ДХФИФ

Равновесие реакции окисления малата окисленным динуклеотидом (реакция 1) сильно сдвинуто влево. Ее протекание становится возможным в присутствии искусственных акцепторов электронов ФМС и ДХФИФ, быстро и практически необратимо окисляющих НАДН в не-знзиматических реакциях (2) и (3). Восстановление ДХФИФ приводит к спектральным изменениям, что позволяет использовать спектрофотометрический подход для регистрации реакции. Измерение концентрации малата описанным методом следует проводить в присутствии ас-партат-аминотрансферазы (КФ 2.6.1.1), катализирующей непрерывное удаление оксалоацетата — сильного ингибитора маталдегидрогеназы. [c.461]

Для определения аскорбиновой кислоты применяется краситель 2,6-дихлорфенолиндофенол (ДХФИФ). Его равен 0,217 в, а 3 аскорбиновой кислоты 0,14 8. [c.68]

Для определения концентрации образовавшегося малата в спектрофотометрическую кювету вносят 3 мл среды для измерения концентрации малата, добавляют 50 мкМ дихлорфенолиндофенол, 1 мМ феназинметосульфат, малатдегидрогеназу — 50 мкг/мл и аспартатамино-трансферазу — 50 мкг/мл. Определяют значение оптической плотности раствора при длине волны 600 нм, соответствующей максимуму поглощения окисленной формы ДХФИФ (емм ° =20). В кювету добавляют 50—100 мкл раствора малата и фиксируют уменьшение оптической плотности, связанное с восстановлением дихлорфенолиндофенола. Рекомендуется определить указанным методом концентрацию приготовленного по навеске раствора L-малата. Рассчитывают концентрацию образующегося в результате реакции окисления янтарной кислоты малата и определяют стехиометрическое соотношение окисленного сукцината к образованному малату в отсутствие и в присутствии разобщителя. [c.462]

Пользуясь таблицей окислительно-восстановительных потенциалов биологических систем (см. приложение), объясните, в какую сторону будет сдвинута реакция в системе сукцингтч фумарат пря взаимодействии с 2,6-дихлорфенолиндофенолом, если ДХФИФ = =0,217 в. [c.70]

Для определения интенсивности этого процесса применяются различные методические приемы ингибирование выделения Ог с помощью ДХММ, совмещенное с образованием восстановителей в фотосистеме 1 за счет аскорбата или ДХФИФ. Нг использование меченого кислорода О в газовой фазе и др. Последний метод, пожалуй, точнее, но он достаточно сложен. [c.180]

Интересно, что фотосистема 2 менее термоустойчива, чем фотосистема 1, что может приводить к замене электронтранспортной цепи, характерной для высших растений, на бактериальный тип электронного транспорта (Сан-Пьетро, 1967). Этот вывод можно сделать, если проанализировать влияние температуры на фотовосстановление НАДФ хлоропластами, когда в одном случае донором электронов является вода, а в другом — аскорбат и ДХФИФ.Нг. Интенсивность восстановления НАДФ в последнем варианте снижалась при гораздо более высоких температурах, чем в первом (фиг. 91). Незави- [c.200]

I — система, выделяющая кислород (контроль) II — система в присутствии ДХММ, ДХФИФ и аскорбата. По оси ординат — отношение числа эквивалентов восстановленного НАДФ к числу поглощенных квантов. [c.569]

Итак, чрезвычайно большой интерес представляют природа и потенциал первичного фотосинтетического восстановителя X . В ранних исследованиях хлоропластов было обнаружено, что только окислители с относительно высоким потенциалом (феррицианид, бензохинон, ДХФИФ) индуцируют выделение кислорода. Например, в систематических исследованиях Весселса [90] было найдено, что восстанавливались только те красители и хиноны, потенциал которых был выше 0,0 в. Возможны два объяснения этого явления. Во-нервых, можно предположить, что в хлоропластах в отличие от целых клеток образуется только слабый фотовосстановитель. Во-вторых, не исключено, что агенты с низким потенциалом восстанавливаются, но не могут накапливаться в основном вследствие автоокисления. Правильно, по-видимому, второе объяснение, как об этом свидетельствуют экспериментальные данные, приведенные в табл. 69. [c.573]

Ранее полагали, что такие окислители, как ДХФИФ и феррицианид, нормальный потенциал которых выше, чем потенциал фотовосстановителя Y (предположительно 0,0 в), фото-восстанавливаются именно последним, а не X . Согласно этой гипотезе, ДХФИФ окисляет Y быстрее, чем фото окислитель Р700+, так что краситель может закорачивать цепь переноса, обслуживаемую фотосистемой I. Однако имеющиеся данные указывают на то, что при длительном освещении, сенсибилизирующем обе фотореакции, дело обстоит иначе и что окисление через фотосистему I является наиболее быстрым. Восстановитель X поэтому может рассматриваться как универсальный восстановитель реакций, протекающих в хлоропластах. [c.574]

Фиг. 233. Спектры индуцированных световыми импульсами изменений поглощения хлоропластов шпината в отсутствие (вверху) и в присутствии (внизу) ДХФИФ (10" М) и феррицианида (10- М) [79].

Б настоящее время получена относительно простая фотохимическая реакционная система, в которой экзогенный донор электрона О окисляется, тогда как экзогенный акцептор электрона А восстанавливается. Накопление энергии происходит, если потенциал донора В выше, чем потенциал акцептора А (как в системе с аскорбатом и НАДФ). Энергия не накапливается в случае циклического процесса, когда В является восстановленной формой А (это имеет место в системе с ДХФИФ или ФМС), [c.575]

В системе с изолированными хлоропластами наблюдаемое отношение Р 2е никогда не превышало 1 и не было также получено убедительных доказательств существования более чем одной точки фосфорилирования. Наиболее вероятное место фосфорилирования -- точка С (фиг. 235) при переносе электропа от пластохинона к цитохрому /. Однако высокий потенциал ДХФИФ (0,22 в) и ТМФД (0,26 в), которые функционируют сходным образом (Шварц, неопубл. данные), и низкая скорость их восстановления аскорбатом не согласуются с предположением о том, что они вовлекаются в реакцию на уровне пластохинона. [c.578]

Стандартом служит 0,1%-ный раствор аскорбиновой кислоты. Влить 1 мл ДХФИФ в пробирку. Набрать в шприц на 1 мл 0,1%-ный раствор аскорбиновой кислоты. Добавить аскорбиновую кислоту к ДХФИФ по каплям, слегка помешивая иглой шприца. (Не встряхивать. ) Продолжить это до тех пор, пока синий раствор ДХФИФ не обесцветится. Отметить израсходованный объем аскорбиновой кислоты [c.149]

ДХФИФ — синий краситель — восстанавливается аскорбиновой кислотой (сильным восстановителем) до бесцветного соединения [c.149]

Все, что перечислено в опыте 3.1 (от начала и до раствора ДХФИФ) [c.150]

В 1939 г. Роберт Хилл (НШ) работая в Кембридже, обнаружил, что изолированные хлоропласты способны высвобождать кислород в присутствии окисляющего агента (акцептора электронов). Это явление получило название реакции Хилла. Некоторые химические вещества способны заменять природный акцептор электронов НАДФ. Одним из таких веществ является синий краситель ДХФИФ (2,6-дихлорфенолиндофенол), который после восстановления становится бесцветным [c.285]

М фосфатный буфер, pH 7,0 Среда для вьщеления хлоропластов Раствор ДХФИФ (реакционная среда) [c.285]

Теперь суспензию хлоропластов можно использовать для изучения реакции Хилла. Раствор ДХФИФ должен быть комнатной температуры. [c.286]

Г) 0,5 мл суспензии хлоропластов -1-5 мл раствора ДХФИФ. Оставьте пробирку на ярком свету [c.286]

Раствор ДХФИФ (реакционная среда) [c.286]

Во время реакции Хилла ДХФИФ действует между акцептором элекгронов X и ФС1 [c.287]

Известны вещества, способные присоединять отщепленные водородные атомы и при этом изменять свой цвет. К таким веществам относится 2,6-дихлорфенолиндофенол (ДХФИФ) его окисленная форма окрашена в синий цвет, а восстановленная — бесцветна. [c.354]

Если окисленная форма ДХФИФ при сме-щивании с тканевым экстрактом обесцвечивается, то можно предположить, что причина этого — присоединение атомов водорода от янтарной кислоты. Добавим к смеси янтарную кислоту. Если теперь скорость обесцвечивания возрастет, то это подкрепит нашу гипотезу о том, что ДХФИФ играет роль акцептора атомов водорода, отщепляющихся от янтарной кислоты. [c.354]

Опыт делится на две части 1) вьщеление нужного фермента и 2) использование его для окисления янтарной кислоты. ДХФИФ служит индикатором, который позволяет определить, идет реакция или нет. [c.354]

Этот этап необходимо проделать очень быстро добавьте в ту же лабораторную пробирку 0,5 мл раствора ДХФИФ и перемешайте содержимое, закрыв пробирку большим пальцем и перевернув ее. [c.355]

Добавьте 0,5 мл раствора ДХФИФ к 15 мл надосадочной жидкости, как описано выше. [c.355]

ДХФИФ остается синим в контрольных пробирках 2 и 3. На примере пробирки 2 показано, что одним светом нельзя вызвать изменения цвета и что для осуществления реакции Хилла необходимы хлоропласты. На примере пробирки 3 видно, что для протекания реакции Хилла свет так же необходим, как и хлоропласты. [c.342]

Косвенные данные позволяют предположить, что ядра и митохондрии не участвуют в восстановлении ДХФИФ, так как для этого необходим свет, а эти органеллы не содержат ни хлорофилла, ни любого другого видимого пигмента. [c.342]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология