Ковалентная хроматография

Для иллюстрации изложенных в предыдущем разделе обш их соображений и возможностей использования различных аффинных сорбентов рассмотрим определенное число примеров, отобранных из периодической научной литературы последних трех лет. Большая их часть относится к очистке ферментов клеточного метаболизма (и отдельно — белков, регулирующ,их активность нуклеиновых кислот). Далее будут приведены примеры аффинного фракционирования и очистки самих нуклеиновых кислот, в том числе на иммуносорбентах. Основное внимание уделим более простому и универсальному методу — неспецифической элюции, однако био-снецифическая аффинная элюция белков тоже будет представлена несколькими типичными примерами. Рассмотрение начнем с использования сорбентов с индивидуальной специфичностью, ограничившись здесь тремя примерами, поскольку нет смысла пытаться сколько-нибудь полно иллюстрировать бесчисленное разнообразие возможных сорбентов этого типа. Аффинная хроматография белков клеточного метаболизма на сорбентах с групповой специфичностью будет иллюстрирована подробнее, а затем последуют два примера использования ковалентной хроматографии. [c.412]

Применение тиоловых сорбентов для ковалентной хроматографии нуклеиновых кислот базируется на возможности получения их ртутных производных. Такие производные можно получать двумя способами. Во-первых, в ходе матричного синтеза РНК можно использовать меркурированные по Св пиримидинового кольца [c.436]

СОРБЕНТЫ ДЛЯ КОВАЛЕНТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ [c.394]

Ковалентная хроматография, как говорит само название, предполагает образование ковалентной химической связи между лигандом и веш еством, подлежащим хроматографической очистке. Поэтому отнести этот метод к категории аффинной хроматографии можно лишь условно. Такое отнесение оправдывается двумя обстоятельствами. Во-первых, этот весьма общий (и потому не очень удачный, но уже укоренившийся) термин на самом деле подразумевает образование лишь двух типов ковалентной связи между лигандом и веществом [c.394]

Ковалентная хроматография ограничивается образованием двух видов связей с участием серы ввиду того, что эти связи лабильны — могут быть образованы, а затем разрушены в ходе окислительных и восстановительных реакций, идущих в мягких условиях, что позволяет сохранять нативность сорбируемых веществ. Лабильность связей, очевидно, является необходимым условием любого хроматографического процесса. [c.395]

Ковалентная хроматография ртутных производных НК [c.436]

Ковалентная хроматография представляет собой вид хроматографии по неизбирательному сродству, при которой матрица, богатая сульфгидрильными (SH) группами и активированная путем обмена сульфгидрильных и дисульфидных групп, избирательно связывает все вещества, тоже содержащие SH-группы посредством образования смешанного дисульфида. [c.83]

В т. н. ковалентной хроматографии (разновидность [c.60]

Между выделяемым белком и нерастворимым носителем образуется ковалентная связь, которая после отмывки несорбированного материала расщепляется под действием избытка низкомолекулярного тиола К5Н. Поскольку имеет место образование ковалентной связи, этот тип хроматографии называется ковалентной хроматографией и рассмотрен в разд. 7.2. [c.125]

Приведенный перечень наиболее часто употребляемых продажных лигандов с групповой специфичностью, которые нам казалось необходимым хотя бы вкратце охарактеризовать, далеко не исчерпывает всего пх многообразия. Сюда не вошли, например, аминокислоты, различные сахара и амииосахара, производные холевой кислоты, спермин, протамнн, гистон, биотин и авидин, ингибиторы трипсина, апротинин, желатин и др. В этот перечень не были включены и тпо-ловые сорбенты для ковалентной хроматографии, в которой используется образование временных связей между лигандом и веш,е-ством. Такие сорбенты будут рассмотрены отдельно. [c.375]

S—S и S—Hg, так что выделение ковалентной хроматографии в отдельную главу не оправдано. Во-вторых, необходимым условием для возникновения таких связей, очевидно, является наличие на лиганде и веществе свободных тиогрупп (—SH), способных образовать мостик S—S, или SH-группы и атома двухвалентной ртути, например в составе радикала —Hg l. В этом смысле можно говорить о необходимости определенного рода сродства между лигандом и веществом, которое, разумеется, не является строгим один и тот же несущий 8Н-группу лиганд может связывать самые разнообразные белки, модифицированные нуклеиновые кислоты и низкомолекулярные соединения, если в них есть необходимый радикал. Так что речь мо- [c.394]

В числе аффинных сорбентов, выпускаемых той и е фирмой, есть еще один, предназначенный также для ковалентной хроматографии. В отличие от всех предыдущих он па конце довольно длинного спейсера несет атом ртути, охотно связывающий меркаптосоедюшния. Такой сорбент мончно использовать, например, для выделения из смеси пептидов, содержащих цистеин [c.397]

Выделение пептидов с остатками цистеина на ртутьсодержащих адсорбентах осуществляется благодаря образованию ковалентных связей и на этом основании может рассматриваться как первый пример ковалентной хроматографии. В ряде работ было описано получение ртутьпроизводных сефарозы [51, 52], целлюлозы [53], сефадексов [54] и сополимера малеиновой кислоты с этиленом [55]. На последнем адсорбенте были выделены SH-пептиды из пептического гидролизата восстановленного инсулина [56]. После элюирования меркаптоэтанолом SH-группы карбоксиметилировали и смесь пептидов разделяли обычными методами. [c.417]

Тиол — специфический сорбент для ковалентной хроматографии. Образуется в результате закрепления на агарозе, активированной бромцианом, вначале глютатиона, а затем 2,2 -дипиридилсульфида активные группы — [c.227]

Ковалентная хроматография основана на ковалентном связывании поглощаемого вещества. Активированный сорбент в мягких условиях, без участия посторонних реагентов, взаимодействует с веществами, которые содержат меркап-тогруппы [c.227]

Если аффинный лиганд присоедипен к матрице с помощью азосвязи или сложноэфирными связями тиолов или спиртов, с нерастворимой матрицы можно снять комплекс аффинного лиганда с выделяемым веществом, а затем аффинный лиганд отделить диализом или гель-фильтрацией. Этот способ, однако, не позволяет повторно использовать аффинную матрицу. Носители такого типа детально обсуждены в разделе о ковалентной хроматографии (разд. 7.2). [c.272]

Специфические сорбенты, использующие исключительные свойства биологически активных веществ образовывать специфические и обратимые комплексы, в огромной степени облегчают выделение ряда ферментов, их ингибиторов и кофакторов, антител и антигенов, лектинов, гликопротеинов, гликополисахаридов, нуклеиновых кислот, нуклеотидов, жиров, транспортных и рецепторных белков, гормонов и их рецепторов, клеток и многих других соединений, как это представлено в обзорной табл. 11.1. Наряду с названием выделяемого вещества в таблице приведены также используемые аффинные лиганды, нерастворимые носители и пространственные группы, причем указано, аффинный лиганд или нерастворимая матрица модифицированы данной пространственной группой. Обзорная таблица включает выделения веществ как с помощью типичной биоаффинной хроматографии, так и с помощью гидрофобной или ковалентной хроматографии. [c.367]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология