анализ аминокислот время удерживания

Поскольку свободные аминокислоты имеют структуру цвиттер-иона, они представляют собой сильно полярные соединения с очень низким давлением паров и, следовательно, не пригодны для газохроматографического анализа. Устраняя электрический заряд, их превращают в более летучие соединения, причем это достигается различными способами. Однако для ГХ необходимо, чтобы образующиеся производные были не только достаточно летучими, но и обладали бы высокой термостабильностью Чем более полярны производные, тем они более устойчивы к нагреванию, причем с увеличением полярности органических соединений увеличивается их время удерживания на колонке. Однако, как следует из соотношения между временем удерживания и температурой разделения, для того, чтобы получить величины удерживаемых объемов одного порядка, рабочую температуру нельзя выбирать произвольно. Это достаточно важный момент, поскольку при низкой термостабильности веществ в системе могут происходить неконтролируемые процессы разложения. При этом сигнал исчезает не всегда, часто он уменьшается, и появляется множество пиков. С точки зрения качественного и количественного аминокислотного анализа эти эффекты очень неблагоприятны, так как любое увеличение числа пиков [c.309]

Этот метод не приспособлен еще для количественного анализа, но, вероятно, степень превращения аминокислот, выраженная в процентах, в N-ацетил-н-амиловые производные имеет величину одного порядка для большинства аминокислот, поскольку сигнал детектора для производных, приготовленных стандартным методом, почти одинаков. Кроме того, величина сигнала составляет примерно 85% величины сигнала, полученного для растворов чистых производных. К сожалению, гистидин и аргинин этерифицируются при указанных условиях с плохим выходом, а ацетилирование не протекает гладко. Следовательно, вероятно, необходима усовершенствованная методика анализа этих аминокислот. Лучшие результаты получены при уменьшении продолжительности нагрева во время этерификации до 5 мин и при кипячении с обратным холодильником с уксусным ангидридом в течение 10 мин. Полученные производные обладают большими удерживаемыми объемами на второй колонке, чем лизин (см. фиг. 196). Вероятно, перед этерификацией имеет смысл превращать аргинин в орнитин, поскольку это производное имеет время удерживания на первой колонке всего лишь 33 мин. При указанных условиях производные триптофана не элюируются. [c.534]

В начальном периоде развития метода ГЖХ для анализа пептидов было вполне достаточно обычных колонок с высоким содержанием набивки, так как исследователи имели дело только с метиловыми эфирами N-ТФА-дипептидов, которые достаточно летучи и позволяют проводить анализ на таких колонках в разумное время. Однако для дипептидов с высоким молекулярным весом приходилось мириться с очень - большими временами удерживания. Все имеющиеся в литературе данные по удерживанию были рассчитаны для таких сильно нагруженных колонок (см. табл. 1) с изотермическим режимом. Газохроматографический анализ полного ряда пептидов, от низкомолекулярных дипептидов и даже аминокислот до высокомолекулярных олигопептидов, проводится преимущественно в мало загруженных колонках с 1—5% жидкой фазы на силанизированном [c.149]

Контроль температуры должен распространяться на все ступени процесса важна как температура, при которой образец вводится, так и температура конструктивных элементов трубок, главным образом металлических. Следует еще раз подчеркнуть, что процесс разделения, избирательность и время удерживания существенно зависят от температуры. Природные смеси аминокислот всегда сложны. Практически невозможно выполнить полный анализ смеси при одной температуре, поскольку, какой бы образец ни фракционировался, в смеси обычно присутствуют как высоко-, так и низкомолекулярные соединения с разной степенью полярности. Из сказанного ранее следует, что метод с программированием температуры является лишь разновидностью многоколоночного метода, в котором, например, три колонки используются при трех различных температурах, а детектор присоединен к каждой колонке. В таком ступенчатом температурном методе объединяются достоинства изотермического метода и метода программирования температуры — правда, при этом предъявляются очень высокие требования к аппаратуре. Маки-суми и Сароф [60] воспользовались этим комбинированным методом для разделения метиловых эфиров трифторацетиламинокислот (ТФА-аминокислот). [c.302]

Для разделения полиаминов наиболее пригодным ионитом, по-видимому, является биорекс 70 (400 меш). Применение его описано в нескольких статьях [4, 6, 7]. Колонки (7X0,9 см) с этим сорбентом присоединяются к обычному прибору для автоматического анализа аминокислот. Элюирование осуществляют со скоростью 2 мл/мин последовательно несколькими буферными растворами. Первый буферный раствор представляет собой 0,438 М раствор ацетата натрия с pH 7,5. После того как 100 мл первого раствора пройдет через колонку, его немедленно заменяют вторым буферным раствором, представляющим собой 0,5 М раствор ацетата пиридина с pH 4,4. Времена удерживания полиаминов в указанной выше системе опубликованы в работе [8]. Способ Морриса [9] предусматривает внесение небольших изменений в состав буферных растворов. После введения пробы в колонку смолу начинают промывать первым буфером (0,33 М раствором ацетата пиридина с pH 5,7). После того как через колонку пройдет 100 мл первого буфера, промывание продолжают вторым буфером (0,38 М раствор ацетата натрия с pH 4,4) [c.270]

Несмотря на то что нельзя дать надежных правил для оценки хроматографической подвижности, существуют все же общие закономерности, которыми можно руководствоваться при анализе компонентов с неизвестной структурой. Так, время удерживания снижается при увеличении числа атомов углерода в боковой цепи аминокислот. Увеличение числа СНг-групп в разветвленной боковой цепи не дает такого выраженного эффекта. При появлении оксигрупп время удерживания возрастает и увеличивается разница в подвижности гидроксилсодержащих гомологов. Присутствие второй аминогруппы сокращает время удерживания, напротив, гуанидиногруппа снижает хроматографическую подвижность. [c.379]

При комбинации двух аминокислот могут получиться не только дипептиды, но также и дикетопиперазины, которые тоже обнаруживались в частичных гидролизатах [6]. В результате возникают трудности в анализе хроматограммы, так как дикетопиперазины выходят вместе с метиловыми эфирами N-ТФА-дипеп-тидов. В табл. 3 приведены относительные времена удерживания некоторых дикетопиперазинов, измеренные в условиях, сопоставимых с условиями относительных времен удерживания метиловых эфиров N-ТФА-дипептидов в табл. 1. [c.158]

НП-ЗООА, НСКТ 25-100 и др.) по термической устойчивости и разделяющей способности не уступают лучшим зарубежным образцам. В последне время замет ю активизировались работы по синтезу новых полярных ИФ. Разработан. метод получения поли-л-феноксиленов [22]. Аналоги такого полимера— полифениловые эфиры с 5, 6 и 7 бензольными кольцами— уже показали свою эффективность при анализе соединений различных классов. По свс й термической стойкости поли-л-феноксилен существенно превосходит 0V-1. После кондиционирования колонок с обеими фазами в течение 16 час при 400° время удерживания 1,3,5-трифенилбензола на пс ли-л -фен0ксилене не изменилось, а на 0V-1 уменьшилось в 3 раза. Синтезированные полиамиды [16] оказались также устойчивыми к высоким температурам. По селективности разделения углеводов и аминокислот полиамиды близки к ХЕ-60. Полиимиды [17] с предельной рабочей температурой 325° рекомендуются для анализа стероидов. Как полиамиды, так и полиимиды хорошо наносятся на капиллярные колонки. Предложен интересный способ повышения термостойкости SE-52 окислением этой фазы воздухом [23]. При работе с окисленным полимером при программировании температуры от 200 до 350° в течение 8 месяцев не было отмечено ухудшения разделения. Ранее испытанные термостабильные природные продукты, не имеющие постоянного состава асфальтены, продукты молекулярной перегонки микро-восков, полифениловые смолы [18—21]—не нашли широкого- применения. [c.85]

Методика анализа свободных аминокислот описана Шустером [79]. На колонке, заполненной лихросорбом ЫНг (размер-частиц 5 мкм), используя градиентное элюирование смесью ацетонитрил— фосфатный буферный раствор, он за 30 мин разделил около 20 аминокислот, входящих в состав растворов для внутривенного введения. Обнаружение свободных аминокислот проводилось по их поглощению при 200 нм, а их идентификация — по времени удерживания. Чтобы подтвердить отнесение пиков, спектры поглощения всех выделенных компонентов сравнивались со спектрами чистых препаратов аминокислот. В этой статье, как и в работах, посвященных анализу аминокислот в виде их производных, содержится утверждение, что картина разделения очень сильно зависит от температуры колонки, а также от условий ее эксплуатации. Согласно данным Шустера, снижение эффективности колонки может привести к тому, что аспарагину, глутамину и глицину на хроматограмме будет соответствовать один пик. Авторы работ [54, 80] исследовали влияние различных факторов на время удерживания компонентов смеси и на разрешающую способность колонки более детально. [c.51]

Для идентификации аминокислот наиболее широко используются их ФТГ-производные. В работе [54] описано разделение двадцати пяти ФТГ-аминокислот градиентным элюированием на колонке с ультрасфер-ODS (рис. 2.3). Как показывают данные этой работы, разрешающая способность колонки сильно зависит от pH и ионной силы элюента, скорости потока, а также от температуры предварительной и основной колонок. По этой причине часто трудно установить точное положение пиков, отвечающих ФТГ-производным основных и кислых аминокислот. Даже незначительное изменение pH сильно сказывается на времени удерживания ФТГ-Asp и ФТГ-Glu, а ФТГ-His и ФТГ-Arg могут при этом элюироваться одновременно. С увеличением pH от 3,5 до 6,0 уменьшается время удерживания производных кислых и основных аминокислот, тогда как увеличение концентрации ацетат-ионов при постоянном значении pH приводит к уменьшению времени удерживания только ФТГ-произвОдных основных аминокислот. Установлено также, что оптимальное разрешение пиков, отвечающих ФТГ-производным метионина, валина, лизина и изолеицина, достигается при скорости потока 1,3 мл/мин. Полный анализ занимает 32 мин, коэффициент вариации составляет от 0,3 для ФТГ-валина до 2,9 для ФТГ-(5-карбоксиметил)цистеина (приведенные значения получены по результатам 27 опытов). [c.54]

Анализ пептидов методом ВЭЖХ выглядел бы значительно (Проще, если бы относительное время удерживания пептида можно было предсказать исходя из его структуры. Решению этой задачи посвящена работа 1[161], автор которой, установил, что даремя удерживания олигомеров аминокислот практически ли- [c.62]

Но этот белок при воздействии кислоты подвергается хаотическому расщеплению появляются новые последовательности, возрастает уровень фона ФТГ-амипокислот. Удерживание малых или гидрофобных пептидов в реакторе значительно возрастает в присутствии полибрена — синтетического полимера, имеющего положительно заряженные четвертичные атомы азота и инертного в условиях анализа последовательности [59, 100]. Мы использовали его при работе с очень большими пептидами, содержащими много неполярных аминокислот. Для некоторых пептидов получены хорошие результаты в то же время мы не заметили существенного влияния добавления полибрена при работе с другими большими фрагментами или целыми белками. Более того, при использовании полибрена мы наблюдали снижение начальных выходов (см. также гл. 15). [c.458]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология