Флуоресценция вращательная деполяризация

Для системы, в которой оптически анизотропные флуоресцирующие молекулы распределены статистически, степень такой вращательной деполяризации флуоресценции можно связать с вращательными движениями молекулы следующей зависимостью [c.277]

Вращательная деполяризация флуоресценции [c.63]

Для измерения вращательной деполяризации используют сравнительно простую схему с фильтрами для выделения нужных длин волн возбуждающего света и света флуоресценции. Такой прибор описан Джонсоном и Ричардсом [212]. Общая схема его приведена на рис. 112. Ультрафиолетовый свет ртутной лампы А освещает щель 51, лучи света проходят через [c.278]

Что касается вращательной деполяризации фосфоресценции, то она использовалась сравнительно мало. Ввиду большого времени жизни фосфоресценции ее деполяризация проявляется при гораздо больших вязкостях, чем деполяризация флуоресценции (ср., например, четвертый и пятый столбцы табл. 43). Если известны время жизни и молярный объем фосфоресцирующих молекул, то в принципе по деполяризации фосфоресценции можно [c.373]

В недавно опубликованном обзоре [10] дана интерпретация явления флуоресценции в полимерных системах, а именно процессов внутреннего вращения флуоресцентных молекул, вращательной деполяризации флуоресценции и тушения флуоресценции в результате бимолекулярных процессов. Эта теория может быть рассмотрена в рамках внутреннего движения в полимерных системах. Флуоресцентная техника, применяемая для изучения поли- [c.170]

Деполяризация флуоресценции. Альтернативой методу переноса энергии является метод деполяризации флуоресценции, предложенный авторами [4]. В основе последнего лежит различие скоростей вращательной диффузии свободного и связанного с рецептором аналога определяемого вещества. Когда аналог связан с высокомолекулярным рецептором, скорость его вращения замедляется, что приводит к уменьшению деполяризации испускаемого света. Таким образом, увеличение степени поляризации флуоресценции непосредственно связано с количеством связанного аналога. В наборах для иммуноанализа, основанного на этом принципе, можно использовать низкомолекулярные аналоги определяемых веществ, поскольку сохранение реагентов не составляет проблемы. В случае биосенсоров желательно, чтобы молекулы аналога были достаточно велики и удерживались диализной трубкой, так что молекулярная масса аналога должна быть порядка нескольких тысяч. Это, однако, приведет к снижению чувствительности метода, так как для больших молекул аналога различие скоростей вращательной диффузии в свободном и связанном состоянии уменьшается. [c.512]

Под действием электрического поля волны молекулы в частице дисперсной фазы приобретают преимущественную ориентацию в пространстве. В то же время тепловое движение молекул дисперсионной среды стремится их разориентировать. Поступательная комтонента броуновского движения не оказывает никакого влияния на поляризационные характеристики свечения. Вращательное броуновское движение вызывает деполяризацию свечения. Молекулы в частице поглощают падающее излучение практически мгновенно, переходя в возбужденное состояние. В возбужденном состоянии они находятся в течение некоторого времени, называемом средней продолжительностью жизни возбужденного состояния. Затем происходит высвечивание. Именно за период пока молекулы возбуждены происходит поворот час-Т1ЩЫ на некоторый угол. Вращательная деполяризация флуоресценции определяется параметра.ми, характеризующими саму частицу, т. е. объемом и средней длительностью возбужденного состояния и величинами, характеризующими дисперсионную среду, т. е. вязкостью и температурой. [c.97]

Адзуми и Мак-Глинн [64] описали другие методы корректировки. Один из этих методов основан на том, что при довольно малой вязкости растворителя и большом времени испускания наблюдается полная вращательная деполяризация. Они измерили кажущуюся поляризацию флуоресценции 10 М раствора фенантрена в метилциклогексане и нашли, что Рц и / х меняются с изменением длины волны как монохроматора возбуждения, так и монохроматора люминесценции. Однако при постоянной длине волны монохроматора люминесценции отношение Яц/Я остается постоянным по всему спектру возбуждения. Они сделали вывод, что в действительности флуоресценция была не-поляризована и что изменение / ц и / х вызвано прибором. В этом случае отношение Я /Р равно требуемой величине Т. [c.283]

Применение флуоресцентных методов при изучении полимеров рассмотрено Остером и Нисиджимой [250]. Рассмотрены также вопросы связи внутреннего вращения флуоресцирующей молекулы, вращательной деполяризации и тушения флуоресценции при бимолекулярных процессах с локальной или микроскопической вязкостью среды. [c.143]

Деполяризация флуоресценции малой молекулы, обладающей в жидком растворе коротким временем вращательной релаксации, сильно снплсается, если эту молекулу связать с большой молекулой полимера. Поэтому измерения поляризации можно использовать для определения доли связанных молекул и, следовательно, константы равновесия этого обратимого процесса. Таким способом Велик [310] измерил константы равновесия комплексов коферментов, а Лоуренс [311] изучил равновесие между красителями и белками и их комплексами. [c.374]

Диапазон времен релаксации, который может быть исследован путем, измерения деполяризации флуоресценции, определяется продолжительностью жизни возбужденных компонентов использованных флуоресцирующих красителей этот диапазон обычно колеблется от 10до 10 сек. Типичные значения времен релаксации %е - 1,2-10 сек для 1-диметил-аминонафталин-5-сульфонильных производных и 5-10" сек для производных флуоресцина [486]. Следовательно, с помощью этого метода можно характеризовать молекулы с коэффициентом диффузии порядка 10 сек- , которые нельзя исследовать при помощи двойного лучепреломления в потоке. Этот диапазон значений Ог очень важен, поскольку он охватывает более мелкие молекулы глобулярных белков. Следует также указать, что деполяризация флуоресценции может быть измерена с одинаковой легкостью независимо от того, является ли форма молекулы растворенного вещества асимметрической или сферической. Таким образом, можно исследовать вращательную диффузию даже частиц, которые не могут быть ориентированы каким-либо образом. [c.252]

Присоединение флуоресцирующего остатка к гибкой цепной молекуле приводит к совершенно иной картине. Брехбулер и Мага [725] впервые провели измерения для цепных молекул, несущих на своих концах флуоресцирующий краситель. Системы этого типа детально были изучены-Нишиджимой (см. [487]). Как и следовало ожидать, вращательное движение остатка красителя не требует перемещения всей молекулы в целом, и поэтому деполяризация флуоресценции не зависит от длины полимерной цепи при условии ее достаточной длины. Отсюда этот метод имеет большую ценность для определения сопротивления движению заместителя присоединенного к более или менее гибкой цепи. [c.252]

Флуоресцентные метки. Степень изменения поляризации флуоресценции зависит от метки, среднего времени жизни молекулы в возбужденном состоянии, молекулярной массы антигена и природы комплекса. Считается, что молекулярная масса комплекса не должна превышать 20 ООО. Среднее время жизни молекулы в возбужденном состоянии примерно, равно среднему времени релаксации антигена, которое составляет несколько наносекунд. Однако при измерении подвижности мембранных белков метка должна существовать в возбужденном состоянии намного дольше, так как время вращательной релаксации таких белков лежит в диапазоне миллисекунд. Время жизни триплетного состояния сравнимо с временем вращательной релаксации мембранных белков, поэтому последние рекомендовалось изучать с помощыо деполяризации фосфоресценции [10]. При разработке методик ФИА выбор флуоресцентной метки имеет ключевое значение. В принципе метка должна обладать следующими качествами [c.142]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология