Аминокислоты одномерное разделение

В последние годы значительное внимание уделялось задаче максимального разделения аминокислот при помощи одномерной хроматографии. Недостатки двухмерной хроматографии сводятся в основном к следующему [c.16]

ОДНОМЕРНОЕ РАЗДЕЛЕНИЕ АМИНОКИСЛОТ [4] [c.255]

ОДНОМЕРНОЕ РАЗДЕЛЕНИЕ СМЕСИ ШЕСТНАДЦАТИ АМИНОКИСЛОТ НА ПЛЕНКАХ С ИОНООБМЕННЫМ СЛОЕМ [c.129]

Аминокислоты и пептиды можно легко разделить на бумаге или в тонком слое целлюлозы, используя небольшие количества материала. В табл. 20.1 приведены примеры растворителей различных типов или буферов для ионофореза, при использовании которых достигается разделение аминокислот при одномерном фракционировании. Неопределенности могут быть разрешены в результате проведения хроматографии или ионофореза при других pH во втором (перпендикулярном) направлении. [c.388]

Одномерная тонкослойная ионообменная хроматограмма дает почти те же значения аминокислот, что и диаграмма, полученная на аминокислотном анализаторе. Разделение аминокислот от Асп до Ала в анализаторе также чувствительно к изменению pH и молярности буферного раствора и ухудшается при увеличении pH. В то же время разделение аминокислот от Вал и далее уже нечувствительно к изменению pH и молярности. [c.256]

Обычно поражает, что при анализе методом ХТС в одномерном варианте наибольшая величина Rf аминокислот не превышает 0,7. В случае всех исследованных нами растворителей было использовано для разделения только приблизительно /3 имевшегося в распоряжении пути. Увеличение содержания воды в растворителе приводило к большему росту малых величин Rf, чем больших, в результате чего уменьшался эффективный путь разделения. [c.402]

При выполнении одномерных хроматограмм для лучшего разделения аминокислот и сахаров предложен метод многократного пропускания растворителя. В этом случае растворитель пропускают по бумаге не один, а 5—7 раз, причем перед каждым новым пропусканием его удаляют с хроматограммы высушиванием. [c.31]

Нисходящая хроматография на бумаге была впервые применена для разделения аминокислот в гидролизатах белка . Предложенные тогда простые приборы применяются и в настоящее время. Главной частью является длинная узкая полоса фильтровальной бумаги, верхним концом погруженная в стеклянный сосуд с растворителем. Сосуд этот делается из широкой стеклянной трубки, запаянной с обоих концов, но имеющей довольно широкое продольное отверстие сверху. Погруженный конец бумаги удерживается в сосуде предметным стеклом. Другой конец свободно свисает вниз через находящуюся на некотором расстоянии стеклянную палочку в камеру, для которой авторы методики рекомендовали использовать фановые трубы. Снизу труба устанавливается на плотно подогнанном подносе из толстого листа свинца. На дно камеры наливается тот же растворитель, чтобы камера была насыщена его парами. Стеклянный сосуд устанавливается сверху, в расширении фановой трубы, и верхнее отверстие ее закрывается хорошо притертым стеклом. Так как можно взять довольно длинную фановую трубу, то и полосы фильтровальной бумаги могут быть длинными, что позволяет достигать хорошего разделения находящихся в смеси веществ. Для одномерной хроматограммы применяют полоски бумаги 1,5 см щирины и 20—56 см длины. На верхнем конце на расстоянии 5 см от края проводят простым карандашом линию— начало. В центре этой линии наносят 2—5 мкл ( il) исследуемого раствора. Большие количества наносить не следует, так как тогда пятна получатся размазанные. Если раствор очень разбавленный, то можно, высушив нанесенное количество, снова добавить на то же место еще такое же количество вещества, два-три раза, каждый раз тщательно высушивая. Затем конец бумажной полосы погружают в сосуд с растворителем так, чтобы карандашная метка не была погружена в растворитель, опускают другой конец в фановую трубу, плотно закрывают сверху стеклом и оставляют на длительное время. Скорость движения зависит от сорта бумаги. Так, например, для бумаги ватман № 1 за 6 часов растворитель (фенол-вода) проходит 15—25 см, за 24 часа — 30—50 см. Конечно, для но- [c.108]

Среди многочисленных систем, предложенных для одномерной хроматографии, почти безупречное разделение обычных аминокислот дают следующие. [c.16]

Методы хроматографии аминокислот на бумаге получили многочисленные применения в биохимии животных и растений, в микробиологии и медицине. Для количественного анализа аминокислот наиболее удобен все же способ, использующий образование комплексных соединений с медью. Содержание аминокислоты определяется по количеству меди в таком комплексе. Этот метод можно применять к смесям аминокислот, разделенных в одномерной хроматограмме. [c.161]

Методом одномерной хроматографии не удается разделить лейцин, изолейцин, и норлейцин для их разделения, как п для разделения некоторых других аминокислот, необходимо применение двухмерной хроматографии. [c.347]

Разделение оптически активных аминокислот методом хроматографии на бумаге. Этот метод, оказавшийся особенно пригодным для разделения оптических антиподов тирозин-З-сульфокислоты, состоит в одномерном проявлении растворителем, состоящим из равных частей метил- [c.913]

При изучении почвы использовали различные методы разделения на бумаге, в том числе восходящий, нисходящий, круговой, одномерный и двухмерный. Установлено, что состав аминокислот [c.319]

В двух различных системах растворителей можно добиться полного разделения всех аминокислот белковых гидролизатов (рис. 12). Для количественного определения аминокислот удобнее одномерные хроматограммы . [c.70]

Пробирочную технику можно использовать для получения предварительных данных по разделению аминокислот перед постановкой опытов с разделением больших количеств смеси на одномерных и двумерных хроматограммах. В качестве стандартных растворов рекомендуется использовать как казеиновый гидролизат, так и искусственную смесь искомых аминокислот. Таким путем возможно подобрать подходящую смесь растворителей [c.442]

Принцип распределительной хроматографии основан на различии в коэффициентах распределения аминокислот между водой и органическим растворителем. Особенность метода распределительной хроматографии на бумаге по сравнению с обычной экстракцией ам.инокислот из водного раствора органическим растворителем заключается в том, что одну из фаз, чаще всего водную, помещают на какой-нибудь инертный твердый носитель, а органический растворитель — подвижная фаза,— проходя через первую, извлекает и распределяет аминокислоты на бумаге в соответствии с их коэффициентами распределения. Положение аминокислот на бумаге определяют по отношению скорости движения аминокислоты скорости движения фронта растворителя и обозначают Rf. Величина за висит в первую очередь от строения аминокислоты, затем от системы растворителей, pH среды и сорта бумаги, Чем полярнее аминокислота, тем меньше она растворяется в органических растворителях и тем меньше ее R . Увеличение длины углеродной цепи повышает . Введение в молекулу полярных групп, например, гидроксильной, аминной или карбоксильной понижает Rf Так, Rf фенилаланина в системе фенол/вода = 0,85, а тирозиит 0,51. Другие примеры изменения в зависимости от строения аминокислоты представлены на рис. 3 и 4. Подбирая соответствующие смеси растворителей, можно провести достаточно тонкое разделение аминокислот. Наиболее часто пользуются для такого разделения системами вода — фенол — аммиа вода — бутапол — уксусная кислота бутанол — аммиак — коллидин и т. д. Разделение можно проводить на одномерной или двумерной хроматограммах. Можно пользоваться также различными типами распределительной хроматографии на бумаге — нисходящей, восходящей и радиальной. Величины Rt для каждой из систем растворителей оказываются постоянными при соблюдении [c.479]

На пластинках Фиксион 50x8 при однократном пропускании растворителя могут быть разделены 14—16 аминокислот, входящих в состав белка (рис. 19, 4). В случае недостаточно хорошего разделения смеси аминокислот одномерным способом прибегают к двумерной хроматографии, пропуская тот же или другой растворитель в направлении, перпендикулярном предыдущему. На практике поступают следующим образом. В две точки стартовой линии хроматограммы на рас- [c.135]

Для получения проявителя смешивают 100 мл раствора I и 20 мл раствора 2. Кадмий-нингидриновый реагент дает стабильную красную окраску со всеми аминокислотами (кроме Про, который в первые минуты проявления желтеет, а через несколько минут обесцвечивается). При одномерном разделении 16 аминокислот для достоверного отличия Гли от Ала, имеющих близкие значения Яр целесообразно применять коллидиновый раствор нингидрина, [c.248]

Рис. 162. Одномерное разделение в проточной камере([13], стр. 24) для обнаружения лейцина и изолейцина наряду с 18 белковыми аминокислотами, р-аланином и у Эмино-н-масляной кислотой.

Фиг. 6. Одномерные разделения методом Хейнса и др. [9]. А. П—Э — ФФ —(н-пропанол —этанол —пирофосфатный буфер). .Разделение серина и глицина рехроматографией. В. П —Э —Т (н-пропа-нол—этанол —тартратный буфер). Количество каждой аминокислоты (слева направо) 0,4, 0,3, 0,2, 0,1 мкмоль (сокращения те же, что в подписи к фиг. 2 и 7).

Ароматические и основные аминокислоты на пластинке Фик-сиоц 50 X 8 разделяются при одномерной хроматографии в цитратном буферном растворе pH 5,23 с концентрацией Ыа" 0,35 М (буферный раствор В, табл. 10), который используется в двухколоночной системе аминокислотного анализатора. Типичная хроматография такого разделения представлена на фиг. 49. Колебания pH и концентрации буферного раствора не существенны для фракционирования. Хроматографию проводят при комнатной температуре без предварительного уравновешивания. В камеру наливают слой буферного раствора высотой примерно 1 см. При хроматографии фронт буферного раствора должен подняться на высоту 15 см. Если пластинка не уравновешена, на это уходит около 2 ч. На уравновешенной пластинке (см. буферный раствор для уравновешивания, табл. 10) это происходит за несколько ми-нут. На примере разделения ароматических и основных аминокислот можно оценить Лиз высокую разрешающую спо-Гис обность ионообменной хроматографии в тонком слое по сравнению с соответствующей колоночной техникой. Известно, что на малой колонке в этом же буферном растворе (т. е. 0,35 М Ыа+, pH 5,23) ароматические аминокислоты не отделяются друг от друга. [c.250]

Характерные эталонные пятна слабо меняются при колебаниях величин Rf. Поэтому неизвестную пробу можно подвергнуть хроматографическому разделению вместе со стандартной смесью, содержащей определяемые аминокислоты в таком количестве (0,2 (хг), которое еще можно обнаружить при двумерном разделении (рис. 165). В большинстве случаев соединение в дсследуемом растворе определяется сразу и безошибочно по интенсивности соответствующего пятна. В табл. 109 наряду с полученными при одномерной хроматографии величинами приведены также величины, полученные при разделении во втором направлении при предыдущем хроматографическом разделении толуол -системой ( косвенно полученные величины Rf). Они хорошо воспроизводятся, если соблюдать изложенные в следующем разделе прописи для применения толуол -системы и промежуточного высушивания. [c.422]

Метод хроматографии на бумаге впервые был применен для анализа смеси аминокислот (Мартин, Кондсен, Гордон, 1944 г.). В настоящее время известно большое количество методов, которые позволяют анализировать сложные смеси аминокислот. При этом используют различные растворители, различные методы проявления, одномерные и двухмерные хроматограммы и др. В данной работе предлагается один из наиболее простых методов разделения и определения смеси двух или трех аминокислот. [c.65]

Хорошее разделение дансилпроизводных аминокислот осуществлено [190] на пластинках с силикагелем. Хроматография одномерная с последовательным исполь-116 [c.116]

Рис. 19. Одномерная хроматограмма в системе V для разделения смеси ФТГ-аспа-рагиновой и ФТГ-глутаминовой кислот. Нанесено по 0,5 мкг каждой ФТГ-аминокислоты [24].

Слои на полиэфирной пленке много тоньше, чем на стеклянных пластинках. Они быстро просыхают менсду двумя пробегами в двумерной хроматографии (5 мин вместо 15 в случае стеклянных пластинок). Этот момент важен при работе со свето-и теплочувствительными соединениями. Качество разделения на полиамидных слоях, нанесенных на полиэфирную пленку, значительно лучше, чем нанесенных на стеклянные пластинки. Площадь пятна получается меньшей, пятно компактное, нерастянутое. Для разделеш1я ДНФ-аминокислот достаточно подъема растворителя на 8 см вместо 10 см на стеклянных пластинках. В количественных целях не трудно элюировать разделенные вещества, так как пятна для эи стракцип можно вырезать. Обе стороны пленки не зависят друг от друга. При одномерной хроматографии на двух сторонах пленки размером 15x15 см можно хроматографировать до 30 образцов. [c.142]

Бреннер и др. [107] исследовали разделение ФТГ-производ-ных на слоях силикагеля в четырех различных растворителях. Патаки [119] определил этим методом величины для 34 про-Д13В0ДНЫХ аминокислот (табл. 17.7). Он же усовершенствовал этот метод [120], благодаря чему ФТГ-кислоты удается отделить от основной части пробы, проводя два двумерных и одно одномерное хроматографирование. Одно двумерное разделение осуществляют смесями хлороформ—метанол (9 1) и хлороформ— муравьиная кислота (20 1). Для второго двумерного разделения используют хлороформ и смесь н-гептан—1,2-дихлорэтан— муравьиная кислота—пропионовая кислота (30 10 7 6). Третье одномерное хроматографирование проводят со смесью. следующих растворителей хлороформ—метанол—муравьиная кислота (35 15 1). [c.501]

Описанным методом получали одномерную хроматограмму. Для дальнейшего разделения аминокислот поступали следующим образом ( месь аминокислот наносили вблизи угла квадратного листа бумаги 45X45 с <, хроматографировали одним проявителем, например коллидином. Бумажный лист сушили, поворачивали на 90 и погружали в другой лоток с фенолом. Аминокислоты идентифицировали путем сравнения с хроматограммами известных аминокислот, полученными в этой же камере за такой же промежуток времени. [c.317]

При двухмерной хроматографии разделяемую смесь аминокислот наносят на один из углов листа фильтровальной бумаги в 5—7 см от обоих ее краев. Конец листа погружают на 12—24 ч в насыщенный водой фенол, а после высушивания бумаги на воздухе лист поворачивают и другой (прилегающий к нанесенному пятну) край листа погружают еще на 12—24 ч в коллидин, смесь пиридина (2-пиколина) и хинолина или другую смесь. Дальнейшее проявление производится так, как описано выше. На двухмерной хроматограмме разделяются те пятна, кото-рые на одномерной не разделились являются еще смесями нескольких минокисл от. При строгом соблюде- НИИ соответствующих условий до-Тч стигается полное разделение всех аминокислот (рис. 6). [c.17]

Разделение производных Пе и Leu достигается одномерной хроматографией на пластинках с силикагелем в системе хлороформ— этанол (100 3) [9]. После высушивания пластинку помещают в пары НС1, при этом желтые пятна превращаются в красные или голубые (рис. 14.3). Успешная идентификация ДАБТГ-производных аминокислот в значительной степени за- [c.422]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология