Хроматография ферменты

В дальнейшем шиффовы основания могут быть восстановлены. Возможность внутреннего вращения в звеньях сшивки обеспечивает доступность реакционно-активной части фермента по отношению к субстрату, на который данный фермент воздействует в высокоизбирательных реакциях биокатализа или в упомянутой в разделе 5.1 биоспецифической (аффинной) хроматографии ферментов. [c.109]

Ионообменная хроматография. Фермент, полученный вышеописанным методом, обладает 85—95%-ной чистотой. Для получения более [c.295]

Для ионообменной хроматографии ферментов и других высокомолекулярных [c.25]

Для ионообменной хроматографии ферментов наиболее широкое применение в качестве носителей нашли карбоксиметилцеллюлоза и диэтиламиноэтилцеллюлоза. При проведении ионообменной хроматографии необходимо учитывать, что при определенных значениях pH раствора и концентрации электролитов возможна инактивация ферментов. [c.201]

Гидрофобная хроматография ферментов из галофильных бактерий с использованием градиентов сульфата аммония с уменьшающейся концентрацией [c.185]

В случае ионообменной хроматографии фермент и ионы Mg +, вероятно, элюируются при различных ионных силах. При использовании гель-проникающей хроматографии они могут разделяться за счет различий в размерах. В результате обеих процедур фермент теряет ионы магния, что может приводить к денатурированию. Этого можно избежать в случае гель-проникаю-щей хроматографии, если гель предварительно уравновесить с Mg2+, а элюирование проводить буфером, содержащим Mg2+. [c.552]

Колоночная хроматография ферментов, чувствительных к кислороду воздуха, требует строго анаэробных условий. Прибор, схема которого приведена на рис. 36.1, позволяет проводить хроматографию гидрогеназ с выходом 90% [3]. Все емкости и соединительные шланги тщательно продувают инертным, газом (не содержащим кислорода), который вводят в систему через бутыль I. В атмосфере инертного газа идут набивка и промывание колонки, а также сбор и хранение полученных фракций. Эти операции нельзя проводить на обычном хроматографическом оборудовании, используя в качестве защиты от кислорода какой-либо восстановитель, введенный в буферный раствор. Такая методика дает очень низкие выходы исследуемого материала. [c.9]

Однако наиболее важным и самым распространенным методом выделения и анализа ферментов является хроматография. Об этом можно судить по множеству публикаций и специальных обзоров, посвященных различным аспектам хроматографии ферментов. (См. обзор по колоночной хроматографии [20 и табл. 36.1.) В последние годы получили дальнейшее развитие новые высоко избиратетгьные методы выделения, такие, как аффинная хроматография [21—26 и гл. 7, 14], хроматография на гидроксиапатите [27 и гл. 35], хроматография на геле фосфата кальция [28 и гл. 35], гель-хроматография в градиенте детергента как метод очистки мембраносвязанных ферментов [29, 30], гель-проникающая хроматография [31 и гл. 5, 12], электрохроматог-рафические методы [11], ионообменная хроматография [32, 33 и гл. 6, 13], субетрат-специфичное элюирование [34]. [c.9]

Ионитные комплексы с сорбированными лигандами могут быть использованы для селективной сорбции ферментов и гормонов. С этой целью селективный к ферменту лиганд фиксируется на комплексе вследствие реализации координационной связи с ионами металла. Селективная к ферменту группа должна быть свободна и при контакте с ферментом происходит его избирательная сорбция (афинная хроматография ферментов) [19—21, 62]. Можно предполагать, что ионитные комплексы с сорбированными лигандами будут стабильнее тех, в которых лпганды фиксируются па сорбенте в результате образования водородной связи или нековалентных взаимодействий [53]. [c.310]

В настоящее время хроматография на целлюлозных ионитах вошла в число повседневных методов белковой химии. Она с успехом применяется как для аналитических, так и для препаративных целей. В ближайшем будущем она несомненно найдет применение и в производственном получении ряда белков. Общее количество работ, в которых использовались ионообменные целлюлозы, достигает нескольких сотен и непрерывно увеличивается. Мы рассмотрели только общие закономерности и привели иллюстрирующие их примеры. Некоторые теоретические соображения и ряд других примеров приведены в обзорах Николаева [58], Давидовой и Рачинского [64]. Хроматография ферментов рассмотрена в обзоре Турба [59].1 Подробные указания по подготовке колонок с целлюлозными ионитами и ио проведению на них хроматографии даны Петерсоном и Собером [60], Горяченковой [61] и Гинодманом [63]. [c.229]

Хроматография на целлюлозных и полидекстрановых ионитах Хроматография на биполярных ионитах Хроматография ферментов Препаративное и аналитическое разделение Автоматический анализ Высокоскоростная хроматография с применением ионообменных производных твердых гидрофильных гелей Субстратное (специфическое или аффинное) элюирование [c.321]

Проведенный специалистами научно-производственного объединения Биолар анализ ассортимента биохимических реактивов показал, что его быстрое расширение обусловлено пополнением традиционных групп (красители, реагенты для аффинной хроматографии, ферменты, пептиды, белки, гормоны, стероиды, липиды и т.д.), созданием новых групп и видов реактивов (иммобилизованных ферментов, моноклональных антител, стимуляторов роста растений, феромонов и т.п.), а также наборов для научных исследований и диагностического анализа. [c.63]

Такой вид хроматографии ферментов часто называют аффинной хроматографией . В этом названии подчеркивается, что метод основан на сродстве (а1 1п11у) фермента субстрата соответствующему ферменту, иммобилизованному на адсорбенте. Однако все виды хроматографии основаны в той или иной мере на взаимодействии веществ с сорбентом, т. е. на сродстве между ними. Более точным, отражающим существо метода, является термин биоспецифическая хроматография . [c.249]

Оптимальными /шгандами для аффинной хроматографии ферментов являются соответствующие субстраты, однако в общем случае их применению мешает быстрое превращение в продукты ферментативной реакции и как следствие снижение эффективности и деструкция сорбентов. Тем не менее субстраты могут быть использованы в качестве лигандов, если при определенных условиях скорость каталической реакции понижена, а связывание с ферментом остается достаточно сильным. Такие условия могут быть созданы путем понижения температуры (от —2 до —50 °С), когда прочность фермент-субстратного комплекса достаточна для удерживания фермента на колонке, в то время как его десорбция легко достигается при повышении температу-ры [5]. [c.189]

GGT из почек быка. Легкая форма GGT из почек быка может быть очищена по общей методике, описанной в разд. 4.5. Более высокая удельная активность достигается после повторной хроматографии фермента, элюированного с колонки с иммуноадсорбентом (иммобилизованные антитела против GGT почек быка). Продукт показывает 2500-i-3500-кратное увеличение GGT-активности по сравнению с гомогенатом. Выход очищенного фермента достигает 46%. Данные по очистке суммированы табл. 2, а кривая элюирования с колонки с иммуноадсорбентом приведена на рис. 9. [c.157]

Рис. 1. Сравнение влияния концентрации NADH на кривые элюирования при фронтальной и зональной хроматографии лактатдегидрогеназы печени крысы на 10-карбоксидециламино-сефарозе. а — начальные участки кривых элюирования, полученные при фронтальной хроматографии фермента (9 нМ) на колонке (0,1 мл) в отсутствие NADH (/) и в присутствии 2 (-2), 3 3),

Справочник химика 21

Химия и химическая технология