Электрофоретическое разделение

Изоэлектрофокусирование — один из вариантов электрофоретического разделения макромолекул. Принцип метода состоит в следующем. Если на колонку, вдоль длины которой сформирован градиент pH, нанести образец белка, а потом подключить концы колонки к источнику тока, то молекулы белка будут двигаться по колонке до тех пор, пока не достигнут той области, где величина pH окажется равной величине изоэлектрической точки белка. Для создания градиента pH используются сложные смеси амфотерных соединений, по-разному обозначаемые фирмами-изготовителями (например, амфолины, фармалиты, сервали-ты и т. д.). Эти соединения обычно имеют небольшую молекулярную массу (400—800 Да) и получаются пууем химического синтеза. Общая формула некоторых типов амфолитов может быть представлена в виде [c.98]

Для высаливания или желатинирования белков целесообразно приводить их в изоэлектрическое состояние. Этого можно достигнуть, поместив белки в буферный раствор со значением pH, равным их изоэлектрической точке. В других случаях, например при электрофоретическом разделении белков, нужно, чтобы они, наоборот, имели достаточный заряд. Для этого белковую смесь помещают в буферные растворы со значением pH, отличающимся от их изоэлектрической точки. [c.188]

ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОЕ РАЗДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ [c.88]

Электрофоретическому разделению можно подвергать и сложные белки — нуклеопротеиды, глюко- и липопротеиды, а также другие смеси веществ, частицы которых имеют достаточный электрический заряд. [c.191]

В настоящее время существует множество вариантов как метода Максама — Гилберта, так и метода Сэнгера. Главное, эти методы удалось полностью автоматизировать. Так, например, при секвенировании ДНК по Сэнгеру на 5 -конец праймера вводят флуоресцентные метки, причем для каждого из четырех анализируемых нуклеотидов используются флуоресцирующие агенты с различными спектральными характеристиками. После электрофоретического разделения гель сканируется при четырех различных длинах волн и полученная информация сразу обрабатывается на ЭВМ. При этом все биохимические операции также проводятся роботом. [c.19]

При разделении нуклеиновых кислот используют те же методы, что и при фракционировании белков, однако имеются ограничения, обусловленные большим диапазоном величин молекулярной массы (2-10 —Ы0 ° Да), отклонениями от глобулярной формы, различиями в четвертичной структуре (двухнитевые, однонитевые, кольцевые), значительным отрицательным зарядом в нейтральной области pH. Поэтому методы гель-фильтрации и ионообменной хроматографии не получили широкого распространения при фракционировании нуклеиновых кислот и значительно уступают ультрацентрифугированию и электрофоретическому разделению в геле агарозы, полиакриламидном геле или их смеси. Поскольку величина отрицательного заряда нуклеиновых кислот и продуктов их расщепления мало зависит от pH, а отношение заряда к молекулярной массе сохраняется практически неизменным, разделение нуклеиновых кислот при электрофорезе определяется не их зарядом, а размером молекул. При наличии маркеров с известной молекулярной массой возможно определение молекулярной массы препаратов нуклеиновых кислот и их фрагментов. [c.171]

Описано также электрофоретическое разделение полисахаридов в щелочном буфере [35]. [c.50]

При электрофорезе аминокислоты движутся либо к катоду, либо к аноду, в зависимости от pH раствора. На этом явлении основан метод электрофоретического разделения аминокислот, имеющих ра.зличные изо-электрические точки. [c.731]

Белки, обработанные концентрированным раствором додецилсуль-фата натрия в присутствии р-меркаптоэтанола, распадаются на отдельные полипептидные цепи и приобретают отрицательный заряд, значительно превышающий собственный заряд белковой молекулы. При последующем разделении с помощью диск-электрофореза в полиакриламидном геле белковые зоны распределяются на электрофореграммах таким образом, что подвижность белковой зоны обратно пропорциональна логарифму молекулярной массы. Метод дает возможность определять молекулярные массы субъединиц олигомерных белков. Электрофоретическое разделение можно проводить различными методами. Ниже описаны два из них метод Вебера и Осборн, а также метод, предложенный Лэммли. [c.119]

Ранее указывалось, что студни — хорошая среда для электрофоретического разделения веществ. Они же являются питательной средой для многих видов бактерий. [c.224]

Студентам предлагается провести электрофоретическое разделение белков сыворотки крови. [c.92]

Кроме электрофореза на бумаге, п последнее время широкое распространение получили методы электрофоретического разделения веп еств на полиакриламидном, агаровом геле, крахмале и т. д. [c.38]

Название студень для полимерных систем было предложено Н. П. Песковым. В настоящее время понятия студень и гель смешивают. Например, структурированную среду для электрофоретического разделения называют поли.акриламидным гелем. [c.224]

Работа 7. Электрофоретическое разделение ионов неорганических веществ [27, 28, 111] [c.126]

Проведение электрофореза. Разделение можно проводить как в трубочках (с. 95), так и на пластинах для вертикального электрофореза (с. 97). После обработки ДСН к образцам добавляют сахарозу (до концентрации 10%) и в качестве лидирующего красителя — бромфеноловый синий (до концентрации 0,001%). Образцы исследуемых белков и белков-маркеров наносят на поверхность геля в объеме от 20 до 100 мкл (каждого или смеси нескольких образцов) и осторожно наслаивают электродный буфер. Нагрузка на гель определяется методом окраски гелей, а также способностью того или иного белка связывать используемый краситель. Как правило, при электрофорезе в трубочках удается обнаружить от 20 до 100 мкг белка, при электрофорезе в пластинке — от 4 до 15 мкг. В электродный буфер катодного отделения добавляют ДСН до концентрации 0,1%. Электрофоретическое разделение проводят при комнатной температуре и силе тока 8 мА на трубочку. При этом сначала устанавливают силу тока - [c.120]

В практической медицине все шире применяются методы электрофоретического разделения белковых фракций, хроматографии различных компонентов биологических жидкостей, определение концентрации водородных ионов и др. [c.7]

НЫМ ИХ изоэлектрической точке. В других случаях, например при электрофоретическом разделении белков, нужно, чтобы они, наоборот, имели достаточный заряд. Для этого белковую смесь помещают в буферные растворы со значением pH, отличающимся от их изоэлектрической точки. [c.217]

ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОЕ РАЗДЕЛЕНИЕ ПОЛИСАХАРИДОВ [c.48]

Наиболее совершенная и довольно сложная конструкция аппарата для электрофоретического разделения, предложенная Тизелиусом, основана на методе подвижной границы. Компоненты раствора (например, плазмы крови), обладающие различными подвижностями, пространственно разделяются в U-образном сосуде после длительного электрофореза. Оптическая система построена так, что свет, проходящий через сосуд в нормальном к нему направлении, преломляется на границах, которые разделяют растворы отдельных компонентов. [c.218]

Электрофоретическое разделение проводят в течение 60—90 мин при напряженности электрического поля 4—5 В/см или силе тока 5 мА на трубку. В качестве лидирующего красителя используют рас- [c.173]

В некоторых случаях перед разделением опытных смесей до добавления белка предварительно проводят электрофорез, при котором удаляются побочные продукты полимеризации, которые могут ухудшить электрофоретическое разделение, а также персульфат аммония, который ингибирует активность некоторых ферментов Условия предварительного электрофореза сила тока — 3—5 мА, напряжение — 200—400 В, продолжительность — около 60 мин [c.96]

Зависимость (18.2) лежит в основе электрофоретического разделения заряженных частиц. Если проводить разделение в трубчатой ячейке, то при наложении электрического поля образуются зоны, скорость перемещения которых определяется электрофоретической подвижностью частиц, составляющих зону. Следует заметить, что для крупных частиц электрофоретическая подвижность обычно не зависит от их размеров, что затрудняет разделение больших молекул. [c.581]

Электрофоретическое разделение в ячейке Тизелиуса применяется для определения гомогенности полисахаридов и определения числа компонентов в смесях полисахаридов. [c.48]

Кроме силы электрического поля, на движение ионов решаюш,ее влияние оказывают сопротивление среды, форма самих ионов и их гидратация. Количественная оценка этих факторов не входит в рамки этой главы. Однако необходимо иметь в виду, что воспроизведение электрофоретического разделения возможно лишь в тех случаях, когда строго соблюдаются все условия опыта (сила тока, напряжение, среда, в которой проходит разделение, концентрация веш,ества, температура, продолжительность опыта, ионная сила, качество применяемого буфера и т. д.). [c.529]

Наиболее совершенная и довольно сложная конструкция аппарата для электрофоретического разделения, предложенная Тизе-лиусом, в принципе основана на методе подвижной границы. Компоненты раствора (например, плазмы крови), обладающие различными подвижностями, пространственно разделяются в /-образном сосуде после длительного электрофореза. Оптическая [c.215]

Методы электрофоретического разделения в полиакриламидном и агарозополиакриламидном гелях широко используются в настоящее время для фракционирования нуклеиновых кислот. Преимуществом этих методов является их простота и возможность контролировать ве-нДичину пор геля. При наличии маркёров с известной молекулярной массой или коэффициентом седиментации очи могут быть использованы для характеристики относительной молекулярной массы выделенных препаратов нуклеиновых кислот. [c.173]

Основной частью препаративных электрофоретических приборов этого типа является и-образная кювета, соединенная с электродным пространством посредством буферного раствора (рис. 476), Кювета состоит нз отдельных е+с частей, соединяющихся плоскими шлифами. Кювету наполняют раствором разделяемой смеси и приступают к электрофоретическому разделению, Разобрав кювету, можно выделить каждую из разделенных фракций. При помощи обычных электрофоретических приборов этого типа можно разделить не более 100 мг вещества, причем за одну операцию более или менее полно удается разделить только наиболее кислые и наиболее основные компоненты смеси. [c.534]

Метод капиллярного электрофореза также используется в /х-СПА-устройствах. Проба и буферный раствор вводятся в капилляр. При создании разности потенциалов на концах капилляра наблюдается протекание двух процессов. Первый, называемый электрофоретическим разделением, представляет собой движение положительно или отрицательно заряженных индивидуальных ионов в жидкости под влиянием приложенного поля. Второй процесс называется электро-осмотическим переносом и приводит к движению всей жидкости в капилляре. Реализация этого процесса обусловлена существованием двойного электрического слоя (слоя Гельмгольца) вблизи стенок капилляра. Этот слой образован неподвижными отрицательными зарядами на стенках капилляра (ионизированные силанольные группы) и положительно заряженными ионами из жидкости, которые притягиваются отрицательными зарядами. Если вектор напряженности электрического поля направлен вдоль капилляра, то электростатические силы приводят в движение слой подвижных положительно заряженных ионов. В конечном счете, благодаря молекулярному взаимодействию между слоями жидкости (вязкость жидкости), вся жидкость в капилляре приходит в движение. [c.646]

Электрофоретическое разделение — разделение индивидуальных молекул под действием электрического поля, приложенного вдоль капилляра. [c.646]

Для каждой аминокислот1з1 характерна своя величина рТ, которая определяется строением боковой цепи К (ср. табл. 20). Вследствие этого в буферном растворе с постоянным pH разные аминокислоты несут неодинаковые по величине (а иногда — и по знаку) заряды, что сказывается на скорости и направлении их движения в электрическом поле. Это явление используется для электрофоретического разделения аминокислот на бумаге или на крахмале (электрофорез на носителях). Различия в зарядах аминокислот оказывают также влияние на их способность обмениваться с другими ионами. В сочетании с эффектом [c.350]

Электрофоретическое разделение полисахаридов может быть осуществлено различными путями под действием электрического тока в растворе (электрофорез с подвижной границей в ячейке Ти-зелиуса) на полосках бумаги, на листах бумаги из стеклянного волокна, на лентах из чистого отбеленного шелка, на колонках, заполненных стеклянным порошком (зонный электрофорез). [c.48]

Электрофоретическое разделение белков проводят как в трубочках, так и в тонком слое полиакриламидного геля (слэбе). [c.94]

На полоски хроматографической бумаги шириной 4—5 см на линию старта наносят ш,елочной гидро лизат РНК (10—20 мкл) и растворы нуклеотидов- свидетелей по 0,1—0,15 мкмоль каждого. Электрофорез проводят в течение 5 ч при силе тока 0,5 мА на 1 см поперечного сечения бумаги. Для определения времени окончания электрофоретического разделения можно использовать окрашенный маркер, например 1%-ный раствор ксиленцианола, который движется быстрее самого подвижного компонента смеси. Локализацию рибомононуклеотидов проводят в ультрахемископе. Подвижность нуклеотидов от катода к аноду возрастает в ряду цитидиловая, адениловая, гуаниловая и уридиловая кислоты. Для количественного определения участки электрофореграмм, поглощающие в ультрафиолетовой области, очерчивают простым карандашом, вырезают, измельчают и элюируют нуклеотиды 4—5 мл 0,01 н. раствора НС1 в течение 4—5 ч. В элюатах определяют поглощение на спектрофотометре при длине волны, характерной для каждого нуклеотида (см. Приложение, с. 499), рассчитывают количество их в микромолях и в процентах по отношению к сумме всех нуклеотидов в щелочном гидролизате РНК. [c.181]

Средневольтный электрофорез (описание прибора см. на с. 138). В качестве электродного буфера используют ацетатно-аммонийный буфер 0,15 М, который получают разведением реактива № 1 (pH не должен превышать 3,4—3,5). Электрофоретическое разделение проводят в течение 3 ч при градиенте напряжения 30 В/см. [c.181]

При последовательном пропускании двух растворителей достигается хорошее разделение рибомононуклеотидов. Rf увеличивается в ряду адениловая, цитидиловая, уридиловая и гуаниловая кислоты. Обнаружение и количественное определение нуклеотидов -проводят так же, как после электрофоретического разделения (с. 181). [c.182]

Если при электрофоретическом разделении на диаграмме будет получен один пик, это еще не значит, что исследуемый полисахарид является однородным, так как несколько полисахаридов могут иметь одинаковую подвижность. Смена буфера помогает иногда выявить различия в полисахаридах. Вещество можно считать электрофоретически гомогенным, если для полисахарида наблюдается единственный пик в различных буферных растворах. [c.49]

Второй метод электрофоретического разделения полисаридов основан на применении твердых носителей [34]. [c.49]

Электрофоретическое разделение углеводов проводят на бумажных полосах, длина которых определяется рамкой прибора для электрофореза. При работе на приборе ЭФА-1 ленты (2,5X40 см) смачивают боратным буферным раствором с pH 9,2 и помещают на рамку прибора. Смесь углеводов наносят на полоски хроматографической бумаги (3X15 мм), которые помещают на ленты. Электрофорез проводят в боратном буферном растворе с pH 9,2. [c.86]

При электрофоретическом разделении наиболее подвижна фракция, содержащая глюкуроноарабоксилан. [c.266]