Окрашивание клеток

Беспозвоночные и пойкилотермные позвоночные. У этих животных изменения окраски как быстрые, так и медленные весьма обычны и, как правило, происходят с участием меланинов и меланинсодержащих клеток. Однако рассматривать в этом случае меланины изолированно нельзя, поскольку в окрашивании клеток участвуют также другие пигменты и другие клетки нли типы органелл. Мы обсудим изменения окраски и механизмы таких изменений в гл. 8. [c.275]

Кетопроизводное красного цвета и растворимо в маслах в противоположность синему соединению 0-XV, имеющему ионный характер. Поэтому частично гидролизованный раствор соединения 0-XV используется для разноцветного окрашивания клеток тканей. Свободные жирные кислоты или центры ионной природы в тканях окрашиваются в синий цвет, в то время как капельки жира приобретают красную окраску [310]. [c.567]

В объеме этой главы невозможно описать все пути использования метиленового голубого для биологических и физиологических целей. Он несомненно является одним из самых важных биологических красителей. Его основной характер, а также легкость, с которой его можно применять, не боясь, что он окрасит все подряд, делает его ценным красителем для дифференциации клеточных ядер. Особенно эффективен он для окрашивания клеток дифтерийных бактерий. Он применяется для витального окрашивания нервной ткани, для которого был предложен новый способ, состоящий в продолжительной внутривенной перфузии его [418]. Он используется как индикатор окисления—восстановления в анализе молока [419], [c.584]

Приготовление растворов красителей. При иополь зовании метода комбинированного окрашивания клеток зеленых и синезеленых водорослей используются следующие красители. [c.181]

При окрашивании клеток зеленых водорослей каждой из этих красок в отдельности (добавление к 1 мл суспензии водорослей 1 мл красителя) происходит перекрашивание мертвых клеток при добавлении метиленовой синей яе в ярко синий цвет, а в фиолетовый, возникающий при смешении двух красок. [c.182]

Низшие организмы. Сернокислое железо не оказывает на низшие организмы сколько-нибудь пагубного действия. Половина спирогир после 24-часового пребывания в 0,1% растворе железного купороса погибает, 0,01 %-ный (100 мг/л) раствор действует в 20 раз слабее. Впрочем, через 6 дней и в этом растворе половина водорослей погибает, причем происходит сокращение плазмы и окрашивание клеток в сине-черный цвет. В 0,01 %-ном растворе хлористого железа при 12-часовой экспозиции спирогира не погибала, но волокна начали распадаться на отдельные кусочки. Через шесть дней произошло отмирание значительной части клеток. Смертельная концентрация железного купороса для дрожжей составляет 0,2—0,5%. Таким образом, хлористое железо не является сильным ядом для дрожжей. (В пересчете на безводное сернокислое железо вышеназванные цифры нужно сократить приблизительно на половину) [8]. [c.594]

Правильность выделения специальной группы реовирусов стала очевидной, когда в начале 60-х гг. обнаружили уникальные особенности структуры реовирусной РНК. Сначала заметили, что при окрашивании клеток, зараженных реовирусами, акридиновым оранжевым наблюдается флуоресценция в зеленой области спектра (ортохроматическая), а не в оранжевой (мета-хроматическая), характерной для одноцепочечной РНК. Акридиновый оранжевый обладает высоким сродством к одноцепочечным нуклеиновым кислотам и окрашивает их метахроматически. Поскольку к тому времени уже было известно, что реовирусы содержат РНК, был сделан вывод, что эта РНК двухцепочечная [107]. Дальнейшие исследования показали, что реовирусная РНК состоит из комплементарных цепей, образующих двойную спираль [102, 157]. Для нее характерны высокая температура плавления и малый температурный интервал денатурации, устойчивость к панкреатической рибонуклеазе и иная, чем у одноцепочечной РНК, плавучая плотность. Определение нуклеотидного состава реовирусной РНК показало, что она содержит одинаковое число пуриновых и пиримидиновых оснований. Двухцепочечный характер реовирусной РНК был подтвержден также данными рентгеноструктурного анализа [16, 102]. [c.266]

Таблица 6.7. Окрашивание клеток

Вопрос о структурной организации цитоплазмы уже очень давно вызывает споры среди цитологов. Ранние микроскопические наблюдения над живыми клетками показали, что цитоплазма-это вязкая жидкость, консистенция которой может изменяться от более жидкой до состояния, напоминающего пластичную твердую массу. В период между 1870 и 1885 гг. благодаря развитию методов фиксации и окрашивания клеток широко распространилось мнение, что цитоплазма содержит разветвленную трехмерную сеть белковых нитей. Эту точку зрения энергично оспаривали некоторые гистологи, утверждавшие, что наблюдаемая после фиксации сетчатая структура цитоплазмы есть не что иное, как артефакт-результат коагуляции белков в процессе приготовления препаратов. Сейчас, спустя почти 100 лет, все еще можно слышать подобные возражения, хотя речь идет уже о значительно более тонких нитях, увидеть которые можно только с помощью электронного микроскопа. [c.126]

Для простого окрашивания клеток микроорганизмов чаще всего пользуются фуксином, генциановым фиолетовым, метиленовым синим. Фиксированный препарат помещают на параллельные стеклянные рейки, лежащие над кюветой, и заливают красителем на 1—3 мин. Следят за тем, чтобы во время окрашивания раствор красителя на мазке не подсыхал. В случае необходимости на мазок наливают новые порции красителя. [c.101]

Прямое окрашивание клеток также служит одним из лучших контролей специфичности антисыворотки. Нередко антисыворотки, достаточно специфичные в иммунодиффузии или в реакции гемагглютинации, еще содержат примесные антитела, выявляемые в реакции непрямой иммунофлуоресцеиции или другим, более чувствительным методом. [c.172]

Двойное окрашивание клеток, осевших на стекле, можно проводить так же, как и в суспензии, двумя антисыворотками, меченными разными флуорохромами, одномоментно или в два эта-ца. Одномоментное окрашивание возможно только с такими антисыворотками, которые не взаимодействуют друг с другом. При этом очень важно, чтобы реагенты были очищены с помощью иммобилизованных антигенов, так как присутствие в антисыворотках свободного антигена или растворимых комплексов антиген — антитело (при избытке антигена) приводит к взаимной инактивации реагентов. [c.178]

Розетки в каждой фракции необходимо подсчитывать до отмывания, так как во время центрифугирования розетки могут распадаться. Для этого из каждой фракции отбирают по 0,5 мл суспензии и для окрашивания клеток к 100 мкл этой пробы прибавляют 10 мкл насыщенного профильтрованного раствора кристаллического фиолетового в ЗФР затем каплю суспензии известного объема наносят на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. Розеткой считается единичная клетка с ядром, окруженная по меньшей мере четырьмя эритроцитами. Подсчитав розетки, вычисляют их количество во всем объеме фракции. [c.260]

Окрашивание клеток и исследование их морфологии [c.262]

Некоторые микроорганизмы (спирохеты) и отдельные структуры (внеклеточная слизь), плохо выявляемые при помощи позитивных красителей, становятся хорошо заметными при окрашивании препаратов негативными красителями. Споры без соответствующей обработки не окрашиваются, поэтому при окрашивании клеток бацилл позитивными красителями они окрашиваются как бы негативным способом имеют вид преломляющих свет включений в вегетативных клетках. [c.18]

Феносафранин (сафранин В экстра) (Ф-ХХИ1) обычно не используется для крашения материалов или окрашивания клеток. Однако он был предложен в качестве адсорбционного индикатора для титрования ионов галоидов нитратом серебра [189], а также в качестве фотографического ослабителя [190]. Соединение Ф-ХХП1 метахроматично, т. е. бывает различного цвета в зави- [c.546]

Установлена зависимость окрашивания клеток в разные цвета от способа флуорохромировання, концентрации флуорохрома, концентрации бактериальной суспензии, способа щиання и интенсивности обеспечения культуры кислородом и т. п., а не от возраста клетки. [c.110]

Цитологическое выявление бактериального ядра. Способность ДНК к специфическому окрашиванию лежит в основе реакции Фёльгена на ядерное вещество, В результате взаимодействия свободных альдегидных групп с бесцветной фук-синсернистой кислотой появляется фиолетовая окраска, свойственная основному фуксину. Для удаления из клеток РНК и освобождения альдегидных групп де-зоксипентозы, входящей в состав ДНК, клетки предварительно обрабатывают горячей разведенной H l (4 мин в 1 М НС1 при 60°С). Лучшие результаты получались при окрашивании клеток после такой же предварительной обработки ос- [c.30]

Чем больше плотность клеток в исследуемом материале, тем меньше должен быть фильтруемый объем, и наоборот. Клетки микроорганизмов, осевшие на фильтре, окрашивают карболовым эритрозином. Для этого фильтр помещают нижней стороной в чащку Петри на фильтровальную бумагу, увлажненную красителем, чащку закрывают крышкой и оставляют на 3—5 ч или даже на сутки. Для равномерного окрашивания клеток мембранный фильтр должен плотно прилегать к бумажному фильтру с эритрозином. Затем мембранный фильтр отмывают от красителя, перекладывая его в чашки Петри с фильтровальной бумагой, обильно смоченной дистиллированной водой, до тех пор, пока он не перестанет окрашивать влажную фильтровальную бумагу. После отмывания фильтр высушивают на воздухе и готовят препарат для микроскопирования. На предметное стекло капают иммерсионное масло и помещают на него окрашенный мембранный фильтр так, чтобы клетки микроорганизмов были сверху. На поверхность мембранного фильтра наносят еще каплю иммерсионного масла к покрывают фильтр покровным стеклом. [c.121]

Для определения АГ использование АТ, конъюгированных с флуоресцентной или ферментной меткой, — часто в качестве второго антиглобулино-вого реагента — для окрашивания клеток и тканей. В случае применения фермента необходим нераство римый, окрашенный субстрат Для изучения и разделения клеточных популяций [c.29]

Фиксация с последующим окрашиванием клеток и тканей— один из наиболее распространенных способов подготовки объектов к исследованию в цитологии и эмбриологии. Под действием химических фиксаторов (этиловый спирт, формалин, уксусная кислота и др.) в клетке прекращаются жизненные процессы, а ее химические компоненты осаждаются. После фиксации объект промывают. Дальнейшая обработка зависит от типа приготовления препарата. Можно окрасить материал сразу для изготовления временного препарата. Для получения тонких срезов толщиной в несколько микрометров объект обезвоживают, заключают в парафин и режут на микротоме. Срезы наклеивают на предметные стекла, освобождают от парафина и окрашивают. Красители подбирают так, чтобы повысить контрастность изображения отдельных структур, а в ряде случаев и выявить их химический состав, например ДНК, РНК, белки и др. Точное содержание химических веществ определяют на приборе — цитофотометре. [c.54]

С помощью пары антиглобулиновых сывороток, меченных разными флуорохромами, можно проводить двойное окрашивание клеток и выявлять иммуноглобулины разных классов или подклассов. Двойное окрашивание лишь тогда дает надежные и четкие результаты, когда из двух видов молекул разной специфичности только один скапливается на одном из полюсов клетки (образование шапочки , см. разд. III). Известно, что молекулы разных иммуноглобулинов, находясь в одной и той же клетке, передвигаются в плоскости ее мембраны независимо друг от друга (см. Rowe et al., 1973 Knapp et al., 1973). Поэтому скопление [c.172]

Для образования розеток с бараньими эритроцитами, обработанными нейрамииидазой, использовались клетки из селезенки мышей ВВА/2. Розетки были разделены по скорости оседания. Число клеток с ядрами на 1 фракцию выражено в процентах к общему числу таких клеток, взятых для разделения. Число розеток на 1 фракцию определяли после окрашивания клеток метиловым фиолетовым в суспензии без отмывания, Б. Для приготовления фиксированных и окрашенных препаратов из каждой фракции брали пробу 0,5 мл препараты готовили как описаио в разд. IV, Е. Определяли число эритроцитов иа каждую РОК каждая точка представляет среднюю величину ие меиее чем для 15 розеток. [c.263]

Хотя во всех описанных ниже методах в качестве тест-культуры взяты клетки Vero, однако можно использовать с этой целью ВНК-21, LL MK2, РК15 и другие линии клеток млекопитающих. Первый метод оптимален при исследовании большого числа образцов его легко адаптировать для работы с микропланшетами для титрования, как описано здесь, или с планшетами или чашками большего размера, например для определения морфологии бляшек. В этом случае для титрования используют карбоксиметилцеллюлозу (КМЦ). Далее описан еще один метод, предполагающий использование агарозы и окрашивание клеток нейтральным красным. Он особенно полезен при работе с вирусными клонами, когда необходимо, чтобы бляшки содержали инфекционный вирус. [c.85]

Классический метод бляшек для определения инфекционности вирусов животных, впервые описанный Дюльбекко [15], заключается в адсорбции вируса на монослое чувствительных клеток с последующим добавлением содержащей агар культуральной среды, затвердевающей при охлаждении. После инкубации в течение определенного промежутка времени при окрашивании клеток нейтральным красным становятся видны бляшки. [c.116]

Фокусы морфологической трансформации на клетках ЫШЗТЗ при трансформации препаратами тотальной ДНК начинают формироваться через 18—20 сут. Выглядят они как зоны многослойного роста на монослое нетрансформированных клеток. В центре фокуса клетки растут с очень большой плотностью и имеют округлую форму, по краям можно видеть хорошо распластанные радиально ориентированные клетки. Фокусы могут образовываться с разной скоростью, варьировать в размерах и по морфологии. Число фокусов на чашке подсчитывается после фиксации смесью метилового спирта с уксусной кислотой (3 1) и окрашивания клеток кристаллвиолетом [c.224]

Стандартный метод Американской ассоциации здравоохранения не предусматривает окрашивания клеток фитопланктона, Но, если в качестве фиксатора используют раствор Люголя, он сам до некоторой степени окрашивает эти кЛётки. Оуэн и др. (164], а также Фурнье [76] описывают методы окрашивания, позволяющие повысить контраст изображения. Метод Оуэна и др., разработанный для пресноводного фитопланктона, включает в себя фильтрацию через це 1люлозную мембрану с разме-,ром пор 0,45 мкм и последующее окрашивание кислым фуксином. Фитопланктон на мембране окрашивается в течение 20 мин красителем из 1 г кислого фуксина в 100 мл воды, содержащей 2 мл уксусной" кислоты. После окрашивания мем-.брану (все еще расположенную в фильтродержателе) промывают водой и затем обесцвечивают и обезвоживают, промывая последовательно 50-, 90- и 100 %-ным пропанолом (который не действует на ацетилцеллюлозные мембраны, но действует на нитроцеллюлозные). Затем мембрану осветляют ксилолом и оставляют ее на фильтродержателе в течение 10 минут. После этого мембрану вынимают из фильтродержателя и во влажном виде помещают в консервирующий раствор. В качестве последнего рекомендуется Пермаунт, который перед пропиткой мембраны нагревают на предметном стекле в течение 10 секунд при температуре 55 "С. Подготовленный таким образом препарат можно длительно хранить при этом края покровного стекла нужно загерметизировать лаком. При работе правильно подготовленным препаратом можно использовать иммерсионный объектив. Авторы особенно рекомендуют этот метод для изучения диатомовых водорослей и утверждают, что. его можно применять также и для других видов фитопланктона. [c.220]

В разд. 8.5 и 8.7 мы описали методы флюорохромного окрашивания микробных клеток, задержанных мембранными фильтрами. Для окрашивания клеток, содержащих антиген, комплементарный антителу, можно также использовать флюоресцирующие антитела. Эта процедура является очень простой. Клетки, задержанные на черной мембране (при этом нужно убедиться, что собственная флюоресценция мембраны незначительна), окрашивают, поместив на нее каплю соответствующего флюоресцирующего антитела, разбавленного до необходимой концентрации, чтобы исключить неспецифическое окрашивание. Мембрану, расположенную на предметном стекле, выдерживают во влажной атмосфере (например, в чашке Петри с влажным куском фильтровальной бумаги) около часа, затем мембрану промывают фосфатно-буферным солевым раствором и заключают под покровное стекло в глицерин с буферным раствором. Подсчет ведут с помощью эпифлюоресценции, как описано выше. [c.234]

Перед проведением анализа контролируют люмииесцирующую сыворотку устанавливают ее рабочее разведение при определенной температуре (37°С) и экспозиции окраски (в течение 15—20 мин) и [Проверяют па специфичность. Рабочее разведение сыворотки уста- Павливают путем определения красящего титра — предельного разведения сыворотки, при котором происходит достаточно яркое (не ниже, чем на 4-4-4-) иммуноспецифическое окрашивание клеток штеропатогенпых кишечных палочек. Рабочее разведение обычно [устанавливают в 2 раза ниже красящего титра. [c.367]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология