Этилимид малеиновой кислоты

N-Этилимид малеиновой кислоты, взятый в избытке, реагирует с тиолсодержащими соединениями стехиометрически. По оптической плотности реакционного раствора, измеряемой при 300 нм, можно определять содержание тиольной группы. [c.565]

N-Этилимид малеиновой кислоты при значениях pH, близких к 7, легко реагирует с тиольными соединениями [27, 28]. Была измерена скорость реакции N-этилимида малеиновой кислоты и восстановленного глутатиона в эквимольных количествах спектро-зотометрическим методом по уменьшению поглощения при 300 нм 28], однако в этих условиях реакция не доходит до конца. Робертс и Раузер [29] показали, что при избытке N-этилимида ма- [c.564]

Восстановленный глутатион, N-этилимид малеиновой кислоты, гидрохлорид цистеина, меркаптоэтанол, гликолевая кислота (99%-ная), гомоцистеин, кр 1стал-лический яичный альбумин, эрготионеин и тиолгистидин. Прокипяченный водный экстракт печени крысы готовили, как указано в работе [30]. N-Этиламид малеиновой кислоты получали, прибавляя 0,3 мл 0,5 н. раствора гидроксида натрия к 1 мл 0,01 М раствора N-этилимида малеиновой кислоты, выдерживая раствор 5 мин. Перед проведением реакции глутатиона с N-этилимидом малеиновой кислоты для нейтрализации к пробе добавляли 6 мл 0,1 М фосфатного буферного раствора (pH = 6,8). [c.565]

N-Этилимид малеиновой кислоты хранили в холодильнике определяли молярный коэффициент поглощения образца, дважды перекристаллизованного из этанола. Можно применять продажный N-этилимнд малеиновой кислоты высокой чистоты, так как ничтожные примеси в реактиве или продукты разложения, образующиеся при его растворении, не реагируют с тиольными группами. [c.565]

Твердые тиольные соединения высушивали до постоянной массы в вакууме при 55 °С. Жидкие соединения разбавляли до требуемой концентрации. Перед реакцией с N-этилимидом малеиновой кислоты определяли концентрацию растворов тиолов иодометрическим титрованием. Было найдено, что содержание глутатиона составляло 99,4%, а гидрохлорид цистеина содерл ал 101,7% цистеина из-за частичной потери хлористого водорода [31]. Гомоцистеин имел чистоту 98,5%. Тиолгистидин и эрготионеин при кислотном иодометрическом титровании проявляли очень малое восстанавливающее действие, что соответствовало исследованиям эрготионеина в работе [32]. [c.565]

Реакцию проводили обычно в 0,1 М фосфатном буферном растворе (pH = = 6,8) с 0,001 М раствором N-этилимида малеиновой кислоты и тиольными соединениями в концентрациях 0,0001—0,0009 М. По окончании реакции определяли оптическую плотность раствора при 300 нм. Затем измеряли оптическую плотность 0,001 М раствора N-этилимида малеиновой кислоты в буферном pa i-творе также при 300 нм. Для холостого определения служили растворы, содержавшие все компоненты, кроме N-этилимида малеиновой кислоты. Разность оптических плотностей растворов прореагировавшего и непрореагировавшего N-этилимида малеиновой кислоты делили на молярный коэффициент поглощения соединения частное равнялось молярной концентрации тиольного соединения в пробе. [c.565]

Спектрофотометрические измерения проводили с помощью спектрофотометра Бекмана, используя парные кварцевые кюветы с толщиной слоя I см. Концентрации реагирующих веществ можно менять, однако следует сохранять условие, чтобы количество N-этилимида малеиновой кислоты составляло 10%-ный избыток по отношению к тиольному соединению. Реакцию можно вести в нейтральной или кислой среде [29], хотя процесс несколько быстрее протекает в нейтральной среде [28]. [c.565]

Молярный коэффициент поглощения N-этилимида малеиновой кислоты при 300 нм составляет 620, что согласуется с данными Грегори [28], полученными при 302 нм. [c.565]

Табл1ща 18.11. Реакция N-этилимида малеиновой кислоты с глутатионом в присутствии N-этиламида малеиновой кислоты [c.566]

Относительное снижение поглощения N-этилимида малеиновой кислоты в результате реакции его с глутатионом в различных концентрациях точно равно отношению концентраций глутатиона и N-этилимида малеиновой кислоты. Подобные же результаты в пределах погрешности опыта были получены для гомоцистеина, меркаптоэтанола, цистеина и тиогликолевой кислоты. На результат определения не влияет присутствие 18 различных аминокислот, дюпонола (Дюпон), аскорбиновой кислоты, глюкозы и вер-сена. [c.566]

N-Этилимид малеиновой кислоты в 0,1 М фосфатном буферном растворе (pH = 0,8) медленно самопроизвольно разлагается даже при хранении в холодильнике. Продуктом разложения является N-этиламид малеиновой кислоты, который не обнаруживает поглощения при 300 нм. Если бы N-этиламид малеиновой кислоты реагировал с тиольными группами, следовало бы пользоваться свежеприготовленными растворами N-этилимида малеиновой кислоты. [c.566]

Данные табл. 18.11 показывают, что в условиях опыта N-этиламид малеиновой кислоты с тиольными группами не реагирует. Оптическая плотность N-этилимида малеиновой кислоты в присутствии глутатиона в постоянных количествах уменьшается на одну и ту же величину А при переменных количествах N-этил-амида малеиновой кислоты (опыты 3—6), причем это уменьшение остается таким же, как и для свежеприготовленных растворов N-этилимида малеиновой кислоты (опыты 1 и 2). [c.566]

В табл. 18.12 приведены результаты определения тиольной группы в депротеинированной вытяжке печени крысы. Содержание тиольной группы в 2 мл вытяжки вдвое больше, чем в 1 мл (опыты 1—3), что согласуется с законом Ламберта — Бера. Предварительная обработка вытяжки п-хлормеркурибензоатом натрия в течение 10 мин подавляет полностью реакцию с N-этилимидом малеиновой кислоты, указывая на то, что этот реактив реагирует в вытяжке только с тиольными группами. При добавлении к вытяжке глутатиона (опыты 6 и 7) он определяется количе- [c.566]

Бенеш и др. [34] успешно использовали N-этилимид малеиновой кислоты для обнаружения тиолов и сложных эфиров тиолов в методе хроматографирования на бумаге в неводной сильно ш.е-лочной среде. В нейтральной водной среде сложные эфиры тиолов и эрготионеин не реагируют с N-этилимидом малеиновой кислоты. [c.568]

Таблица 18.12. Результаты колориметрического определения тиольных групп в вытяжке печени крысы по реакции с N-этилимидом малеиновой кислоты

Расгвор для холостого опыта содержал все компоненты, за исключением N-этилимида малеиновой кислоты. [c.567]

В 2 мл фильтрата пробы гемолизованной крови теловека, разбавленной в 5 раз 57о"НОЙ метафосфорной кислотой, по реакции с N-этилимидом малеиновой кислоты было найдено 0,75 мкмоль тиольной группы, а в 4 мл—1,48 мкмоль. Как и нри анализе вытяжки печени, глутатион, прибавленный к фильтрату крови, можно также количественно определить по реакции с N-этилимидом малеиновой кислоты. Реакцию с фильтратом крови проводили с добавлением 4 мл 1 М фосфатного буферного раствора (pH = 6,8) для нейтрализации метафосфорной кислоты, что не оказывало влияния на коэффициент поглон ения N-этилимида малеиновой кислоты. [c.567]

Продажный кристаллический яичный альбумин реагирует с N-этилимидом малеиновой кислоты только после денатурирования дюпонолом. Найдено, что при действии на 1%-ный раствор кристаллического яичного альбумина 0,001 М раствора yV-этил-имида малеиновой кислоты в присутствии 0,5% дюпонола в течение 15 мнн реагируют 2,2 экв тиольной группы с 1 моль яичного альбумина (предполагаемая молекулярная масса 46 000). Через [c.567]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология