Методы определения ферментативной активности

Биологически важным методом определения ферментативной активности и ее специфичности в гистохимической системе является изучение свойств фермента, проводимое на изолированной ткани. Здесь имеется две [c.175]

Петров К. П. Рефрактометрический метод определения ферментативной активности зерна, муки и продуктов их переработки,— В сб. Биохимия зерна и хлебопечения. М., Изд-во АН СССР, 1960, с. 283. [c.219]

С целью снижения погрешности методов определения ферментативной активности необходимо проводить определение ферментативной активности препарата в сравнении со стандартным образцом. Стандартным образцом является высокоочищенный ферментный препарат, качество которого отвечает требованиям соответствующей нормативно-технической документации. [c.29]

Предложены также приемы оценки деятельности почвенных микроорганизмов по уровню азотфиксации, нитрификации. Однако среди других методов более привлекательны методы определения ферментативной активности почвы. Общий характер имеет величина каталазной активности, используют также полифенолоксидазную и дегидрогеназную активность. Комплекс надежных и достаточно простых методов определения различных видов ферментативной активности почв разработан Р.Х. Хазиевым, А.Ш. Галстяном и С.А. Абрамян. [c.221]

Физические методы определения ферментативной активности биологических, жидкостей имеют то преимущество перед другими, что они позволяют вести непрерывное наблюдение за ходом процесса. Эти методы широко используются при точных работах по изучению кинетики ферментативных процессов. [c.124]

Самое большое преимущество определения молекулярной массы методом гель-хроматографии — отсутствие необходимости в тщательной очистке исследуемого соединения. Самое сложное в этом случае подобрать приемлемый метод обнаружения (например, метод определения ферментативной активности и т. д.). [c.390]

При определении активности ферментов на электрофореграммах должны выполняться те же условия, что и при определении ферментов в тканях и клетках. Поэтому многие методы, применявшиеся первоначально в гистохимии, используют в оригинальной или модифицированной форме для локализации ферментов в гелях и других поддерживающих средах. В то же время некоторые методы определения ферментативной активности [c.279]

Экспериментальные методы определения ферментативной активности. В иммуноферментном анализе наибольшее распространение получил фотометрический метод регистрации активности ферментов. В качестве субстратов ферментов при этом используют такие вещества, продукты превращения которых являются окрашенными соединениями или, наоборот, окраска самих субстратов изменяется в процессе реакции. [c.59]

При выделении фермента наибольшая часть времени затрачивается на определения активности (и белка). Поэтому при выборе соответствующих тестов ищут таких, которые могут обеспечить максимальную скорость анализов. В этих случаях быстрота определений более важна, чем их высокая точность (основные методы определения ферментативной активности рассматривались в гл. 3). Количество белка можно установить различными путями на основании химических, физико-химических и даже чисто физических способов, но чаще всего его определяют а) сжиганием вещества и определением азота но Кьельдалю б) биуретовой реакцией в) по методу Лоури, совместным использованием биу-ретового и фенольного реактивов. [c.139]

Описанный метод определения ферментативных активностей кислой а-глюкозидазы после электрофореза [c.112]

При периодическом способе определения активности фермент инкубируют с его субстратом в течение определенного периода времени, и затем реакцию останавливают каким-либо образом. Измеряют количество образовавшегося продукта исходя из предположения, что скорость реакции изменялась линейно в течение всего периода инкубации начиная с нулевого времени. Первое, что нужно проверить при использовании периодического метода, это предположение о линейности. Одна точка может дать заниженное значение начальной стационарной скорости реакции, если к тому времени, когда реакция была остановлена, ее скорость уже снизилась (рис. 8.4). С другой стороны, наличие лаг-периода в ходе ферментативной реакции также даст заниженное значение скорости, если ее определение основано на данных одного измерения. Чтобы проверить линейность изменения скорости реакции, необходимо провести серию инкубаций в течение разных периодов времени. Это особенно важно в случае использования неочищенных экстрактов тканей, так как при этом возможны многие побочные реакции. В результате продукт ферментативной реакции, который пытаются определить, может подвергнуться превращению под действием другого, следующего в метаболической цепи фермента. Более подробное обсуждение методов определения ферментативной активности в сырых тканевых экстрактах приводится в работе [167]. [c.287]

Колонка (1,5X35 см) уравновешена 0,005 М фосфатным буферным раствором с pH 6,8. Элюирование линейный градиент, 300 ил исходного буферного раствора — 300 мл О,№25 М яатрийфосфатного буферного раствора с pH 6,8. Метод определения ферментативной активности см. в работе [78]. 5, Р, РЗ — три формы фермента, свойственные трем фенотипам и различающиеся по электрофорезу в крахмальном геле. [c.28]

Визуальный метод определения ферментативной активности применяли при выделении активных продуцентов танин-ацилгидролазы (Yamada et al., 1967). Культуру гриба в виде конидиальной суспензии высевали на агаризованную минеральную питательную среду с галлотанином. [c.195]

Исследования ферментативного аппарата факультативных паразитов не представляют больших трудностей, поскольку грибы, относящиеся к этой группе, могут выращиваться на искусственных средах. Значительно усложняется проведение такого изучения в случае облигатных паразитов, способных развиваться лишь в живой ткани. Купревич (1940) применил для этой группы микроорганизмов метод определения ферментативной активности прорастающих спор. Получаемые при этом данные нельзя признать пол- [c.32]

Ферментные метки. Каким образом ферменты могут выступать в качестве маркеров иммунохимических реакций, т. е. каким образом можно детектировать ферменты и в каких минимальных количествах Попадая в раствор, молекула фермента за одну секунду может превратить определенное количество субстрата в продукт. Допустим, что фермент за секунду может образовать тысячу молекул продукта, тогда за 17 мин это количество составит миллион. Если минимальное количество продукта, которое можно обнаружить фотометрическим методом, составляет 10 молекул/мл, то это означает, что для получения такого количества продукта необходимо 10 молекул/мл фермента, т. е. 10 моль/л. Чем выше чувствительность метода, тем меньшее количество фермента может быть обнаружено. Так, например, используя хемилюминесцентный или флуоресцентный метод детекции продукта, можно определять до 10 молекул фермента в 1 мл. Фотометрические или флуоресцентные методы могут быть использованы не во всех случаях например, если измерение проводят в очень мутной среде, применяются другие методы определения ферментативной активности электрохимические, микрокалориметрические и т. д. [c.108]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология