Транскриптаза

Таким образом, общая схема репликации / транскрипции генома этих вирусов поразительно похожа на схему репликации / транскрипции генома ретровирусов, По-видимому, это сходство имеет под собой эволюционную основу во всяком случае, аминокислотные последовательности обратных транскриптаз всех трех групп вирусов (гепатита В, мозаики цветной капусты и ретровирусов) выявляют определенное сходство между собой. [c.316]

В качестве еще одного примера белка, отличающегося практически одинаковым сродством к ионообменникам обоих типов, т. е. четко выраженной амфотерностью, можно назвать п обратную транскриптазу из вируса миелобластоза птиц (AMV). Проиллюстрируем это обстоятельство сопоставлением хроматографических этапов двух недавно опубликованных методов очистки данного белка. [c.308]

Пример 14. Очистка обратной транскриптазы из AMV. [c.308]

Благодаря сходству структуры своего лиганда со структурой РНК (гепарин является конкурентным ингибитором для РНКазы) гепарин-сефароза широко используется для очистки РНК-полиме-раз, обратной транскриптазы, факторов трансляции и др. [c.422]

Необычайный интерес в последние годы вызвали РНК-содержащие онкогенные вирусы. Большинство исследователей, занимающиеся биохимической генетикой и функциями нуклеиновых кислот, считали, что ДНК образуется только за счет репликации других молекул ДНК- Если транскрибирование РНК с ДНК может протекать свободно, то обратный процесс, а именно образование ДНК на РНК-матрице, считался маловероятным. Большой неожиданностью поэтому оказалось обнаружение во многих онкогенных РНК-содержащих вирусах, и в том числе в вирусах, вызывающих у животных лейкоз, РНК-зави-симой ДНК-полимеразы (т.е. обратной транскриптазы). Этот фермент обнаруживается в зрелых вирусных частицах. Наиболее тщательно очищенный фермент вирусов миелобластоза птиц состоит из двух белковых субъединиц, имеющих мол. вес ПО ООО и 70 000, и содержит два атома связанного Zn +. Для функционирования фермента необходима короткая затравка и матричная цепь РНК. При этом сначала получается гибрид ДНК—РНК, из которого затем (вероятно, после гидролитического расщепления цепи РНК под действием РНКазы Н, разд. Д, 5, в) получается двухцепочечная ДНК. Таким образом, заражение РНК-содержащими вирусами сопровождается образованием [c.288]

Рассмотренные нами структуры отдельных РНК — предшественник РНК-тирозинтрансферазы [5] и прерванная последовательность рибосомальной РНК [6] — были изучены экспериментально при условиях ренатурации. Иными словами, их скручивание произошло при условиях без ограничений в противоположность тому, что можно было ожидать в ходе транскрипции, в которой зарождающийся конец молекулы ограничен, следуя за транскриптазой. Полагают, что кинетика скручивания является достаточно быстрой для того, чтобы следовать за транскрипцией, и поэтому может оказаться, что ограничение, налагаемое на один конец и не позволяющее двигаться свободно, — решающий посредствующий фактор. Экспериментальные данные, подтверждающие такую точку зрения, отсутствуют, но также не ясно, какой должна быть эта посредствующая роль при условии, что вторичная структура высоко-специфична по последовательности аминокислот. [c.528]

Кислый аминополисахарид гепарин [М> 10 ООО) известен в качестве антикоагулянта крови. Кроме того, он применяется в биохимии как ингибитор рибонуклеаз. Это его качество, по-видимому-отражает некоторое сходство полимера, содержащего две-три суль, фогруппы на каждую дисахаридную структурную единицу, с РНК-Две эти особенности определили использование гепарина в качеств, лиганда для аффинной хроматографии факторов коагуляции крове и (особенно широко) для очистки белков, взаимодействующих и нуклеиновыми кислотами (полимераз, обратной транскриптазы, рес стриктаз, факторов инициации и элонгации белкового синтеза и др.). Кроме того, иммобилизованный гепарин связывает липопротеид-липазы и некоторые липопротеиды. Гепарин-агароза выпускается всеми упомянутыми фирмами-поставщиками аффинных сорбентов, кроме Bio-Rad . [c.370]

Кроме поли(А)-мРНК, на поли(и)-агарозе удается сорбировать и очищать обратную транскриптазу и интерферон. В этом случае специфическое взаимодействие белка с поли(и)-последовательностью осуществляется не за счет водородных связей, а по-видимому, за счет взаимодействия ионов, так как элюцию удается осуществить с помощью высокой концентрацип соли (при элюции мРНК соль пз элюента удаляют). Следует помнить, что поли(и) атакуется рибо-нуклеазой, которую необходимо удалить пли блокировать в препаратах, вносимых на полп(и)-сефарозу, [c.372]

Помимо очистки мРНК п белков, связываюш ихся с ДНК, для олиго((1Т)-целлюлозы в последние годы открылась новая важная область применения — в качестве матрицы и затравки для полимераз и обратных транскриптаз, ведущих соответствующие комплементарные синтезы нуклеиновых кислот in itro. [c.373]

Пример 8. Очистка обратной транскриптазы из вируса миелобластоза птиц [Golomb, Grandgenett, 1979]. Обратная транс- [c.422]

Способность обратной транскриптазы копировать молекулы РНК имела важное значение для- получения цепей ДНК с теми же последовательностями, что и уникальные молекулы РНК (например, мРНК, синтезируемая в высокоспециализированных клетках типа предшественников эритроцитов, в которых образуется только один гемоглобин). Полученные таким способом ДНК-копии (иногда их называют кДНК) могут быть использованы в самых различных биохимических исследованиях. При соответствующих условиях ДНК-полимераза I также может точно копировать последовательность РНК [241]. [c.289]

Среди РНК-зависимых ДНК-полимераз (обратных транскриптаз) наиб, изучены ферменты, продуцируемые ретровирусами (в т.ч. вирусом, вызывающим СПИД), гепаднавирусами (напр., вызывающими гепатит В) и др. Они также сильно различаются по мол. массе, субъ-единичному составу содержат полимеризующий активный центр, а иногда также эндорибонуклеазный активный центр, расщепляющий вирусную РНК после окончания синтеза на ней провирусной ДНК. [c.625]

Определены первичные структуры ДНК-полимеразы I из Е. oli, ДНК-полимеразы человека и крысы, ряда вирусных обратных транскриптаз и др. Гены нек-рых ДНК-полимераз клонированы и экспрессированы (встроены в генетич. аппарат) в Е. oli. Ингибиторы разл. ДНК-полимераз-гл. обр. аналоги 2 -дезоксинуклеозидов и 2 -дезоксинуклеотидов. Нек-рые из них (напр., З -азидо-З -дезокситимидин, или азидотимидин) применяют в противовирусной терапии, в т.ч. против СПИДа. [c.625]

РНК-полимеразу открыли С. Вейс, Ж. Гурвиц и О. Стивенс в I960 ими же установлено ее значенне в синтезе РНК. Концепцию транскриптона (оперона) сформулировали Ф. Жакоб и Ж. Моно в 1961. X. Темин и Д. Балтимор в 1970 открыли обратную транскриптазу и механизм синтеза ДНК на РНК-матрице. [c.620]

Работы по генетике оикогениых вирусов и открытие фермента обратной транскриптазы [c.781]

Идентификация модифицированных нуклеотидных остатков в полинуклеотидной цепи РНК долгое время была задачей особой трудности. С появлением современных методов секвенирования нуклеиновых кислот она существенно упростилась. Модификацию РНК или ее расщепление ферментами ведут таким образом, чтобы (как и при секвенировании) было затронуто в среднем только одно звено на молекулу (в чем есть дополнительный смысл, так как. множественная модификация РНК искажает ее структуру). Далее, если изучается РНК небольшого размера или сегмент РНК, примыкающий к одному из ее концов, то этот конец метят радиоактивной меткой и задача идентификации модифицированного основания (после расщепления соответствующего звена) или атакованной нуклеазой межнуклеотидной связи сводится, как и при секвенировании, к определению длины фрагмента по его подвижности в высокоразрешающем электрофорезе в геле. В том случае, когда анализируемый район удален от концов молекулы на расстояние больше 150—200 н. о., используют реакцию обратной транскрипции (см. гл. 13). Для этого синтезируют олигонуклеотид, комплементарный участку РНК, расположенному вблизи от анализируемого района с З -концевой стороны молекулы, и далее используют его как праймер для обратной транскриптазы. Так как этот фермент останавливается на модифицйрованных остатках матрицы (или в том месте, где расщеплена фосфодиэфирная связь), то вновь по длине образующегося фрагмента можно определить положение модифицированного звена в РНК- [c.40]

Детальное исследование молекулярной организации генома высших эукариот, особенно млекопитающих, показало, что существенная часть генома, около 10 % общей массы ДНК, образовалась в результате интеграции в геном фрагментов ДНК, синтезирован-лых на РНК-матрицах в результате обратной транскрипции (рис. 118, а). Впервые подобный процесс был описан при исследовании ретровирусов, в геноме которых имеется ген, кодирующий обратную транскриптазу (ревертазу) (см. гл. ХИ1). В геноме млекопитающих, птиц, амфибий и насекомых обнаруживаются ретропо-зоны, представляющие собой внедрившиеся в геном ДНК-копии, синтезированные на разных типах клеточных РНК как на матрицах. Молекулярные механизмы ретропозиции не изучены, остается не установленным источник клеточной обратной транскриптазы. Не ясно, что служит затравкой для ревертазы возможно, это шпилька на З -конце РНК, образующаяся в результате комплементарных взаимодействий. Как будет видно, структура ретропозонов позволяет с уверенностью говорить об участии обратной транскрипции в процессе их образования. Таким образом, наряду с переносом информации от ДНК к РНК осуществляется и обратный процесс — возвращение ее в геном в виде ретропозонов. У млекопитающих ретропозоны составляют более 10 % ДНК следовательно, мощность встречного потока информации от РНК к ДНК может быть существенной, по крайней мере при оценке его во временном эволюционном масштабе. Различают разные типы ретропозонов. [c.222]

Один из способов перемещения требует прежде всего образования РНК-матрицы, которая копируется при участии обратной транскриптазы (рис. 118). Это было экспериментально доказано для ретротранспозонов дрожжей и дрозофилы. Ретротранспозоны транскрибируются с помощью РНК-полимеразы II. В составе ДКП имеются сайты инициации транскрипции и сигналы полиаденилирования. ДКП могут служить активными промоторами. Юанскрипция начинается в одном ДКП (условно левом, 5 -ДКП) [c.227]

Дальнейшие этапы репликации в самом общем виде представляются следующим образом. Синтез ДНК на РНК-матрице происходит в результате обратной транскрипции, катализируемой вирус-специфической ДНК-полимеразой, которая способна использовать в качестве матрицы как ДНК, так и РНК, т. е. обладает свойствами обратной транскриптазы (ревертазы). Сначала синтезируется (—)нить ДНК при этом в качестве затравки в случае вируса гепатита В используется белок (возможно, в виде нуклеотид-белкового комплекса), а в случае вируса мозаики цветной капусты — одна из клеточных тРНК- Затем на вновь синтезированной (—)нити ДНК тот же фермент строит (+)нить. [c.316]

Смотреть страницы где упоминается термин Транскриптаза: [c.44] [c.222] [c.227] [c.309] [c.587] [c.174] [c.243] [c.373] [c.429] [c.438] [c.447] [c.448] [c.288] [c.518] [c.667] [c.110] [c.726] [c.133] [c.20] [c.224] [c.226] [c.227] [c.309]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология