Аминокислоты обнаружение с нингидрином

Нингидрин. Реакция нингидрина (трикетогидринденгидрата) с аминокислотами используется для обнаружения и количественного определения аминокислот. Нингидрин, являющийся сильным окислителем, вызывает окислительное дезаминирование аминокислоты, приводящее к образованию аммиака, двуокиси углерода, соответствующего альдегида и восстановленной формы нингидрина [c.48]

Нингидринная реакция имеет большое значение для обнаружения аминокислот при их качественном и количественном анализе. Большинство аминокислот реагирует с нингидрином, выделяя соответствуюш,ий альдегид, СО и NN3, при этом раствор окрашивается в интенсивный сине-фиолетовый цвет ( =570 нм), растворы оранжевого [c.77]

Реакция аминокислот с нингидрином имеет большое значение для обнаружения аминокислот на хроматограммах и для их [c.33]

Для качественного обнаружения а-аминокислот используют образование хелатов меди (И) н нингидринную реакцию, Нингидрин реагирует с а-аминокислотами, образуя сине-фиолетовый краситель. [c.503]

Для разделения веществ с помощью бумажной хроматографии нарезают полоски бумаги длиной 15— 30 см и шириной несколько сантиметров. На расстоянии 2—3 см одного из концов полоски бумаги наносят каплю исследуемого раствора и место старта отмечают простым карандашом. После испарения растворителя конец бумаги, на который нанесена проба, приводят в соприкосновение с растворителем (ПФ). Затем бумагу и растворитель помещают в закрытый сосуд (обычно цилиндр или стеклянный колпак), чтобы предотвратить потери при испарении. После прохождения растворителя через полоски бумаги ее вынимают, сушат и определяют положение различных компонентов, С этой целью опрыскивают бумагу соответствующими реагентами, которые с компонентами разделенной смеси образуют окрашенные соединения. Для обнаружения аминов или аминокислот, например, действуют раствором нингидрина, который с этими веществами образует соединение голубого или пурпурного цвета. [c.616]

Положение веществ на хроматограммах определяют после их обработки какими-либо реактивами, дающими цветные реакции с изучаемыми соединениями. Для обнаружения органических кислот используют различные индикаторы, для большинства сахаров — аммиачный нитрат серебра, для аминокислот — растворы нингидрина или изатина. После обработки бумаги теми или иными реактивами на хроматограмме появляются окрашенные пятна соответствующих соединений. [c.32]

Проба 0,5 цл 0,1 н. солянокислого раствора, содержащая по 0,5 цг каждой кислоты растворитель метилэтилкетон — пиридин — вода — ледяная уксусная кислота (70 + 15 + 15 4- 2) время анализа 4,5 час обнаружение нингидрином. При наличии метионина необходимо окисление яад-муравьиной кислотой [44]. Для надежной идентификации лейцина и изолейцина параллельно хроматографируют каждую из этих аминокислот в качестве эталонных веществ. [c.402]

Для количественного определения аминокислот и пептидов по приведенным выше реакциям требуется колориметр или фотометр, с помощью которых обнаруживают изменения в свето-поглощении, связанные с протеканием реакций. Поскольку нингидрин наиболее широко используется для обнаружения аминокислот и белков, он послужит основой для дальнейшего обсуждения колориметра. [c.26]

Для обнаружения натрия в присутствии аминокислот рекомендовано использовать нингидрин [786]. Кислотность раствора не влияет на обнаружение в интервале pH 2,0—8,9. Авторы отмечают, что реакцию можно выполнять только на бумаге. [c.34]

Наиболее общим методом определения концентрации пептидов является колориметрия продуктов реакции с нингидрином [2]. Это один из наиболее чувствительных колориметрических методов. Для обнаружения аминокислот и пептидов разработаны как обычный, так и полностью автоматизированный варианты, причем нингидриновый реагент не вызывает коррозии и его можно подавать обычным микронасосом. Реакция идет по свободным аминогруппам, но в некоторых случаях хромофор образуется с низким выходом. Данные по окрашиванию дипептидов можно найти в работе [3]. У всех дипептидов, содержащих в качестве Ы-концевой аминокислоты аргинин, треонин, серин, глутаминовую кислоту, глицин, фенилаланин, метионин, лейцин и тирозин, интенсивность окраски составляет 1,6-10 у лейцина эта величина составляет 1,7-10 . У дипептидов с М-концевым лизином и аспарагиновой кислотой интенсивность окраски несколько выше (на 20 и 29% соответственно), а дипептиды с Ы-концевым гистидином и триптофаном проявляются несколько слабее (42 и 67% соответственно от средней интенсивности). Дипептиды с М-концевым пролином, валином и изолейцином окрашиваются очень слабо [2,7 6,4 и 8,5% от средней (1,6- 10 ) интенсивности]. [c.391]

Аналогичное образование стабильного гидрата наблюдается лучае нингидрина — реактива для обнаружения а-аминокислот м. 11.2.1). [c.187]

Окислительное дезаминирование а-аминокислот под действием трикетона-нингидрина лежит в основе их качественного обнаружения - продукт реакции имеет характерную синюю окраску [c.457]

Если вещества, подвергаемые хроматографированию на бумаге, бесцветны, то для обнаружения образовавшихся зон следует, после высушивания хроматограммы, применить соответствующий реагент, раствором которого обрызгивают бумагу при помощи пульверизатора. В случае хроматографирования смеси аминокислот обычно применяют нингидрин, вещества кислотного или основного характера обнаруживают соответствующим индикатором, иногда пользуются разбавленным раствором перманганата и т. п. Нередко лучшие результаты можно получить при рассматривании хроматограммы в ультрафиолетовом свете. [c.303]

Для обнаружения и количественного определения аминокислот элюат смешивают с раствором нингидрина (I) и эту смесь пропускают через нагреваемую спираль для проведения реакции по схеме (3). Продукт (пурпурный Руэмана) (2) анализируют спектро- [c.261]

Чувствительный метод обнаружения пептидов основан на интенсивной флуоресценции продукта конденсации первичной аминогруппы с нингидрином и фенилацетальдегидом [12]. Флуоресцентный метод в 10—100 раз чувствительнее по сравнению с колориметрическим. Важным преимуществом является также отсутствие реакции с аммиаком и более интенсивная флуоресценция пептидов по сравнению с аминокислотами при разных значениях pH. [c.395]

Проявление. Для обнаружения пятен аминокислот высохшую полоску равномерно смачивают раствором нингидрина и, высушив на воздухе (под тягой), прогревают 2—3 мин в сушильном шкафу при 70—90° С, следя за тем, чтобы полоска не прикасалась к стенкам шкафа. В процессе прогревания на хроматограмме выступают пятна, соответствующие местам локализации аминокислот (рис. 6,в). Нижнее пятно соответствует гликоколу, верхнее — лейцину. Измеряют расстояние от места нанесения аминокислот до середины каждого из пятен и от места нанесения аминокислот до отмеченной карандашом границы, до которой поднялся по бумаге растворитель. Вычисляют коэффициенты подвижности аминокислот (/ /). Для этого делят путь, пройденный аминокислотой от места нанесения, на путь, пройденный растворителем (также считая от места нанесения). [c.41]

Подкисленный или подщелоченный перманганат калия окисляет очень многие соединения, образуя при этом пятна от желтой до белой окраски на фиолетовом фоне хроматограмм. После сушки фон становится коричневым, а через несколько суток даже исчезает. Для обнаружения веществ кислотного или основного характера также пригодны кислотно-основные индикаторы в водном или спиртовом растворе. Раствором динитро-фенилгидразина обнаруживают вещества, содержащие карбонильную группу. В частности, с ним интенсивно реагируют ароматические альдегиды и кетоны. Раствор нингидрина — очень чувствительный реагент на аминокислоты и вообще алифатические амины. [c.95]

По своим задачам хроматография разделяется на аналитическую и препаративную. Аналитическая хроматография преследует цель констатировать наличие нескольких компонентов в анализируемой смеси, идентифицировать эти компоненты (или убедиться, что какие-то из них не соответствуют никакому из ранее исследованных химических соединений) и количественно определить содержание каждого из них. При аналитической хроматографии можно для обнаружения веществ на выходе из колонки, в тонком слое или на бумаге превратить их в какие-либо другие, легче обнаруживаемые вещества. Например, при анализе аминокислотного состава белков на выходе из колонки к бесцветному раствору, вытекающему из колонки, добавляют специальное вещество — нингидрин, которое превращет аминокислоты в синий краситель. В результате этого зоны, содержащие разделенные аминокислоты, выходят в виде окрашенного раствора, измерение оптической плотности которого позволяет определить содержание красителя, а значит, и исходное содержание аминокислоты в каждой зоне. [c.343]

Соединение IV — нингидрин, хорошо известный реагент, ис-ттользуемый для обнаружения и определения а-аминокислот. [c.203]

Для качественного анализа разработан метод тонко-слойной храмотографии на пластинках Силуфол в системе растворителей 95 % этиловый спирт - концентрированный раствор аммиака (16 4,5). Для обнаружения органических кислот пластинки обрабатывают раствором бромкрезолового зеленого. На пластинках проявляется 4 пятна желтого цвета на бирюзовом фоне. Для проявления аминокислот используют раствор нингидрина. [c.51]

Окислительное дезаминирование а-аминокислот под действием 1,2,3-ин-дантриона - нингидрина - лежит в основе их качественного обнаружения. При этом а-аминокислота претерпевает глубокие превращения, а продукт реакции имеет характерную синюю окраску (нингидриновая реакция). Синий цвет обусловлен образованием красителя синий Руэмана [c.515]

Для обнаружения аминокислот и пептидов применяют иингидрин. Сухую хроматограмму (рис. 8.40) пофужают в раствор нингидрина в ацетоне, обычно 0,2%-ный (при этом достагается однородное покрытие бумаги реагентом), сушат непродолжительное время. При комнатной температуре пятна аминокислот проявляются примерно через 1 ч, а их окраска достигает максимальной интенсивности примерно за 8 ч. Пятна пептидов обнаруживаются медленнее. Проявление ускоряется, если ф0мат0фамму нафевают при 50—60 С в сушильном шкафу. [c.336]

Удобной цветной реакцией на аминокислоты является взаимодействие с нингидрином (рис. 12.5) продукт реакции с15льно сопряжен и поэтому интенсивно окрашен. Нингидриковый реактив используют для обнаружения аминокислотных пятен при хроматографии на пластинках или на бумаге, а также для колориметрического количественного определения аминокислот. [c.265]

Трикетоиндан представляет пример 1,2,3-трикетона. Его стабильный гидрат под названием нингидрин используется для обнаружения а-аминокислот (см. раздел 2.2.11.4). [c.373]

Для обнаружения N-мeтилaминoки лoт (которые обычно дают очень слабую окраску с нингидрином) в присутствии свободных аминокислот используют специальный реагент. Смешивают равные объемы 0,33%-ного раствора нингидрина в трет-бутиноле и смеси ледяная уксусная кислота - вода - пиридин (1 5 5). Опрыскивают и нагревают 10-15 мин при 100-110°С. Первичные амины и Н-метиламинокислоты дают пурпурные пятна сравнимой интенсивности. При опрыскивании водным раствором нингидрина, приготовленным путем растворения нингидрина в н-бутаноле, насыщенном водой и содержащем 2% уксусной кислоты, N-мeтилaминoки лoты дают пятна слабой интенсивности. [c.390]

Для обнаружения многих соединений можно опрыскивать пластинки специфичными реагентами, которые окрашивают эти соединения в определенный цвет примером может служить нингидрин, применяемый для обнаружения а-аминокислот. Такие специфичные реагенты обладают большими преимуществами. Во-первых, неразделившиеся соединения, которые не дают окраски с реагентом, не будут мешать анализу. Во-вторых, процесс обнаружения становится одновременно и идентификацией. Если пятно не проявляется соответствующим образом, то это означает, что что-то было сделано неправильно. [c.564]

При получении слоя силикагель — гипс для разделения аминокислот необходимо соблюдать ряд условий [82]. Не следует активировать иластинку нагреванием, достаточно просушить ее на воздухе нри разделении не допускать подъема нчидкости выше 10 см от линии старта. Наносить аминокислоты на пластинку следует в количествах, не превышающих 1—5 Л1кг. При соблюдении этих условий получают воспроизводимые результаты. Смесь аминокислот разделяли в нескольких системах 96 о-ный этанол — вода (70 30) и.нронанол — вода (70 30) н.бутанол — уксусная кислота — вода (80 20 20) фенол — вода (75 25) н.пропано.л — 34%-ный аммиак (70 30) 96%-ный этанол — 34%-ыый аммиак (70 30). Более четкое разделение достигнуто в системах н. бутаиол — уксусная кпслота — вода (60 20 20) и фонол — вода (75 25) (табл. 15) особенно хорошие результаты получены прн двумерном разделении в этих системах. Для обнаружения пятен иластинку опрыскивали реагентом нингидрин — нитрат меди. [c.91]

Обнаружение. Просушенную, еще горячую пластинку опрыскивают 2%-ным раствором нингидрина в 95%-ном и. бутаноле, смешанном с 2 N уксусной кислотой в отношении 95 5. Отмечают пятна проявившихся при этом незамещенных аминокислот, Пептидов и хлоргидра-тов эфиров аминокислот. После этого пластинку нагревают до 120—150°Си опрыскивают насыщенным раствором бихромата калия в концентрированной серной кислоте при этом обнаруживают пятна КБО аминокислот, пептидов и пептидных эфиров (и вместе с ними — пептиды и аминокислоты с фенильными кольцами). [c.99]

Нингидрин — нитрат меди для аминокислот. Для обнаружения аминокислоты сухую иластинку, прогретую 10 мин. при 100°С, опрыскивают свежеприготовленной смесью (50 3) двух растворов раствора 0,2%о нингидрина в 50 мл абсолютного этанола, 10 мл ледяной ук-суспох ( кислоты и 2 мл 2,4,6-коллидина и 1%-ного раствора Си(ХОз)2. ЗНаО в абсолютном спирте,Затем хроматограмму нагревают 4 мин. при 110°С. Обнаруженные пятна следует тотчас пометить. [c.169]

Обнаружено, что левулиновая кислота, элюирующаяся вскоре после начала анализа, дает нингидрин-положительный пик . Это еще раз доказывает, что нингидрин может быть использован для обнаружения не только аминокислот, но и других, не содержащих аминогрупп соединений, элюирующихся из колонки аминокислотного анализатора [114]. [c.25]

Наиболее общим методом их обнаружения, по-видимому, является реакция с нингидрином, но по этой реакции их нельзя отличить ни от нефенольных аминокислот, ни от аминов. Фенолоаминокислоты сочетаются с диазотированным я-нитроанилином, и, таким образом, их можно отличить от алифатических аминокислот. От аминофенолов они отличаются меньшей основностью. [c.64]

Хартел и Плеймикерс [112] использовали бумагу с четвертичными азотными группами для количественного определения цистеиновой кислоты в гидролизате белков. В восходящем методе хроматографии проявляли 0,34 М хлоруксусной кислотой. После проявления высушенную бумагу обрабатывали нингидрином для обнаружения красных пятен и с помощью денситометра определяли количество цистеиновой кислоты в пятне. По мнению авторов, ни одна из аминокислот, найденных в белке, не перекрывалась с цистеиновой кислотой. Точность метода была проверена авторами на шестнадцати определениях этой кислоты в гидролизате 1 г шерсти. Средние значения составили 1,25% при относительной средней ошибке 3%. [c.323]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология