадекс, молселект. Они представляют собой гидрофильные гранулы полисахаридов с пространственно сетчатой структурой, нерастворимые в воде, но обладающие способностью набухать в воде. [c.140]

В дополнение к полисахаридным гелям фирмой Bio-Rad (США) предлагаются биогели на полиакриламидной основе (табл. 3-4). Введение в практику макропористых полистирольных смол, ненабухаюшнх пористых стеклянных шариков и иммобилиза-Ш1Я гидрофобных радикалов на декстрановой матрице сделали возможным гель-хроматографическое фракционирование в среде органических растворителей. Алки-лированные декстраны (типа сефадекс-LH) находят широкое применение в синтетической пептидной химии [38]. [c.350]

Гель-хроматография. Раствор фосфофруктокиназы наносят на колонку (4x50 см), заполненную биогелем А—1,5т, предварительно уравновешенную буфером Б. Этим же буфером проводят элюцию белка с колонки. Во фракциях измеряют концентрацию белка и ферментативную активность. Фракции белка, содержащие наибольшую активность, объединяют. К объединенному раствору добавляют сульфат аммония до 557п-ного насыщения. Продолжают перемешивание в тече- [c.244]

Повторная гель-хроматография. Раствор фосфофруктокиназы наносят на колонку (2,2x60 см), заполненную биогелем А—1,5т, уравновешенную буфером А. Фермент элюируют тем же буфером. Фракции с наибольшей удельной активностью объединяют. [c.245]

Сшитые полиакриламидные гели (биогель Р), например биогель Р2 с интервалом молекулярных весов разделяемых фракций 200—1800 и биогель РЗОО с интервалом молекулярных весов разделяемых фракций 60 000—400 000. [c.55]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология