Глутаминовая кислота, нингидринная

После окончания разделения хроматограмму высушивают на воздухе и проявляют раствором нингидрина путем опрыскивания из пульверизатора. З-атем нагревают 15—20 мин при 60° С в термостате или сушильном шкафу. Расположение аминокислот сверху вниз по направлению движения растворителя следующее цистин, лизин, аргинин, гистидин, аспарагиновая кислота, серии (три последние аминокислоты располагаются в виде тесно сближенных пятен) глутаминовая кислота, треонин, аланин, пролин, тирозин, валин, метионин, триптофан, фенилаланин, лейцин, изолейцин (последние три аминокислоты также часто располагаются в виде тесно сближенных пятен). [c.301]

Вытеснение аминокислот производят сначала 0,05%-ным раствором уксусной кислоты, причем вытесняется глутаминовая кислота. Вымывание прекраш,ают после получения отрицательной реакции на нингидрин. Индикаторный раствор нингидрина готовят в день определения смешением 95 объемных частей 0,5%-ного раствора нингидрина в ацетоне, 1 части ледяной уксусной кислоты и 4 частей воды. В присутствии аминокислоты раствор дает синюю окраску. [c.107]

После получения отрицательной реакции на глутаминовую кислоту колонку промывают 1 н. раствором соляной кислоты. При этом вымывается аспарагиновая кислота. Прекращают вымывание после отрицательной реакции с нингидрином. [c.107]

Наиболее общим методом определения концентрации пептидов является колориметрия продуктов реакции с нингидрином [2]. Это один из наиболее чувствительных колориметрических методов. Для обнаружения аминокислот и пептидов разработаны как обычный, так и полностью автоматизированный варианты, причем нингидриновый реагент не вызывает коррозии и его можно подавать обычным микронасосом. Реакция идет по свободным аминогруппам, но в некоторых случаях хромофор образуется с низким выходом. Данные по окрашиванию дипептидов можно найти в работе [3]. У всех дипептидов, содержащих в качестве Ы-концевой аминокислоты аргинин, треонин, серин, глутаминовую кислоту, глицин, фенилаланин, метионин, лейцин и тирозин, интенсивность окраски составляет 1,6-10 у лейцина эта величина составляет 1,7-10 . У дипептидов с М-концевым лизином и аспарагиновой кислотой интенсивность окраски несколько выше (на 20 и 29% соответственно), а дипептиды с Ы-концевым гистидином и триптофаном проявляются несколько слабее (42 и 67% соответственно от средней интенсивности). Дипептиды с М-концевым пролином, валином и изолейцином окрашиваются очень слабо [2,7 6,4 и 8,5% от средней (1,6- 10 ) интенсивности]. [c.391]

Смешивают 1 мл раствора, содержащего 0,02—0,4 мг а-аминокислоты [127], с 0,5 мл буферного раствора (рН = 5,3— 5,4) и 0,5 мл 3%-ного раствора нингидрина в метилцеллозольве. Нагревают 15 мин при 100 С, после чего добавляют 5 мл 50%-ного изопропилового спирта и взбалтывают. После охлаждения до комнатной температуры измеряют оптическую плотность красного раствора при 570 нм. Таким способом определяют аланин, аспарагиновую кислоту, аспарагин, валин, глицин, глутамин, глутаминовую кислоту, гистидин, изолейцин, лизин, метионин, орнитин, серии, таурин, тирозин, треонин, фенилаланин, этаноламин, а также аммиак. При определении пролина и оксипролина получают раствор, оптическую плотность которого измеряют при 440 нм. [c.169]

После окончания разделения хроматограмму высушивают на воздухе и проявляют, для этого ее опрыскивают из пульверизатора 0,2%-ным раствором нингидрина в ацетоне. Затем нагревают 15—20 мин при 60 °С в термостате или сушильном шкафу. Расположение аминокислот сверху вниз по направлению движения растворителя следующее цистин, лизин, аргинин, гистидин, аспарагиновая кислота, серии (три последние аминокислоты располагаются в виде тесно сближенных пятен) глутаминовая кислота, треонин, аланин, пролин, тирозин, валин, метионин, триптофан, фенилаланин, лейцин, изолейцин (последние три аминокислоты также часто располагаются в виде тесно сближенных пятен). Для того чтобы сохранить пятна на хроматограмме, их фиксируют 1%-ным раствором нитрата меди в ацетоне, погружая хроматограмму в этот раствор или опрыскивая ее из пульверизатора. После фиксации пятна приобретают красно-оранжевую окраску. [c.331]

Подлинность глутаминовой кислоты подтверждается по реакции с нингидрином. [c.190]

Сущность этой реакции заключается в том, что глутаминовая кислота под действием нингидрина окисляется и распадается на альдегид, диоксид углерода и аммиак. Выделившийся аммиак конденсируется со второй молекулой нингидрина и с продуктом его восстановления—дикетооксигидринденом. [c.190]

Найдено, что кальций-связывающие участки некоторых белков относительно богаты остатками у-карбоксиглутаминовой кислоты. Она встречается, например, 10 раз в первых 33-х остатках последовательности из 582-х остатков протромбина, причем каждый раз в виде близко расположенных дублетов. Карбоксилирование остатков глутаминовой кислоты в этом белке, по-видимому, осуществ ляется в присутствии витамина К [15]. Как производное малоновой кислоты, она декарбоксилируется в процессе кислотного гидролиза, но может быть выделена после щелочного гидролиза [16], однако она дает крайне слабую реакцию с нингидрином. Установлено, что цитруллин (7), который долгое время считали промежуточным продуктом щелочной деградации аргинина в орнитин, входит в состав белка клеток сердцевины волос млекопитающих и игл дикобраза [17]. [c.232]

Реактивы глутаминовая кислота, 1%-ный раствор в фосфатном буфере с pH 7,4 пировиноградная кислота, 1%-ный раствор моиобрЬмуксусная кислота, 0,025%-иый раствор гидрокар-бонат калия, 0,1% НЫЙ раствор уксусная кислота, 2%-ный раст-в<5р система растворителей нингидрин, 0,2%-ный раствор в ацетоне. [c.168]

На оси ординат отложена интенсианость окраски с нингидрином относительно окраски, развиваемой лейцином. А. Разделение проводили на колонке высотой 30 см с набивкой из дауэкс 1-Х8. Элюирование проводили 0,5 н. уксусной кислотой при 25°. I —смесь аминокислот // —тирозин /// — глутаминовая кислота /К— аспарагиновая кислота V —(цистеиновая кислота). [c.82]

Растворителем служит фенол —коллидин, иидикато1)ом —нингидрин (условия по Денту). Среднее положение пятен основных аминокислот и их производных из белковых гидролизатов на хроматограмме (фенол - коллидин, нингидрин) следующее У — аспарагиновая кислота 2—глутаминовая кислота серин [c.443]

Поэтому пептиды с N-концевым глутамином дают отрицательную реакцию с нингидрином и не могут быть секве-нированы. Аналогичным образом может циклизоваться остаток глутаминовой кислоты, но в более жестких условиях. Относительно отщепления N-концевой пирролидонкарбоновой кислоты см. разд. L6.1. [c.96]

Ионообменная хроматография широко используется для разделения биомолекул. Примером, свидетельствующим о ее высокой разрешающей способности, является приведенная на рис. 5.17 картина разделения аминокислот. Для разделения требуются две колонки одна (150 см) для кислых, нейтральных и ароматических а.минокислот, а другая (15 см) для основных аминокислот. Очевидно, что удерживание аминокислот зависит от их основности. Поэтому аспарагиновая и глутаминовая кислоты выходят с колонки раньше большинства нейтральных аминокислот и, естественно, значительно опережают выход основных аминокислот. В этом случае легко могут быть разделены даже нейтральные ампнокнслоты, поскольку, несмотря на близкие значеиня рК, их неполярные боковые цепи обладают различным сродством к смоле. В системе, представленной на рис. 5.17, элюат, выходящий нз колонки, автоматически смешивается с раствором нингидрина при прохождении аминокислоты с нингидрином через нагревательную ячейку появляется окрашивание, интенсивность которого [c.154]

После полного гидролиза белка производится количественное онределе-ние каждой из аминокислот, присутствующих в гидролизате. Для разделения аминокислот чаще всего применяется метод ионообменной хроматографии. В качестве ионообменника обычно используют сульфополистирольный катионит. Смесь аминокислот вносится в верхнюю часть колонки при pH 3 в этих условиях индивидуальные аминокислоты полонштельно заряжены. Аминокислоты в форме катионов сорбируются на сульфополистирольной смоле (содержащей группы — SOg Na ), замещая часть ионов натрия, и удернги-ваются на материале колонки электростатическими силами. Очевидно, что прочность сорбции аминокислоты возрастает с увеличением ее основности. После внесения смеси начинается элюция аминокислот при постепенном увеличении pH и 1тонной силы буферных растворов, пропускаемых через колонку. В этих условиях положительный заряд на аминокислотах постепенно нейтрализуется и ионные взаимодействия ослабляются. Первыми с колонки снимаются кислые аминокислоты (глутаминовая и аспарагиновая кислота), затем нейтральные и, наконец, основные. С помощью этого метода можно разделять все аминокислоты, обычно встречающиеся в белках, поскольку прочность сорбции аминокислоты смолой зависит как от ионных, так и от неионных взаимодействий. Сульфополистирольный катион адсорбирует аминокислоты достаточно избирательно, так что все нейтральные аминокислоты, которые нельзя разделить с помощью ионного обмена, тем не менее элюируются с колонки в разных фракциях. Индивидуальные аминокислоты, элюируемые с колонки, собираются автоматическим коллектором фракций. Затем их количественно определяют путем измерения интенсивности окраски, возникающей при действии нингидрина. В настоящее время промышленность выпускает несколько типов автоматических амино- [c.57]