Хроматина центрифугирование

Фиг. 19. Кинетика включения метки в РНК ядер, выделенных из стеблей гороха, в качестве радиоактивного предшественника РНК ядра использовали цитозин. После инкубации в течение 10 мин клетки подвергали охлаждению, для того чтобы остановить включение предшественника. Затем клетки осаждали из раствора центрифугированием и ресуспендировали в среде, содержащей 1000-кратный избыток немеченого предшественника. Синтез РНК затем продолжался при стандартной температуре. В течение первых 10 мин метилась РНК ядра. В течение последующего периода прослеживалась судьба этой меченой РНК. I — РНК ядрышка II — РНК хроматина III — РНК ядерных рибосом [43].

В экспериментах с глобулином семян гороха было показано, что репрессированный ген синтеза информационной РНК, ответственной за образование глобулина семян, может быть дерепрессирован путем удаления гистона. Отщепление гистона достигается помещением хроматина в раствор высокой ионной силы, в которой ионные связи гистона с ДНК ослабляются. В этих условиях ДНК путем центрифугирования может быть отделена от гистона. Однако в природе дерепрессия генов едва ли осуществляется при посредстве подобного механизма. Во-первых, необходимая для этого концентрация солей (0,5—2М) превышает физиологические концентрации во-вторых, мы знаем, что в природе дерепрессия одного гена или группы генов с помощью физиологического механизма может происходить без одновременной дерепрессии всех репрессированных генов. При использовании механизма концентрированных солевых растворов подобная локализация эффекта дерепрессии была бы фактически невозможной. К тому же у нас уже имеются некоторые данные, говорящие о том, что репрессия и дерепрессия генов в естественных условиях осуществляются за счет действия механизма иного рода. Оказалось, что определенные низко- [c.525]

Благодаря использованию метода скоростного центрифугирования удалось установить химический состав хромосом. Для этого из них выделяют хроматин. Очищенный хроматин имеет химический состав и свойства, характерные для хромосом. Химический анализ показал, что хроматин состоит из ДНК, РНК и сопутствующих им белков. Основную массу белков составляют гистоны — [c.30]

Моно- и ОЛИ ногу клеосомы можно выделить, например, центрифугированием в градиенте сахарозы продуктов расщепления хроматина нуклеазой. Еще более тонкое фракционирование хро-матиновых частиц получают с помощью гель-электрофореза, при котором разделяются нуклеосомы с разной длиной линкера или различающиеся по белковому составу. [c.244]

Структуру эукариотических хромосом (хроматина) изучают с помощью различных подходов, в первую очередь биохимических и электронно-микроскопических. Биохимические исследования обычно основаны на выделении препарата ядер. Ядро — самая крупная и тяж лая (по плотности) органе чла клеток. Препарат ядер довольно легко получить. Для этого ткань или клетки разрушают и центрифугируют, а затем очищают ядра, пропуская их через плотный раствор сахарозы с помощью повторного центрифугирования. Полученные ядра стабилизируют в процессе выдатения двухвалентными катионами (Са- или Mg- , полиаминами, а также 0,15. М Na l, т. е. близкой к физиологической ионной силой. Такой препарат ядер сохраняет многие прижизненные свойства, в том числе способность синтезировать РНК и ДНК- [c.234]

При такой обработке разрушаются не только клеточные стенки, но и ядерные мембраны и происходит освобождение субъядерных компонентов. При такой обработке сильно повреждаются также ядрышки. Профильтрованный гомогенат затем центрифугируют нри таких скоростях, которые недостаточны для осаждения митохондрий (4000 g в течение 30 мин). Полученный осадок содержит крахмальные зерна, на которые наслоены хроматин и фрагменты ядер. Хлоропласты и фрагменты хлоропластов, если они присутствовали в исходной ткани, также обнаруживаются в этом осадке. Студенистый слой отделяют от нижележащего крахмального слоя, ресуспендируют в среде для растирания и вновь центрифугируют несколько раз для удаления крахмала. Неочищенный хроматин затем очищают центрифугированием в градиенте плотности сахарозы (0,0— 1,8 М). Для полного осаждения хроматина необходимо центрифугирование в течение 2 час при 22 ООО об/мин на 8р1псо 8 У 25 [25]. Нехромосомный материал удаляется главным образом на этой последней стадии, которая может быть повторена. Непосредственное выделение хроматина из тканей не требует большой затраты времени и позволяет получить до 95% присутствовавшего в исходной ткани хроматина, причем степень чистоты препарата в данном случае такая же, какая достигается и нри выделении хроматина из изолированных ядер. [c.31]

Фиг. 16. Схема опыта по получению растворимого нативного нуклеогистона из хроматина. Хроматин подвергают гидродинамическому разрыву при этом полужесткие палочки ДНК, полностью связанные с гистоном, отщепляются от хромосомной структуры. Остаточный хроматин удаляют центрифугированием растворенный нативный нуклеогистон остается в надосадочной жидкости.

Из развивающихся семядолей гороха и из вегетативных ночек растений гороха был выделен хроматин. Напомним, что семядоли синтезируют глобулин семян гороха, тогда как вегетативные почки не синтезируют этот белок. К каждому из этих двух препаратов хроматина добавляли очищенную РНК-полимеразу и смесь четырех рибонуклеозидтрифосфатов. В такой системе, как это уже отмечалось в гл. 4, хроматин функционирует в качестве матрицы для синтеза информационной РНК. Затем к обеим системам, способным синтезировать информационные РНК, добавляли рибосомную систему синтеза белка, зависящую от информационной РНК. Таким образом, в этой смеси информационная РНК, сиптезироваппая на хроматине, использовалась для функционирования рибосомной системы синтеза белка, причем количества синтезированного растворимого белка были довольно велики. После инкубации рибосомы и хроматин удаляли из системы центрифугированием, а избыток меченой аминокислоты удаляли путем диализа. Долю глобулина в смеси вновь синтезированных растворимых белков определяли с помощью имму-нохимического метода, как это описапо выше для случая синтеза белков в различных органах [c.524]

Вопрос о том, содержит ли хроматин нуклеинат гистона или же какое-либо другое специфическое соединение гистона с нуклеиновой кислотой, еще окончательно не разрешен. При экстракции зобной железы водой и последующем центрифугировании экстракта с большой скоростью из железы был получен нуклеопротеид, нерастворимый в изотонических солевых растворах [288]. Этот нуклеопротеид получил название генопротеина Т. Тредполагают, что как растворимый в солевых растворах нуклеопротеид, так и нерастворимый предобразованы в клетках железы. [c.264]

Связь между строением хроматина и временем репликации ДНК подтверждается данными о времени репликации отдельных генов. Популяцию растущих клеток метили бромдезоксиуридином, после чего клетки тут же разделяли по размеру центрифугированием. Так как рост клеток связан с клеточным циклом, клетки большего размера окажутся старше , и их ДНК, таким образом, будет помечена на более поздней стадии S-фазы. Из клеток каждого типа выделяли ДНК, меченную BrdU, и гибридизовали ее с серией известных ДНК-зондов, чтобы определить, какие гены она содержит. Поскольку ДНК, в состав которой входит BrdU, более плотная, ее легко можно отделить от обычной ДНК пу- [c.139]

В начале главы были указаны причины относительно редкого использования глицерина для создания градиентов плотности при зонально-скоростном центрифугировании. Главным его недостатком является более высокая вязкость растворов по сравнению с растворами сахарозы той же плотности. Однако недавно повышенная вязкость концентрированных растворов глицерина была использована для фракционирования относительно тяжелых оЛигонуклеосом. Хроматин после обработки его микрококковой нуклеазой фракционировали в градиенте 7,6— 76% (по объему) глицерина при 130 ООО g в течение 16 ч. Профиль олигонуклеосом от моно- до пентамеров равномерно распределялся по этому градиенту [Rennie, 1979]. [c.239]

Недав но [Murphy et al., 1980] равновесным центрифугированием в градиенте плотности метризамида удалось отделить но-воси нтезированный, импульсно меченный хроматин от основной массы хроматина. Новосинтезированный хроматин отличается более высокой плотностью, что, по-видимому, объясняется более плотной упаковкой в нем нуклеосом. [c.274]

Согласно одной из гипотез, избирательность экспрессии геиов достигается маскированием и демаскированием различных участков генома. Эта гипотеза подтверждается данными, полученными на изолированном хроматине. Для выделения хроматина ткань гемогенизируют, гомогенат фильтруют и подвергают дифференциальному центрифугированию. -Выделенный хроматин может синтезировать РНК в присутствии трифосфатов четырех нуклеозидов РНК (гуанина, аденина, цитозина и урацила), а также РНК-полимеразы. Гибридизируя полученную РНК с де-протеинизированной протеазами ДНК, можно узнать, каким последовательностям она комплементарна. С помощью этого-метода можно определить, какая доля ДНК транскрибируется и какая РНК на ней синтезируется. [c.462]

Рис. 12.2. . Характеристика мультимеров нуклеосом. А. Разделение дискретных [рупп частиц, полученных после обработки микрококковой нуклеазой хроматина из печени крысы при центрифугировании в градиенте плотности сахарозы. Б. Электронные микрофотографии частиц из фракций, соответствующих четырем пикам в г радиенте сахарозы видны мономеры, димеры, тримеры и тетрамеры нуклеосом. Д. Из фракций, соотвстствую1цих кажло.му пику

Справочник химика 21

Химия и химическая технология