Белок определение метод Лоури

Определение белка. Для определения белка используют метод Лоури (с. 81). При спектрофотометрическом измерении определяют оптическую плотность при 280 нм и рассчитывают концентрацию с помощью коэффициента Л им =9,0. [c.217]

Метод Лоури и сотр. [120], в котором используется фенольный реактив Фолина с предварительной обработкой белка щелочным раствором медных солей, очень широко применялся для определения белков вообще, а также и для гликонротеинов [121, 122]. Методика проста, в гидролизе нет необходимости, чувствительность реакции высока. Однако серьезный недоста- [c.150]

Определение белка по методу Лоури [c.31]

Наиболее распространенным колориметрическим способом определения белков является метод Лоури и др. [90] с использованием реактива Фолина. В реакции с этим реактивом получают синее окрашивание в результате взаимодействия белка с ионом меди в щелочном растворе (биуретовая реакция) и восстановления фос- [c.356]

Определение концентрации белка проводят методом Лоури (с. 81). При спектрофотометрическом определении для расчета используют коэффициент Л ° 1см=10,2 при 280 нм. [c.240]

Реактивы для определения белка по методу Лоури (с. 81), [c.82]

Определение содержания белков по методу Лоури проводят так. Из каждой фракции, получаемой после вытекания раствора из колонки, отбирают градуированной пипеткой по 2 мл жидкости. Жидкость переносят в пробирку и туда же добавляют I мл реактива В. Содержимое пробирки перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 10 минут. Затем в пробирку добавляют 0,1 мл реактива Фолина. Через 30 минут желтая окраска жидкости переходит в синюю и интенсивность окраски определяют на фотоэлектроколориметре при красном светофильтре. [c.62]

Пептиды и белки обладают сильным избирательным поглощением в области 210—220 нм. Однако при этом нельзя работать в буферных растворах, включающих карбонил со держащие соединения. Еще более чувствительным является определение пептидов при 192—194 нм, однако при измерении в этой области можно использовать лишь водные растворы фторидов щелочных металлов. По этой причине спектрофотометрическое определение белков в области ниже 210 нм используется крайне редко (лишь в специальных случаях ГПХ). По чувствительности определение белков при 210 нм сопоставимо с колориметрическим методом Лоури, Например, сывороточные белки определяли в концентрации 2 мкг/мл [79]. Поглощение при 210 нм характерно для пептидной связи, и, следовательно, белки имеют одинаковые коэффициенты экстинкции (табл. 35.8). [c.457]

Реактивы для определения концентрации белка методом Лоури (с. 81). [c.220]

При выделении препарата мембран оценивают количественный выход белка. Метод Лоури (1951) - наиболее распространенный и высокочувствительный метод определения концентрации белка, основанный на измерении интенсивности окраски раствора, зависящей от концентрации белка. Принцип метода заключается в том, что при взаимодействии белка с реактивами, используемыми в определении, осуществляются по меньшей мере две цветные реакции на белок. Одна из них — биуретовая реакция между пептидными группами и ионами меди. Возникающая сине-фиолетовая окраска обусловлена об- [c.232]

В связи с тем, что присутствие в растворе хлорида калия мешает количественному определению белка по методу Лоури, эту соль из препарата белка необходимо удалить. Для этого к 1 мл экстракта добавляют 2 мл 10%-ного раствора ТХУ, что приводит к осаждению белков. Полученную суспензию центрифугируют при 4000 об/мин 10 мин. Надосадочную жидкость очень тщательно удаляют. Края пробирок вытирают фильтровальной бумагой. К осадку прибавляют 10 мл 0,1 моль/л раствора гидроксида натрия. Раствор перемешивают стеклянной палочкой до полного растворения осадка. Для определения концентрации белка по методу Лоури берут 0,1 мл щелочного раствора белка. [c.6]

Вещества, которые не мешают определению белка по методу Лоури (в конечной концентрации) мочевина (0,5%>), [c.46]

Несмотря на высокую избирательность метода Лоури, имеется ряд химических соединений, мешающих количественному определению белка данным фотометрическим методом. К ним относятся, например, мочевина, сульфат аммония, гексамины, некоторые углеводы и т. д. Однако эти вещества оказывают заметное влияние на фотометрическую реакцию лишь прп больших концентрациях, значительно превышаю- [c.37]

С фильтратом проделывают цветные реакции и определяют концентрацию белка. Для определения концентрации белка по методу Лоури 1 мл исходного раствора белка переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл. Объем жидкости в колбе доводят дистиллированной водой до метки. I мл разведенного раствора белка используют для количественного определения содержания белка. [c.10]

Приведен краткий обзор методов количественного апределения белка в различных объектах. Фотометрический метод, базирующийся на реакции Лоури, является наиболее перспективным для анализа растворов. Предложен способ перевода белка в раствор из твердых биопрепаратов (кормовых дрожжей, премиксов, комбикормов и т. д.) с дальнейшим фотометрическим определением белка по реакции Лоури. В частности, предлагаемая методика может быть использована для контроля содержания белка в кормовых дрожжах. В сравнении с существующей на производстве методикой повышается достоверность результатов определений белка и в 4 раза сокращается продолжительность анализа. Табл. 1. Библ. 7 назв. [c.90]

Опубликован обширный обзор, где рассмотрено влияние на определение белка 110 методу Лоури примесей различных соединений пуринов, глицина, [c.293]

При выделении фракции мембран необходимо оценить количественно выход белка. Одним из наиболее распространенных и высокочувствительных методов определения концентрации белка признан метод Лоури (1951). Этот ме- [c.221]

В полученном растворе гемоглобина измеряют концентрацию белка методом Лоури (см. работу 12). Для этого 1 мл раствора гемоглобина разбавляют до 100 мл в мерной колбе физиологическим раствором. Для определения берут 1 мл разбавленного раствора. [c.8]

Определение концентрации белка в препарате СУР. 40 мкл препарата СУР растворяют, добавляя 80 мкл буфера VII, содержащего однопроцентный раствор тритон Х-100. Содержание белка измеряют по методу Лоури (с. 81) с модификацией, применяемой для определения белка в растворах тритона Х-100. В этом случае в раствор карбоната натрия, использующийся для определения, добавляют додецилсульфат натрия до конечной концентрации 0,3%. Далее определение ведется обычным способом Измеряют содержание белка в 20 мкл разведенного препарата СУР. [c.425]

Определяют белок в ферментных препаратах различными химическими и физическими методами. Наиболее чувствительным, специфичным и удобным для быстрого определения белка является фотометрический метод Лоури, опубликованный во многих руководствах. [c.135]

Благодаря присутствию пептидных связей в щелочных растворах белка образуются окрашенные в синий цвет хелаты с ионами меди. Эта реакция гораздо менее чувствительна, чем метод Лоури, однако она занимает меньше времени и может протекать в присутствии солей аммония и других веществ, мешающих определению белка по методике Лоури. Кроме того, при таком анализе интенсивность окраски на единицу веса белка у различных белков варьирует меньше. [c.359]

Белки могут связываться с некоторыми красителями, в результате чего происходит сдвиг полос поглощения последних. В описываемой ниже методике в качестве красителя используют кумаси яркий синий. Этот краситель существует в двух видах его красная анионная форма переходит в синюю, когда краситель присоединяется к аминогруппам белков. Протекающие при этом реакции в большинстве случаев более чувствительны и менее подвержены вредному воздействию многих соединений, ограничивающих применение других способов определения белка [78]. Эксперимент с применением красителя занимает гораздо меньше времени, чем процедуры в описанных выше методиках. Чувствительность реакции с красителем сравнима с чувствительностью метода Лоури. Она меньше зависит от вида белка по сравнению с цветными реакциями в описанных выше методиках. [c.360]

Регистрацию выхода белков можно вести по УФ-поглощению при 280 нм, но не по поглощению пептидной связи (210—230 нм), так как в этой области сам полибуфер сильно поглощает свет. Полибуфер не мешает окраске белка красителями типа СВВ. Для определения концентрации белка во фракциях можно пспользовать количественные методы, основанные на окрашивании такими красителями. Определение белка по методу Лоури в присутствии пол1[буфера проводить нельзя, так как он связывает ионы меди. [c.336]

На каких реакциях основано количественное определение белка биуретовым методом, методом Лоури [c.23]

Б е л о в П. Применение 18-вольфрамо, молибдено-фосфорного аммония для определения белка по методу Лоури//Лабораториое дело. 1975. № 5. С. 303. [c.88]

В Присутствии примесей, поглощающих в ультрафиолетовой области при 260—280 нм, например компонентов нуклеиновых кислот, определение белков по поглощению при 220 нм идентично колориметрическому методу Лоури. Показано, что при этом можно работать в растворах хлористого натрия, какоди-лата, бората, фосфата натрия и калия, сульфата аммония (при концентрации выше 0,1 М), тогда как концентрация гидроокиси натрия, ацетатов, глицина, трис-буфера не должна превышать [c.458]

Другим колориметрическим методом определения белков является метод Лоури и др. [49]. Хейвкес и др. [31] применили его [c.249]

Определение белка. Для определения концентрации белка методом Лоури необходимо предварительно осадить его трихлоруксусной кислотой (с. 81). Спектрофотометрическое измерение можно проводить при условии, когда из раствора фосфорилазы удален АМФ, при этом отнощение Л260М280 равно 0,52—0,55 для расчета используют коэффициент А ° 1см= 13,2 при 280 нм. [c.221]

В инструкции фирмы LKB для предварительной оценки разделения рекомендуется делать отпечатки с поверхности геля. Однако при этом происходит значительная потеря материала, поэтому мы не пользовались этим методом, а сразу элюировали фракции, уравнивали объемы и измеряли оптическую плотность при 280 нм. Подробную картину разделения мы получали, исследуя каждую фракцию в аналитическом ИЭФ. Этим же методом можно было более точно определить одинаковые фракции, подлежащие объединению. Определение белка по методу Лоури и сотр. (Lowry et al., 1951) на этом этапе, разумеется, невозможно из-за присутствия амфолнтов. [c.139]

Определение белка. Для определения концентрации фосфоглюкомутазы используют метод Лоури (см. с. 81). При спектрофотометрическом измерении регистрируют оптическую плотность при 278 нм, учитывая, что Л °А1см=7,0. [c.228]

К недостаткам метризамида относятся следующие. Ультрафиолетовое облучение его (и даже дневной свет), а та1сже нагревание выше 55° ведут к частичному освобождению йода. Растворы метризамида нельзя автоклавировать их стерилизуют фильтрованием. Метризамид сильно поглощает в ультрафиолетовой. области спектра (Яи с=242 нм), в том числе при 260 и 280 нм, но не мешает окраске биополимеров, например нуклеиновых кислот, -бромистым этидием. Для сцинтилляторов на основе диоксана и -нафталина метризамид является очень сильным тушителем, а для тритон-толуольных — умеренным (падение эффективности счета до 20%) Определение РНК с орцином, ДНК с дифениламином и белка по методу Лоури нельзя проводить в присутствии метризамида — его следует удалить ультрафильтрацией, [c.207]

Материалы 1. Реактивы, необходимые для определения концентрации белка по методу Лоури (Лоури и сотр., 1951) см. 3.10. Реактив А 2 %-й раствор карбоната натрия в 0,1 и. растворе едкого натра. Реактив Б 0,5 %-й раствор Си504-5Н20 в 1 %-м растворе тартрата натрия. Реактив Фалина, который перед опытом разбавляют в два раза до содержания кислоты, равного 1 н., что проверяют титрованием щелочью по фенолфталеину. Непосредственно перед проведением определения приготовленный раствор разводят еще в два раза. [c.155]

Для солюбилизации мембранных белков часто используют неионные детергенты, такие как тритон Х-100, твин-80 и др. Эти детергенты влияют на развитие окраски при определении белка с биуретовым реактивом и методом Лоури. Практически полного удаления детергентов из пробы можно добиться экстракцией их изоамнловым спиртом. [c.82]

Чувствитаяьный метод, в основе которого лежит колориметрическая реакция с фенольным реактивом Фолина — Чокальтеу [1 ], очень широко используется для определения отдельных белков, а также для контрольного анализа вытекающих из колонок элюатов, которые содержат много различных белков. Детали, приведенные ниже, взяты в основном из метода Лоури и др. [2], однако для получения более стабильного реактива Б вместо виннокислого натрия используется лимоннокислый натрий [3]. [c.265]

Метод Лоури в модификации Сяткина используют для определения содержания белка в препаратах с повышенным содержанием липо- и гликопротеидов. [c.31]

При выделении фермента наибольшая часть времени затрачивается на определения активности (и белка). Поэтому при выборе соответствующих тестов ищут таких, которые могут обеспечить максимальную скорость анализов. В этих случаях быстрота определений более важна, чем их высокая точность (основные методы определения ферментативной активности рассматривались в гл. 3). Количество белка можно установить различными путями на основании химических, физико-химических и даже чисто физических способов, но чаще всего его определяют а) сжиганием вещества и определением азота но Кьельдалю б) биуретовой реакцией в) по методу Лоури, совместным использованием биу-ретового и фенольного реактивов. [c.139]

Для определения содержания белка в растворах широко используются фотометрические методы анализа [1, 2]. В ряде случаев возможно определение белка по собственному поглощению при длинах волн 220 и 280 нм [1]. Более селективным является фотометриро вание окрашенных комплексов белка, полученных по различным реакциям ксантопротеиновой, биуретовой и реакции Лоури [2, 3]. Среди них наиболее специфичной и чувствительной является реакция Лоури, в которой белок вступает во взаимодействие с реактивом Фолина [4] в сочетании с биуретовой реакцией. Именно сочетание этих двух фотометрических реа1кций (реакция на пептидные связи и на обязательные ароматические аминокислоты белка) делает метод высокочувствительным и избирательным, т. е. позволяет его использовать для определения белка в сложных смесях. По данным [5], метод Лоури чувствительнее метода, основанного на биуретовой реакции, в 100 раз, а в сравнении с методом определения по собственному поглощению — в 10—20 раз. [c.37]

При определении лейцинаминопептндазы и трипсина, ковалентно связанных с сефарозой, Кельш и др. [41] сопоставили пять методов определения связанных белков 1) основанный на балансе белка перед и после связывания 2) аминокислотный анализ после кислотного гидролиза 3) модифицированный метод Лоури 4) спектрофотометрический и 5) флуориметрический. Преимущество двух последних методов, которые они исследовали детально, состоит в том, что эти методы не приводят к разрушению геля. Как и метод Лоури, они характеризуются простотой, низким пределом обнаружения и высокой воспроизводимостью. [c.244]

Широкое распространение получил также метод Лоури, в котором сочетаются две реакции — на ароматические аминокислоты (с реагентом Фолина) и биуретовая. Его чувствительность значительно выше — до 0,01—0,05 мг1мл. Однако его эффективность для белков, существенно различающихся по содержанию ароматических аминокислот, неодинакова. Кроме того, на правильность результатов определения по Лоури оказывают заметное влияние многие примеси, например, нуклеиновые кислоты. [c.34]

Инкубацию суспензии микросом, миелина и синаптосом с ПАВ проводили в течение 30 мин. при 4—5° С, за исключением специальных опытов по изучению длительности воздействия ПАВ, в которых инкубационное время было различно. В течение времени воздействия ПАВ на фермент содержание белка составляло 0.5 мг/мл. Mg +-, Na -, К" -АТФазную активность определяли как описано ранее (Палладии и др., 1970). В пробу вносили по 0.1 мг белка, что соответствовало 0.2 мл смеси суспензии и ПАВ. Фосфор определяли по методу Фиске и Суббароу, белок — по методу Лоури. ККМ определяли по изотермам поверхностного натяжения (Ребиндер, 1959). Изотермы поверхностного натяжения исследуемых ПАВ измеряли при температуре 8.5° С в водном растворе и в суспензии микросом при концентрации белка в ней 0.5 мг/мл методом наибольшего давления пузырьков (Методы испытаний водных растворов ПАВ, 1965). Растворы готовились на бидестиллированной воде. Для исследования выбранных нами систем указанный метод имеет то преимущество по сравнению с другими, что позволяет измерять истинную поверхностную активность. В других же методах, например в методе Вильгельми, использование платины для систем, в которых содержатся азотсодержащие или оксиэтилиро-ванные соединения, приводит к заниженным значениям ККМ из-за повышенной адсорбции этих компонентов на платине в результате комплексо-образования. Исследования но определению ККМ проводили в отделе поверхностно-активных веществ сектора нефтехимии Института химии высокомолекулярных соединений АП УССР. [c.119]

Реакции типа биуретовой, зависящие от способности белков связывать ионы меди, дают более согласующиеся результаты для разных белков [120], чем реакции, основанные на действии фенольного реагента. Первоначальные методы, основанные на биуретовой реакции, были сравнительно малочувствительны, но Уэстли и Ламбет [124] достигли 40-кратного повышения чувствительности, удаляя избыток меди на ионообменной смоле и определяя медь, связанную с белком, колориметрически с диэтилдитиокарбаматом. Гольдвассер и сотр. [121] сообщили о расхождениях в результатах, полученных этим методом и методом Лоури для фракций овечьего эритропоэти-па. Отсутствие определенных структурных обоснований для образования окраски и чувствительность диэтилдитиокарбамата меди к свету ограничивает ценность этого метода. [c.151]

Модификация метода Лоури, делающая его пригодным для измерения белка в пробах, содержащих сахарозу или ЭДТА, а также в препаратах мембран и липо-протеинов, описана Марквеллом и др. [91]. Эта методика основана на применении детергента (додецилсульфата натрия, ДСН) в составе щелочного карбонатного реактива для увеличения солюбилизации липоидных веществ и на использовании повышенного количества тартрата меди для предотвращения помех за счет сахарозы и ЭДТА. Методика применима в нескольких случаях, в том числе при определении белков во фракциях из сахарозных градиентов. [c.358]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология