Определение ферментативной активности

Рис. 9-7. Количественное определение ферментативной активности. Эта процедура проводится в три этапа 1) определение /С (рис. 9-4 и дополнение 9-2), 2) измерение начальных скоростей (А) при различных концентрациях фермента и при концентрации субстрата, близкой к насыщающей, например при концентрации, равной 10 Км.

Определение ферментативной активности [c.284]

Определение ферментативной активности испытуемого препарата и стандартного образца проводят в одинаковых условиях опыта. [c.29]

Петров К. П. Рефрактометрический метод определения ферментативной активности зерна, муки и продуктов их переработки,— В сб. Биохимия зерна и хлебопечения. М., Изд-во АН СССР, 1960, с. 283. [c.219]

С целью снижения погрешности методов определения ферментативной активности необходимо проводить определение ферментативной активности препарата в сравнении со стандартным образцом. Стандартным образцом является высокоочищенный ферментный препарат, качество которого отвечает требованиям соответствующей нормативно-технической документации. [c.29]

Элюцию фермента с геля также проводят под контролем определения ферментативной активности. Для этого осадок геля 10—15 мин перемешивают с элюирующим буфером, центрифугируют и в надосадочной жидкости измеряют ферментативную активность. Обработку повторяют с новыми порциями буфера (но с меньшими объемами) до тех пор, пока не будет элюировано основное количество фермента, [c.204]

Определение ферментативной активности. Методика. Перед определением фермент активируют в смеси, содержащей 0,2 мл [c.289]

Во многих случаях удалось показать, что врожденные нарушения обмена связаны с полным или частичным отсутствием определенных ферментативных активностей. Организм либо вообще не способен синтезировать данный фермент, либо он синтезирует его недостаточно, либо образуемый им фермент неактивен вследствие каких-то структурных изменений. Некоторые такие врожденные нарушения касаются обмена аминокислот. Мы рассмотрим три вида нарушений, связанных с обменом фенилаланина и тирозина,— альбинизм, алкаптонурию и фенилкетонурию. [c.453]

Известно, что при определении ферментативной активности необходимо строго придерживаться одной разработанной методики при получении сравнительных экспериментальных данных. [c.86]

Проведя на колонке с гелем измерение Fe для нескольких белков с известной молекулярной массой, т.е. фактически осуществив градуировку колонки, можно определить Vg для исследуемого биополимера и путем интерполяции с помощью соотношения (7.6) найти его молекулярную массу. Существенно, что гель-хрома-тографию можно проводить в мягких условиях, сохраняя белок в нативном, функционально активном состоянии. Если в распоряжении экспериментатора имеется специфический тест на этот белок, пригодный для его выявления в смеси с другими белками, например определенная ферментативная активность, то определить молекулярную массу можно даже в неочищенном препарате белка т.е. уже на промежуточных стадиях его очистки. Если полимер имеет четвертичную структуру, то, как правило, она сохраняется в условиях разделения и молекулярная масса представляет собой сумму масс составляющих белок субъединиц. [c.268]

Для корректного определения ферментативной активности условия опыта должны быть максимально стандартизованы и проводиться в условиях оптимума температуры и pH. Количество субстрата должно быть равным или большим, чем необходимо для поддержания максимальной скорости реакции. Разнообразие методов оценки ферментативной активности связано с большим количеством вариантов ферментативных реакций. Если продукты реакции или модифицированные субстраты окрашены, то с большим успехом используют спектрофотометрические методы, в случае газообразных продуктов реакции весьма эффективен полярографический метод и т. д. Определение каталитической активности весьма важно для оценки действия фермента. Кроме того, знание удельной активности того или иного фермента дает возможность определить истинное содержание его в клетках. [c.62]

Определение ферментативной активности проводили по методике, описанной в работе [65]. [c.22]

Существенным недостатком электрофокусирования в градиенте плотности является трудность детектирования амфолитов-образцов в присутствии амфолитов-носителей и сахарозы. Наиболее удобным методом обнаружения служит определение ферментативной активности. Правда, амфолиты-носители могут [c.313]

О количестве фермента или, точнее, о его активности, которая при прочих равных условиях пропорциональна концентрации фермента, обычно также судят по силе производимого ферментом действия, т. е. по количеству субстрата, изменяющегося под влиянием фермента в единицу времени. Другими словами, определение ферментативной активности биологического препарата сводится к регистрации тех изменений, которые претерпевает в его присутствии определенный субстрат. [c.123]

Предложены также приемы оценки деятельности почвенных микроорганизмов по уровню азотфиксации, нитрификации. Однако среди других методов более привлекательны методы определения ферментативной активности почвы. Общий характер имеет величина каталазной активности, используют также полифенолоксидазную и дегидрогеназную активность. Комплекс надежных и достаточно простых методов определения различных видов ферментативной активности почв разработан Р.Х. Хазиевым, А.Ш. Галстяном и С.А. Абрамян. [c.221]

Физические методы определения ферментативной активности биологических, жидкостей имеют то преимущество перед другими, что они позволяют вести непрерывное наблюдение за ходом процесса. Эти методы широко используются при точных работах по изучению кинетики ферментативных процессов. [c.124]

Установлено, что после 30 мин смешивания в шаровой мельнице предварительно измельченного препарата и наполнителя (крахмал, хлористый натрий) достигается определенная ферментативная активность препарата. [c.163]

Это доказывает необходимость некоторого изменения методики определения ферментативной активности препарата пектиназы. [c.167]

Самое большое преимущество определения молекулярной массы методом гель-хроматографии — отсутствие необходимости в тщательной очистке исследуемого соединения. Самое сложное в этом случае подобрать приемлемый метод обнаружения (например, метод определения ферментативной активности и т. д.). [c.390]

На этом основании для определения ферментативной активности часто используется время протекания реакции в секундах, причем превращение концентрации субстрата поддерживается на постоянном уровне. Для этой цели особенно удобны оптические тесты, например изменение экстинкции [c.225]

Определение реакции среды и знание концентрации водородных ионов в биологических объектах часто является необходимым в лабораторной практике. Эти определения бывают нужны, в частности, при создании желаемой реакции среды, необходимой для оптимальной жизнедеятельности микроорганизмов. При проведении многих биологических опытов in vitro, например, при работе с культурами тканей, при определении ферментативной активности препаратов и т. п. одним из основных условий является создание соответствующей реакции среды. [c.82]

Ферменты разводят на трис-НС1 буфере непосредственно перед определением ферментативной активности. Растворы ферментов, АТФ, НАДФ до внесения в реакционную смесь хранят на льду. [c.217]

Кажущаяся величина константы Михаэлиса для субстратов (фрук-тозо-6-фосфата и АТФ) зависит от pH реакционной среды, в которой проводится определение ферментативной активности и от концентрации второго субстрата. В зависимости от условий эксперимента она может изменяться в широких пределах для фруктозо-6-фосфата — от [c.238]

При выделении фермента наибольшая часть времени затрачивается на определения активности (и белка). Поэтому при выборе соответствующих тестов ищут таких, которые могут обеспечить максимальную скорость анализов. В этих случаях быстрота определений более важна, чем их высокая точность (основные методы определения ферментативной активности рассматривались в гл. 3). Количество белка можно установить различными путями на основании химических, физико-химических и даже чисто физических способов, но чаще всего его определяют а) сжиганием вещества и определением азота но Кьельдалю б) биуретовой реакцией в) по методу Лоури, совместным использованием биу-ретового и фенольного реактивов. [c.139]

В настоящее время зарубежные фирмы выпускают наборы реактивов для определения ряда гормонов и других лекарств имму-ноферментным методом, так называемые контрольно-измеритель-ные тесты (КИТы). Эти КИТы содержат стандартный раствор тестируемого лиганда, моноклональные антитела, фермент и необходимые реактивы для определения ферментативной активности. [c.317]

Для окончательной идентификации выделенную культуру с косого агара пересевают в 1% пептонную воду (нитрозо-индоловая проба), на желатину (определение протеолитическо способности), на среды пестрого ряда (определение ферментативной активности) и на среду с кровью (определение гемолитической способности). Наряду с этим с той же культурой ставят пробу о. холерным бактериофагом и развернутую реакцию агглютинации. [c.167]

ЭлЮЕровавие в линейном градиенте 0,02 М калийфосфатного буферного раствора (pH 5,7)—0,3 М фосфат (pH 5,3). Материал, присутствующий во фракциях 120—180 (пик 11>, был далее очищен кристаллизацией. Относительно определения ферментативной активности н единиц ферментативной активности см. работу [73]. [c.25]

Колонка (1,5X35 см) уравновешена 0,005 М фосфатным буферным раствором с pH 6,8. Элюирование линейный градиент, 300 ил исходного буферного раствора — 300 мл О,№25 М яатрийфосфатного буферного раствора с pH 6,8. Метод определения ферментативной активности см. в работе [78]. 5, Р, РЗ — три формы фермента, свойственные трем фенотипам и различающиеся по электрофорезу в крахмальном геле. [c.28]

Относительным критерием чувствительности тетразолиевых солей при определении ферментативной активности является величина их полярографических потенциалов восстановления [12, 14] при определенном pH, при котором дегидрирующие ферменты, участвующие в цепи окислительно-восстановительных реакций, передают электроны и протоны тетра-золиевым солям. [c.132]

Наличие йода и нитрогруппы в пара-положении к тетразо-цепи придает ИНТ высокую чувствительность к восстановлению [67—70]. Поэтому ИНТ может с успехом применяться для количественного определения ферментативной активности, основанного на вымывании образующегося из ИНТ формазана органическим растворителем и его кoлopимeтpиpoвa НИИ [71]. ИНТ применяют также при исследованиях функции печени, почек, сердца [72], растительных и животных опухолей [73], [68], для определения качества свежезамороженной рыбы, основанного на количественном определении ферменг тов, выделяемых гнилостными бактериями на поверхности рыбы [74], для локализации моноаминооксидазной активности [75]. [c.136]

Параллельно с определением ферментативной активности и структуры ДНК была изучена вирулентность необлученных и облученных УФ-излучением (150— 600 мВт-с/м ) штаммов S. typhi для белых мышей. Вирулентность у 1-й популяции штаммов брюшнотифозной палочки, подвергнутых облучению, несколько снижалась (DL5o = 250 млн. микробных тел) по сравнению с контролем (DLso = 190 млн. микробных тел), а у 2-й и последующих популяций полностью восстанавливалась. Нарушения обменных процессов в микробной клетке можно объяснить структурными изменениями бактерий, что было подтверждено электронномикроскопическими исследованиями. [c.139]

До недавнего времени эстеразы микроорганизмов изучались сравнительно мало. Лишь в последнее десятилетие характеристика эстеразпой активности отдельных систематических групп микроорганизмов привлекла значительное внимание, прежде всего, в связи с возможностью использования ее в качестве дополнительного признака при классификации бактерий и грибов и выявлении патогенных штаммов некоторых микроорганизмов. Что касается работ, связанных с изучением свойств микробных эстераз, их специфичности и механизма действия, то они но только сравнительно немногочисленны, но зачастую и трудно сопоставимы. Последнее объясняется прежде всего том, что, поскольку природные субстраты микробных экстераз неизвестны, выбор того или иного субстрата для определения ферментативной активности всегда произволен. Кроме того, отдельные исследования выполнены с микроорганизмами, выращенными на различных средах и находящихся на различных стадиях роста, или на ферментных препаратах разной степени очистки. [c.22]

Изложение данных, касающихся свойств микробных эстераз, представляется целесообразным начать с субстратной специфичности этих ферментов. Это даст возможность, прежде всего, представить сколь широк и разнообразен диаиазои веществ, используемых разными исследователями в качестве субстратов при выявлении ферментативной активности. Поскольку, как уже отмечалось, природные субстраты эстераз неизвестны и, следовательно, выбор того или иного вещества для определения ферментативной активности в данном случае всегда произволен, нри интерпретации получаемых результатов возникают значительные трудности. [c.22]

Визуальный метод определения ферментативной активности применяли при выделении активных продуцентов танин-ацилгидролазы (Yamada et al., 1967). Культуру гриба в виде конидиальной суспензии высевали на агаризованную минеральную питательную среду с галлотанином. [c.195]