Меркаптоэтанол

Белки, обработанные концентрированным раствором додецилсуль-фата натрия в присутствии р-меркаптоэтанола, распадаются на отдельные полипептидные цепи и приобретают отрицательный заряд, значительно превышающий собственный заряд белковой молекулы. При последующем разделении с помощью диск-электрофореза в полиакриламидном геле белковые зоны распределяются на электрофореграммах таким образом, что подвижность белковой зоны обратно пропорциональна логарифму молекулярной массы. Метод дает возможность определять молекулярные массы субъединиц олигомерных белков. Электрофоретическое разделение можно проводить различными методами. Ниже описаны два из них метод Вебера и Осборн, а также метод, предложенный Лэммли. [c.119]

M. 50 мг ОФА растворяли в 1 мл этанола, добавляли 50 мкл Р-меркаптоэтанола, затем смешивали с 90 мл воды, куда было добавлено 3 г борной кислоты и КОН до pH 10,5. Объем смеси доводили до 100 мл водой и добавляли 0,3 мл 30%-ного раствора Бридж-35, что увеличивает флюоресценцию лизина. Полученный таким образом реактив за 3—4 мин до впрыскивания в колонку смешивали с раствором аминокислот. [c.195]

Что известно о лабильности каждого из очищаемых компонентов смеси Каков в этой связи допустимый диапазон изменения pH, температуры, имеется ли необходимость введения в элюент глицерина, -меркаптоэтанола или его аналогов, а также неионных детергентов [c.286]

Подготовка образцов. В растворы опытных и стандартных белков, содержащие 2—5 мг/мл, добавляют 10%-ный ДСН до конечной концентрации 1% и р-меркаптоэтанол (для предотвращения неспецифической агрегации полипептидных цепей) до конечной концентрации 1—5%. Образцы выдерживают 5 мин при температуре 90° С. Если опытные или стандартные образцы находятся в растворах, содержащих ионы К+ или NH4+, перед обработкой ДСН их нужно обессолить диализом или гель-хроматографией, так как додецилсульфат калия и аммония плохо растворимы в воде. [c.120]

Б. Буфер для приготовления образцов 0,0625 М трис-НС1 буфер, pH 6,8, 2%-ный ДСН, 10%-ный раствор сахарозы (или глицерин), 0,001%-ный бромфеноловый синий. Перед употреблением в указанный раствор добавляют 3-меркаптоэтанол до конечной концентрации 5%. [c.121]

Буфер для разведения фермента Ыа-р-глицерофосфат 50 мМ, pH 7,0 содержащий 0,1% 2-меркаптоэтанол (буфер А). [c.223]

Малеат-Ыа-0,1 М раствор, pH 6,6 содержащий 1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина и 0,2%-ный 2-меркаптоэтанол (добавляют перед использованием). [c.223]

Na-p-глицерофосфат 50 мМ — 0,1%-ный 2-меркаптоэтанол (добавляют перед использованием), pH 7,0 (буфер Б). Растворы готовят на бидистиллированной воде. Работу проводят при [c.225]

Итак, при выборе режима хроматографии или при анализе результатов описанного в литературе хроматографического эксперимента следует оценить роль следующих параметров элюента природы, концентрации, pH и емкости буфера, в частности близости выбранного значения pH к границе нормального диапазона эффективной буферной емкости природы ь концентрации ионов соли температуры, вязкости п диэлектрической проницаемости растворителя (с ее уменьшением ослабляется ионизация обменника) наличия в элюенте добавок, обеспечивающих нативность биологического препарата (глицерин, р-меркаптоэтанол или ДТТ, ионы Mg и др.), улучшающих его растворимость или препятствующих агрегации его молекул (детергенты, мочевина, органические растворители), блокирующих негиецифическую сорбцию вещества на материале матрицы (мочевина, детергенты и др.). [c.256]

На первый взгляд условия элюции с обменников обоих типов очень похожи, хотя сродство белка к анионообменннкам, по-видимому, несколько больше, чем к фосфоцеллюлозе. Однако более внимательное рассмотрение условий хроматографии обнаруживает еще одно (в данном случае — важное) отличие. В состав обычных стабилизирующих добавок для обоих анионообменников входили, помимо глицерина, 5 мМ Mg la, 10 мМ -меркаптоэтанола, 1 мМ [c.307]

Элюцию вещества с лиганда осуществляют также путем восстановления S—S-свя.зи, пропуская в качестве элюента через колонку раствор цистеина (5—20 мМ в буфере с pH 8), меркаптоэтанола или ДТТ. Примеры режимов элюцпи приведены ниже отметим только, что при очистке белка концентрация восстанавливающего агента в элюенте должна быть минимально необходимой, чтобы избежать восстановления и разрыва внутримолекулярных S—S-связей белка. [c.396]

Фактор элонгации EF-1 из ретикулоцитов кролика после предварительного фракционирования суиернатанта осаждением сульфатом аммоння очищали на колонке гепарин-сефарозы сначала в статическом режиме. Элюцию вели 0,25 М раствором КС1 в 0,02 М Трис-НС1 (pH 7,5) с 2 мМ -меркаптоэтанола. Очистку на гепарин- [c.423]

Белки, снятые с рибосом промывкой 0,5 М КС1, фракционировали осаждо-нием раствором сульфата аммония между 40 и 50% от насыщения, диализовали против буфера, содержавшего 0,1 М КС1, 0,02 М Трис-НС1 (pH 7,6), 14 мМ -меркаптоэтанола, 10% глицерина и 0,1 мМ ЭДТА, и вносили в колонку (10 X 1,5 см) с рибосомальной РНК из ретикулоцитов кролика, иммобилизованной на целлюлозе Whatman F-11 с помош ью УФ-облучепия. Колонку уравновешивали и промывали тем же раствором. Элюцию вели линейным градиентом (200 мл) 0,1—0,5 М КС1 в том же буфере со скоростью 1 мл/мин. Фактор eIF-2 выходил при концентрации соли около 0,32 М. [c.424]

Аффинную очистку метилаз вели на сорбенте, полученном иммобилизацией SAH на сефарозе. Исходной матрицей служила AH-Sepharose 4В . Спейсер активировали присоединением остатка бромуксусной кислоты в] реакции с О-бром-ацетил-К-оксисукцинимидом. SAH фиксировали инкубацией с суспензией активированного сорбента в течение 3 сут при комнатной температуре. Частично очищенный фермент сорбировали на ВАН-сефарозе в 0,005 М Na-фос-фатном буфере (pH 6,2) с 5 мМ ЭДТА и 2,4 мМ -меркаптоэтанола. Биоспецифи-ческую элюцию вели раствором субстрата — 0,02 мМ SAM в том же буфере. [c.432]

Суммарную ядерную РНК растворяли в 0,5—1 мл 0,01 М Na-ацетатного буфера (pH 6), содержащего 0,5% ДДС-Na, и прогревали 5 мин при 100° для разрушения агрегатов и диссоциации возможных двунитевых структур РНК и остаточных РНК—ДНК-гибридов. Затем раствор вносили на термостатированную при 50° колонку тиопропил-сефарозы 6В размером 5 х 1 см, уравновешенную тем же раствором, и выдерживали при этой температуре 30 мин. Повышенная температура (но не выше 50° ) увеличивает эффективность связывания на сорбенте новосинтезированной меркурированной РНК. Затем температуру снижали до 20° и промывали колонку последовательно избытком того же буфера, водой, 50%-ным водным раствором диметилсульфоксида (ДМСО) и снова водой. Отмечено, что промывка ДМСО существенно улучшала избирательность связывания Hg-PHK. Элюцию последней вели 50 мМ раствором -меркаптоэтанола в 0,01 М Na-ацетатном буфере (pH 6). Для отбора фракций, содержащих РНК, ее в ходе синтеза одновременно с меркурированием метили тритием с помощью H-UTP. [c.437]

Флюоресцамин при опрыскивании реагирует не более чем с 10% общего количества каждого пептида, поэтому материал из каждого пятна соскребали, переносили в пастеровскую пипетку с пробкой из стеклянной ваты, откуда пептид алюпровали тремя порциями (по 0,2 мл) 6 н. НС1 с добавлением 0,02% -меркаптоэтанола. Элюат отфильтровывали от следов целлюлозы на мембранном фильтре и подвергали кислотному гидролизу для аналпза аминокислотного состава пептида. [c.487]

Тепловая обработка. К полученному после диализа раствору белка (измеряют объем) добавляют L-цистеин (или 2-меркаптоэтанол). до 0,03 М концентрации, ЭДТА — до 0,5 мМ и 2 М. раствором триса доводят pH до 7,5. Инкубируют при 37° С в течение 30 мин в термостатированной бане, затем раствор охлаждают до 25° С и центрифугируют при комнатной температуре. Осадок отбрасывают, а pH супернатанта увеличивают до 8,2, добавлением 2 М раствора триса, инкубируют в тех же условиях. К охлажденному до 25° С белковому раствору добавляют 1 н. СНзСООН до pH 7,0. В случае образования мути раствор центрифугируют, осадок отбрасывают. [c.222]

Кристаллизация. Раствор белка охлаждают (можно использовать охлаждающую смесь Na l со льдом). К охлажденному до 0° С раствору добавляют АМФ и Mg (СНзСООН) 2 до конечной концентрации, соответственно равной 0,001 и 0,01 М. Кристаллизация фосфорилазы b начинается через 15—20 мин (иногда через 1—2 ч). Для более полной кристаллизации раствор фермента оставляют на ночь при О—4° С. На следующий день суспензию центрифугируют (15000 , 5—20 мин лри О—4° С), осадок растворяют в 30 мМ Na-p-глицерофосфате, pH 6,8, содержащем 30 мМ L-цистеин (или 2-меркаптоэтанол) при 30° С. Нерастворившийся белок отделяют центрифугированием и отбрасывают. К супернатанту вновь добавляют АМФ и Mg (СНзСООН) 2 в той же концентрации. [c.222]

ЭДТА — 4 мМ раствор — 0,1%-ный 2-меркаптоэтанол (готовят перед употреблением), pH 7,0. [c.225]

Na-p-глицерофосфат 100 мМ — 4 мМ ЭДТА — 0,1%-ный 2-меркаптоэтанол (последний добавляют перед использованием), pH 8,2 (буфер А). [c.225]

Биохимия Том 3 (1980) -- [ c.158 , c.173 ]

Аналитическая химия молибдена (1962) -- [ c.73 ]

Реакции нитрилов (1972) -- [ c.186 ]

Фотометрический анализ издание 2 (1975) -- [ c.292 ]

Вредные органические соединения в промышленных сточных водах 1982 (1982) -- [ c.109 ]

Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков (1974) -- [ c.396 , c.411 , c.415 , c.424 , c.425 ]

Основы биологической химии (1970) -- [ c.89 ]

Введение в ультрацентрифугирование (1973) -- [ c.145 ]

Аналитическая химия молибдена (1962) -- [ c.73 ]

Водорастворимые пленкообразователи и лакокрасочные материалы на их основе (1986) -- [ c.73 ]

Начала органической химии Кн 2 Издание 2 (1974) -- [ c.660 ]

Практическая химия белка (1989) -- [ c.87 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология